MÔŽE GRÜNWALD-GIEMSA FARBIŤ: ZDÔVODNENIE, TECHNIKA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2025

May Grünwald-Giemsa alebo Pappenheim škvrna je diferenciálnej farbenie technika, ktorá zmesi Giemsa a May Grünwald činidlá. Používa sa na diferenciáciu normálnych a abnormálnych krvných buniek v náteroch periférnej krvi a kostnej drene, ako aj na farbenie histologických rezov a cytologických vzoriek.

Činidlá - Gemsa a May Grünwald - sú odvodené z farbenia Romanowského typu, čo je technika, ktorá je založená na kombinácii kyslých a zásaditých farbív.

Náter vykazujúci segmentovaný neutrofil a milleocyt v prípade chronickej myeloidnej leukémie, zafarbený farbením May Grünwald Giemsa. Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) prostredníctvom Wikipedia.org.

Giemsa zlepšil túto techniku ​​stabilizáciou zmesi eozínu, metylénovej modrej a ich derivátov s glycerolom. Namiesto toho May Grünwald používa eozín a metylénovú modrú s použitím metanolu ako rozpúšťadla. Táto strategická kombinácia priniesla vynikajúce výsledky.

Aj keď z hľadiska pozorovania morfológie buniek pôsobí podobným spôsobom ako Giemsa a Wrightove škvrny, táto technika zlepšuje tie predchádzajúce tým, že zjemňuje zafarbenie parazitov, ktoré spôsobujú maláriu, Chagasovu chorobu, leishmaniózu a trichomoniázu.

Okrem toho sa ukázalo ako veľmi užitočná technika pre cytologické štúdium spermatickej tekutiny. Vyniká nielen tým, že vykazuje morfologické vlastnosti spermií, ale tiež umožňuje veľmi účinnú diferenciáciu leukocytov, epitelových buniek a buniek spermatogenézy.

základ

Táto technika je založená na vzniku Romanowského farbenia, pri ktorom kyslé farbivá majú selektívnu afinitu k základným bunkovým zložkám a kyslé zložky priťahujú zásadité škvrny.

Inými slovami, bunkové štruktúry aj farbivá majú kladné alebo záporné elektrické náboje; ako sú poplatky, ktoré odpudzujú a rôzne poplatky priťahujú.

Napríklad základné farbivá, ako je metylénová modrá, sú nabité pozitívne a priťahujú sa k negatívne nabitým štruktúram. Preto toto farbivo zafarbí jadrá bohaté na DNA a RNA, ktoré majú negatívne nabité fosfátové skupiny.

Farbia sa tiež granule segmentovaných bazofilov a cytoplazmy jednojadrových bielych krviniek obsahujúcich RNA.

Kyslé farbivo nesie tiež negatívny náboj, a preto sa viaže na pozitívne nabité štruktúry, ako sú erytrocyty a granule segmentovaných eozinofilov. Pokiaľ ide o granule segmentovaných neutrofilov, tieto fixujú obe farbivá.

Rôzne farbivá

Pri tejto technike koexistuje kombinácia reakcií medzi ortochromatickými a metachromatickými farbivami. Orthochromatiká (eozín a metylénová modrá) sa viažu na bunkovú štruktúru, ku ktorej sú príbuzné, a poskytujú stabilnú farbu, ktorá sa nemení.

Na druhej strane metachromáty (deriváty azénovej metylénovej modrej A a azúrovej B) menia svoju pôvodnú farbu, keď sú pripojené k špecifickej štruktúre, a dokonca môžu existovať rôzne odtiene.

Nakoniec, krok, ktorý májové riešenie podľa Grünwalda vyžaduje, vyžaduje prítomnosť vody, pretože bez tohto bude farbivo prenikať do štruktúr, ale nebude sa fixovať. Aby sa to stalo, musí sa farbivo stať polárnym alebo ionizujúcim, a teda musí byť schopné vyzrážať a viazať sa na súvisiace štruktúry.

technika

materiály

- Posuňte snímky.

- Mosty sfarbenia.

- májovo-Grünwaldovo riešenie.

- Giemsa škvrna.

- Destilovaná voda.

Môže koncentrovaný roztok farbiva podľa Grünwalda

Naváži sa 0,25 g eozín-metylénovej modrej (farbenie podľa May Grünwald) a rozpustí sa v 100 ml metanolu. Potom sa prípravok mieša 1 hodinu a nechá sa odpočívať 24 hodín. Na konci času sa filtruje.

Aby sa táto technika mohla uplatniť, musí sa May Grünwaldovo farbivo nariediť takto: v prípade 200 ml zriedeného farbiva odmerajte 30 ml koncentrovaného roztoku, pridajte 20 ml tlmivého roztoku a 150 ml destilovanej vody upravenej na pH 7,2 - 7,3. , Neskôr sa mieša a filtruje.

Koncentrát farbiva Giemsa

Musí sa odvážiť 0,5 g azúrovo-eozín-metylénovej modrej (farbenie podľa Giemsy), rozpustiť v 50 ml metanolu a do zmesi pridať 50 ml glycerínu.

Na vykonanie tejto techniky zrieďte 1:10 tlmivým roztokom a nechajte ho stáť 10 minút. V prípade potreby sa môže filtrovať.

Príprava tlmivého roztoku pri pH 7,2

Mali by sa zvážiť:

- 40 mg dihydrogenfosforečnanu draselného (KH2PO4).

- 151 mg 12-hydrátu hydrogenfosforečnanu sodného (Na2HP04).

Obe zlúčeniny sa rozpustia v 100 ml vody.

Postup pri farbení krvi alebo kostnej drene

Existujú dva režimy: klasický a rýchly.

Klasický režim

1. Náter zakryte 2 až 3 minúty zriedeným roztokom May-Grünwald.
2. Premyte destilovanou vodou s pufrom, aby ste odstránili predchádzajúci roztok.
3. Zakryte rovnakým pufrovaným premývacím roztokom a nechajte pôsobiť 1 minútu. Ide o to, že predchádzajúce farbivo sa viaže na štruktúry a súčasne sú bunky hydratované.
4. Pridajte 12 kvapiek zriedenej tinktúry Giemsa do pufrovanej vody a vyfúknite, aby sa premiešala a homogenizovala. Nechajte odpočívať 15 až 20 minút.
5. Šmuhy umyte pufrovanou destilovanou vodou a nechajte ich uschnúť na vzduchu.
6. Zaostrte a pozerajte zafarbené krvinky pod svetelným mikroskopom s použitím objektívu 40X. V prípade potreby je možné použiť model 100X.

Rýchly režim

1. Náter zakryte zriedenou May Grünwaldovou farbou na 1 minútu.
2. Premýva sa destilovanou vodou s tlmivým účinkom.
3. Zakryte pufrovanou vodou a nechajte ju 1 minútu odpočívať.
4. Pridajte zriedené farbivo Giemsa a nechajte pôsobiť 5 minút.
5. Opláchnite pufrovanou destilovanou vodou a nechajte uschnúť na vzduchu.

Techniky opísané v tomto dokumente sú usmernením, je však potrebné vziať do úvahy, že postupy a časy zafarbenia sa líšia v závislosti od komerčnej spoločnosti, ktorá distribuuje činidlá. Je vhodné postupovať podľa krokov, ktoré presne uvádza každý komerčný dom.

Technika na farbenie náterov spermatickej tekutiny

1 - Náter zakryte tenkou vrstvou roztoku May Grünwald po dobu 4 minút.

2. Odstráňte farbivo a umyte ho destilovanou vodou.

3. Vložte vrstvu nariedenej Giemsy (1:10) do destilovanej vody na 15 minút.

4. Odstráňte farbivo a umyte ho destilovanou vodou.

5- Nechajte uschnúť a pozorujte pod mikroskopom.

Očakávané farby so škvrnou May Grünwald Giemsa

Dôležité špecifikácie

Táto technika vyžaduje, aby pH reakčných činidiel a premývacích roztokov bolo upravené na 7,2 až 7,3, takže afinity farbív pre bunkové štruktúry nie sú zdeformované a očakávaná konečná farba sa nemení.

aplikácia

Túto techniku ​​používajú klinické laboratóriá na farbenie náterov z periférnej krvi a kostnej drene, rezov tkanív a cytologií.

V hematologickej oblasti má táto technika zásadný význam pri štúdiu abnormalít buniek z hľadiska tvaru, veľkosti a počtu. Je to veľmi cenný nástroj na diagnostiku určitých chorôb, ako sú leukémie a anémie.

Okrem toho je mimoriadne užitočný pri hľadaní parazitov v hematologických oblastiach (Plasmodium sp a Trypanosoma cruzi) alebo histologických (Leishmanias sp).

Vaginálna cytologia

Pokiaľ ide o vaginálnu cytológiu, táto technika je zvlášť výhodná na pozorovanie Trichomonas vaginalis. Toto je dôležité zistenie, pretože jeho prítomnosť simuluje karcinómové obrazy in situ, ktoré neskôr zmiznú po odstránení parazita.

Vzorka spermií

Je to ideálny nástroj na štúdium vzoriek spermií, pretože poskytuje cenné informácie o kvalite spermií.

Údaje, ktoré poskytuje, sa týkajú hlavne počtu a morfológie, ako aj sprievodných buniek, ktoré môžu byť prítomné a ktoré sú životne dôležité, ako sú zárodočné bunky, leukocyty a epitelové bunky.

Touto analýzou je možné opísať abnormality pozorované v sperme v hlave, krku, strednom kuse a hlavnom kuse.

Okrem toho môžu tiež pomôcť ukázať prípady hemospermie (prítomnosť červených krviniek v sperme) a leukospermie alebo piospermie (zvýšený počet leukocytov v sperme).

Referencie

1. Costamagna S, Prado M. Validácia čerstvého testu, zafarbenie Grünwald-Giemsa a Gram a kultivačné médiá na diagnostiku Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1 - 2): 60 - 64. K dispozícii v: scielo.
2. Laboratórium Merck KGaA. Môže mikroskopická eozínová metylénová modrá Grünwalda.
3. "May-Grünwald-Giemsa škvrna." Wikipedia, slobodná encyklopédia. 15. novembra 2018, 14:37 UTC. 8. januára 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. Laboratórium skla pre chemické látky Panreac. Činidlá pre histologické techniky, hematológiu a mikrobiológiu. K dispozícii na adrese: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Odporúčanie na farbenie krvných náterov na odčítanie hemogramu. Národné a referenčné biomedicínske laboratórium. Čilský ústav verejného zdravia.
6. Sarabia L. Spermiogram podľa kritérií WHO. Program vývojovej anatómie a biológie. Lekárska fakulta. Čilská univerzita. K dispozícii na: pp.centramerica.com