TIOGLYKOLÁTOVÝ BUJÓN: ZDÔVODNENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Tioglykolát vývar je médium obohatené tekutej konzistencii. Skratka FTM je známa skratkou anglického tekutého tioglykolátového média. Vytvoril ho Brewer a upravil ho v roku 1944 Vera, ktorý k nemu pridal kazeínový peptón.

Toto médium má nízky oxidačno-redukčný potenciál, preto sa neodporúča na vývoj prísnych aeróbnych baktérií, ale je ideálny na regeneráciu fakultatívnych aeróbnych, prísnych anaeróbnych a nenáročných mikroaerofilných baktérií.

Tioglykolátový vývar bez indikátora. Ukazuje vaginálny výtok. Zdroj: Bobjgalindo

Vysoký výkon, ktorý sa pri tomto médiu zistil pri izolácii a regenerácii širokého spektra mikroorganizmov, ho urobil akceptovaným liekom United States Pharmacopeia (USP), Úradnou asociáciou poľnohospodárskych chemikov (AOAC) a Európskym liekopisom ( EP).

Tieto organizácie ho odporúčajú na testovanie sterility farmaceutických výrobkov a na obohatenie rôznych typov vzoriek.

Kadio tioglykolát sa skladá z kvasnicového extraktu, pankreatického trávenia kazeínu, bezvodej dextrózy, L-cystínu, chloridu sodného, ​​tioglykolátu sodného, ​​resazurínu a agaru v malom množstve.

Existuje niekoľko verzií tohto média, medzi nimi sú: tioglykolát vývar s indikátorom, tioglykolát vývar bez ukazovatele, tioglykolát vývar s indikátorom obohatené hemín a vitamínu K _1, a tioglykolát vývar s uhličitanom vápenatým.

Variant tioglykolátového bujónu obohatený hemínom a vitamínom K slúži najmä na zvýšenie rastu náročných anaeróbov a variant tioglykolátového bujónu obsahujúci uhličitan vápenatý je užitočný na pôsobenie proti kyselinám produkovaným počas mikrobiálneho rastu.

základ

Tioglykolátový bujón sa považuje za neselektívne obohacovacie médium, pretože umožňuje rast väčšiny najnáročnejších baktérií. Nutričné ​​požiadavky sú stanovené v kvasinovom extrakte, pankreatickom štiepení a glukóze.

Na druhej strane, toto médium, napriek tomu, že je vývarom, obsahuje malé množstvo agaru; To znamená, že má nízky potenciál redukcie oxidácie v dôsledku skutočnosti, že spomaľuje prívod kyslíka takým spôsobom, že kyslík klesá, keď prechádza hlbšie do trubice.

Preto je toto médium ideálne na vývoj fakultatívnych aeróbnych, mikroaerofilných a prísnych anaeróbnych baktérií, pričom druhé médium je potrebné za týchto podmienok inkubovať. Rovnaké médium reguluje množstvo kyslíka v médiu, ktoré chýba na dne skúmavky av dostatočnom množstve na povrchu.

Podobne tioglykolát a L-cystín pôsobia ako redukčné činidlá, čo pomáha predchádzať hromadeniu látok, ktoré sú škodlivé pre bakteriálny vývoj, ako je peroxid. Okrem toho tieto zlúčeniny obsahujú sulfhydrylové skupiny (-SH-), ktoré neutralizujú inhibičné účinky derivátov ortuti, arzénu, okrem iných ťažkých kovov.

Resazurín je indikátorom redukcie oxidu. Táto látka je bezfarebná, keď je redukovaná, a ružová, keď je oxidovaná. Existujú varianty indikačného a neindikčného tioglykolátového bujónu. Jeho použitie bude závisieť od typu vzorky a preferencie laboratória.

Medzitým chlorid sodný udržuje osmotickú rovnováhu tioglykolátového bujónu a použitie glukózy v bezvodej forme zabraňuje prebytočnej vlhkosti v dehydratovanom médiu.

príprava

Tioglykolátový bujón s indikátorom

Naváži sa 29,75 g dehydratovaného média a rozpustí sa v 1 litri destilovanej vody. Zmes sa nechá stáť približne 5 minút. Priveďte na zdroj tepla a často miešajte, kým sa úplne nerozpustí.

Nalejte médium do skúmaviek a autoklávujte pri 121 ° C po dobu 15 minút. Pred použitím nechajte vychladnúť. Skontrolujte vložku komerčného domu z hľadiska jej zachovania. Niektorí odporúčajú uchovávať pri izbovej teplote na tmavom mieste a iní v chladničke chránenej pred svetlom.

PH pripraveného média je 7,1 ± 0,2.

Farba dehydratovaného média je svetlo béžová a pripravené médium je svetlo jantárové s trochou opalescencie.

Tioglykolátový bujón s indikátorom obohatený hemínom a vitamínom K

Existujú komerčné médiá, ktoré už obsahujú hemín a vitamín K ₁ , najmä na pestovanie anaeróbov.

Ak nemáte obohatené médium na anaeróbne látky, môžete pripraviť základný tioglykolátový vývar. Pre tento účel, 10 mg hemínu hydrochloridu a 1 mg vitamínu K _{1 sú pridané} pre každý liter média. Ak sa však do tioglykolátového bujónu pridá krv alebo sérum, pridanie hemínu alebo vitamínu K nie je potrebné.

Tioglykolátový bujón s uhličitanom vápenatým

Dodáva sa komerčne a je pripravený podľa pokynov na vložke.

Tioglykolátový vývar bez indikátora

Toto má rovnaké zloženie ako bázický tioglykolát, ale neobsahuje resazurín.

Navážte 30 g dehydratovaného média a rozpustite v litri destilovanej vody. Zvyšok prípravku je rovnaký ako prípravok opísaný v tioglykolátovom bujóne s indikátorom.

použitie

Tioglykolátový bujón je užitočný na obohatenie klinických vzoriek, najmä vzoriek zo sterilných miest. Je tiež užitočný pre neklinické vzorky, ako sú kozmetika, lieky atď.

Na naočkovanie kvapalných vzoriek (ako je napríklad CSF, synoviálna tekutina, okrem iného) sa vzorky najprv odstredia a potom sa odoberú 2 kvapky sedimentu a umiestnia sa do tioglykolátového bujónu. Inkubujte pri 35 ° C 24 hodín. Ak v tejto dobe nedochádza k rastu (zákal), inkubuje sa najviac 7 dní.

Ak sa vzorka odoberie tampónom, kultivačné médium sa najskôr naočkuje doštičky a nakoniec sa tampón vloží do vývaru, vyčnievajúca časť sa rozdelí a skúmavka sa uzavrie, pričom tampón zostane vo vnútri. Inkubujte pri 35 ° C po dobu 24 hodín, maximálne 7 dní.

Pokiaľ ide o pevné vzorky, homogenizujte ich vo fyziologickom roztoku (SSF) a potom naočkujte tioglykolátový bujón 2 kvapkami suspenzie.

Niekedy sa môže použiť ako transportné médium pre vzorky, u ktorých existuje podozrenie na prísne anaeróby, alebo ako záložný obohacovací vývar.

Variant tioglykolátového bujónu s uhličitanom vápenatým sa používa na udržanie kontrolných kmeňov dlhšie, pretože má schopnosť neutralizovať kyseliny produkované pomocou glukózy; Tieto kyseliny sú toxické pre určité baktérie.

Rast v tioglykolátovom bujóne bude pozorovaný zákalom média. Odporúča sa vykonať Gramovo farbenie a následne subkultúru v neselektívnych a selektívnych médiách v závislosti od typu vzorky a predpokladaných mikroorganizmov.

QA

Na kontrolu sterility sa odporúča inkubovať jeden alebo dva bujóny bez očkovania. Očakávaný výsledok je priezračný vývar bez zmeny farby, hoci je normálne vidieť na povrchu skúmavky mierne ružovú farbu.

Na kontrolu kvality by sa malo naočkovať 10 až 100 CFU certifikovaných kontrolných kmeňov, ako napríklad Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium 11437 sporogenes Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Inkubujte pri aerobióze pri 30 - 35 ° C počas 24 hodín až maximálne 3 dni, pretože tieto mikroorganizmy rýchlo rastú.

Dobrý vývoj sa očakáva vo všetkých prípadoch, s výnimkou Micrococcus luteus a Bacillus subtilis, kde môže dôjsť k miernemu vývoju.

Na kontrolu kvality tioglykolát pôdy obohatené hemín a vitamín K ₁ , kontrolné kmene Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 a Bacteroides fragilis ATCC 25285 môže byť použitý. Očakávaný výsledok je uspokojivý rast.

odporúčanie

- občas je možné pozorovať, že povrch tioglykolátového bujónu s indikátorom zčervenal; Je to kvôli oxidácii média. Ak ružová farba pokrýva 30% alebo viac celkového vývaru, môže byť zahrievaná vo vodnom kúpeli po dobu 5 minút, znova ochladená a použitá.

Týmto sa absorbovaný kyslík odstráni a médium sa vráti do pôvodnej farby. Tento postup je možné vykonať iba raz.

- Na zlepšenie rastu aeróbnych baktérií inkubujte s vekom mierne uvoľneným. Na správny vývoj prísnych aeróbov je však vhodné na tento účel použiť infúzny bujón s mozgovým srdcom alebo sójový bujón s tryptikázou.

- Malo by sa zabrániť zamrznutiu média alebo prehriatiu, pretože obe podmienky médium poškodzujú.

- Priame svetlo poškodzuje kultivačné médium, musí sa skladovať chránené pred svetlom.

Referencie

1. Britannia Laboratories. Tioglykolát USP s indikátorom. 2015.K dispozícii na: labBritania.com.
2. Laboratóriá spoločnosti Chios Sas. 2019. Tioglykolátový bujón. K dispozícii na adrese: quios.com.co
3. Laboratóriá BD tekuté tioglykolátové médium (FTM). 2003. Dostupné na: bd.com/Europe
4. Médium BBL pripravené v skúmavkách na kultiváciu anaeróbnych mikroorganizmov. Tioglykolátové médiá. 2013. K dispozícii na: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentína.