- základ
- príprava
- - Tratrationátový vývar
- Roztok jódu
- Základné médium pre bujón na báze tetrationiónu
- -Tratrationátový vývar s jasne zelenou farbou
- Svieti zelená
- použitie
- QA
- odporúčanie
- Referencie
Tetrathionát vývar alebo vývar TT je selektívna kvapalné kultivačné médium pre obohatenie a obnovu kmeňov rodu Salmonella. Vytvoril ho Müeller a neskôr ho upravil Kauffmann, a preto sú aj takí, ktorí ho nazývajú vývar Müeller-Kauffmann.
Pôvodné médium obsahovalo proteózové peptony, uhličitan vápenatý a tiosíran sodný. Kauffmann k nemu pridal žlčové soli a vytvoril ďalšiu modalitu so svetlozelenou farbou. Tieto látky inhibujú rast koliformných baktérií, pričom médium nechávajú voľné na vývoj patogénnych baktérií, v tomto prípade na Salmonella.
Pridanie roztoku jódu a jódu do média na báze tetrationiónu. Zdroj: Manuel Almagro Rivas
Modifikácia bola veľmi úspešná, pretože významne zvýšila citlivosť média. Z tohto dôvodu je v súčasnosti užitočné pri hľadaní salmonel v akomkoľvek type vzorky, ale najmä v prípade pevných alebo tekutých stolíc a potravín.
Jeho príprava pozostáva z dvoch fáz; Komerčné médium je báza na prípravu tetrathionátového bujónu a následne, aby sa mohol vytvoriť tetrationionát, pridá sa na dokončenie média jódový roztok jódu.
Americká asociácia pre verejné zdravie (APHA) odporúča na obohatenie vzoriek na salmonelu použitie bujónu tetrathionátu doplneného jasne zelenou farbou, pretože je selektívnejší ako bujón tetrationiónu a bujón seleničitanu.
Vo všeobecnosti je tetrathionátový bujón ideálny, keď existuje podozrenie na prítomnosť baktérií rodu Salmonella v malom množstve alebo ak sa zneužíva vystavením inhibičným látkam alebo priemyselnými procesmi, ktoré minimalizujú ich životaschopnosť.
základ
Prítomné peptony zodpovedajú pankreatickému štiepeniu kazeínu a peptickému štiepeniu živočíšneho tkaniva. Tieto poskytujú zdroj uhlíka, dusíka a všeobecných živín pre rast baktérií.
Tiosíran sodný reaguje s jódovaným roztokom za vzniku tetrathionátu. To inhibuje rast koliformných baktérií a podporuje vývoj baktérií, ktoré obsahujú enzým tetrathionát reduktázu, medzi nimi je rod Salmonella, ale aj proteín Proteus.
Žlčové soli tiež pôsobia ako inhibičná látka pre väčšinu grampozitívnych a niektorých gramnegatívnych baktérií (koliformných baktérií).
Uhličitan vápenatý absorbuje toxické látky vznikajúce rozkladom tetrathionátu, ktorý tvorí kyselinu sírovú. V tomto zmysle uhličitan vápenatý neutralizuje kyslosť a udržuje pH média stabilné.
V prípade jasne zelenej modality táto látka zvyšuje selektívnu silu bujónu tetrathionátu inhibíciou iných mikroorganizmov ako je rod Salmonella.
príprava
- Tratrationátový vývar
Roztok jódu
Vážiť:
- 6 gramov jódu.
- 5 g jodidu draselného.
Jodid draselný sa rozpustí v približne 5 ml sterilnej destilovanej vody, potom sa za zahrievania zmesi po častiach pridá jód. Po úplnom rozpustení doplňte destilovanou vodou po značku, až kým nedosiahnete konečný objem 20 ml.
Základné médium pre bujón na báze tetrationiónu
Navážte 46 gramov dehydratovaného média a suspendujte v 1 litri sterilnej destilovanej vody. Miešajte a zahrievajte, až kým sa úplne nerozpustí, môže to uvariť iba niekoľko minút. Nečakujte v autokláve. Báza média sa nechá ochladiť na približne 45 ° C a potom sa pridá 20 ml jódovaného roztoku.
Po pridaní jódovaného roztoku do média by sa mal okamžite použiť. Ak nechcete používať celú zmes, postupujte takto:
10 ml základného média sa rozdelí do skúmaviek a iba do skúmaviek, ktoré sa naočkujú vzorkami, sa pridá 0,2 ml jódovaného roztoku.
Tie, ktoré sa nebudú používať, sa dajú stále uchovávať v chladničke, ale keďže médium nie je sterilizované, ideálne je pripraviť presné množstvo, ktoré je potrebné.
Farba média pred pridaním roztoku jódu je mliečna biela s bielou zrazeninou a po pridaní je hnedá s hustou zrazeninou. Pozorovaná zrazenina je normálna a zodpovedá uhličitanu vápenatému, ktorý sa nerozpúšťa. Konečné pH média je 8,4 ± 0,2.
-Tratrationátový vývar s jasne zelenou farbou
Aby sa pripravil bujón zeleného tetrathionátu, uskutočnia sa všetky vyššie uvedené kroky, ale navyše sa k zmesi pridá 10 ml jasne zeleného roztoku pripraveného v 0,1%.
Svieti zelená
Tento roztok sa pripraví takto:
Navážte 0,1 g jasne zelenej farby a suspendujte v 100 ml destilovanej vody. Zahreje sa do varu, aby sa dosiahlo úplné rozpustenie. Uchovávajte v jantárovej fľaši.
použitie
V prípade vzoriek stolice (kultúra stolice) je nasledujúci protokol:
Naočkujte 1 g tuhej stolice alebo 1 ml tekutej stolice do skúmavky 10 ml hotového tetrathionátového bujónu. Silne pretrepte a inkubujte aeróbne pri 43 ° C počas 6-24 hodín.
Následne odoberte alikvotnú časť vývaru a subkultúry s objemom 10 až 20 µl v selektívnom médiu pre Salmonella, ako je napríklad agar SS, agar XLD, jasne zelený agar, enterický agar Hektoen.
Paralelne s tým by sa mali selektívne médiá pre salmonelu inokulovať priamou vzorkou (stolica) bez obohatenia. V prípade vzoriek z rektálneho tampónu vypustite zozbieraný materiál do skúmavky a postupujte podľa vyššie uvedeného popisu.
Pokiaľ ide o vzorky potravín, odvážte 10 g tuhého jedla alebo 10 ml tekutého jedla a naočkujte fľašu 100 ml hotového tetrathionátového vývaru. Postupujte rovnakým spôsobom, ako je opísané vyššie, ale inkubujte pri 37 ° C.
Ako je vidieť, vzťah medzi vzorkou a vývarom bude vždy 1:10.
QA
Na testovanie kultivačného média sa môžu použiť známe kontrolné kmene. Najpoužívanejšie kmene sú ATCC.
Použitými kmeňmi sú Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 a Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Vynikajúci rast sa očakáva pre kmene Salmonella, zatiaľ čo Escherichia coli môže mať slabý alebo pravidelný rast a grampozitívne kmene (Enterococcus a Staphylococcus) sú čiastočne alebo úplne inhibované.
odporúčanie
- Pretože toto médium neinhibuje rast bielkovín Proteus, niektoré laboratóriá používajú 40 mg / l novobiocínu, aby zabránili rozvoju tohto mikrobiálneho kmeňa. Antibiotikum sa musí pridať pred roztokom jódu.
- Po príprave média vrátane roztoku jódu a jódu by naočkovanie nemalo trvať dlhšie ako 2 hodiny.
- Pri distribúcii média v skúmavkách musí byť zmes neustále homogenizovaná, aby sa vytvorená zrazenina resuspendovala.
- V menej kontaminovaných vzorkách sa tetrathionátový bujón inkubuje pri 35 - 37 ° C a vo vysoko kontaminovaných vzorkách sa odporúča inkubácia pri 43 ° C.
Referencie
- Laboratórium Conda Pronadisa. 2010. Tetrrationátová bujónová základňa podľa Müeller-Kauffmanna. Dostupné v:
- Laboratóriá BD. 2003. Tetrathionátový bujónový základ. Dostupné v:
- Britannia Laboratories. 2015. Tetranátový základný bujón. Dostupné v:
- BBL Media. 2005. Pripravený v skúmavkách na kultiváciu druhov Salmonella.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentína.
- Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Porovnanie kultivačných médií seleničitanu sodného a tetrathionátu sodného, obidve inkubované pri 37 ° C a 42 ° C počas izolácia Salmonella spp z výkalov nosičov. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215 - 220