- základ
- príprava
- -Selenitový vývar
- - Príprava obchodného prostredia
- Varianta bujónu seleničitany a cystínu
- aplikácia
- osiatych
- QA
- obmedzenia
- Referencie
Seleničitan je selektívna kvapalné kultivačné médium. Bol navrhnutý spoločnosťou Leifson na obohatenie vzoriek, pri ktorých existuje podozrenie na prítomnosť enteropatogénnych baktérií rodu Salmonella.
Toto médium vyhovuje požiadavkám Americkej asociácie verejného zdravia (APHA), a preto je akceptované, okrem iného, na vyšetrenie prítomnosti salmonely vo vzorkách výkalov, moči, tekutých alebo tuhých potravín, vody.
Selenitový vývar. Zdroj: Fotografia zhotovená autorom MSc. Marielsa gil
Jeho chemické zloženie podporuje regeneráciu týchto mikroorganizmov a následne inhibuje rast ostatných. Je primárne toxický pre väčšinu baktérií patriacich do čeľade Enterobacteriaceae. Umožňuje však aj regeneráciu kmeňov Shigella a neinhibuje rast Pseudomonas a Proteus.
Skladá sa z bezvodého hydrogénsíranu sodného, bezvodého fosforečnanu sodného, peptonov a laktózy. Existuje tiež variant, do ktorého sa pridáva cystín, a preto jeho názov je seleničitanový cystínový vývar.
V súčasnosti je preferované použitie seleničitanovo-cystínového bujónu, pretože sa získa vyššie percento regenerácie salmonely, čo je ekvivalentné s tým, ktoré sa pozoruje pri iných selektívnych médiách na ten istý účel, ako je bujón tetrathionát sodný.
základ
Peptóny obsiahnuté v bujóne slúžia ako živiny pre správny vývoj mikroorganizmov. Kmene Salmonella používajú peptony ako zdroj dusíka, vitamínov a aminokyselín.
Laktóza je fermentovateľný uhľohydrát, zatiaľ čo seleničitan sodný je inhibičnou látkou, ktorá zastavuje rast grampozitívnych baktérií a väčšiny baktérií prítomných v črevnej flóre, najmä baktérií čeľade Enterobacteriaceae. Fosforečnan sodný je tlmivý roztok, ktorý stabilizuje pH média.
V prípade variantu selenitového bujónu obsahujúceho L-cystín je touto ďalšou zlúčeninou redukčné činidlo, ktoré minimalizuje toxicitu selenitu a zvyšuje výťažok salmonely.
príprava
-Selenitový vývar
Ak máte zložky zmesi, môžete odvážiť:
4 g bezvodého hydrogenuhličitanu sodného.
10 g bezvodého fosforečnanu sodného.
5 g melónov.
4 gramy laktózy.
Zlúčeniny sa rozpustia v 1 litri sterilnej destilovanej vody. Môže sa mierne zahriať, aby sa úplne rozpustil.
Niektoré laboratóriá vystavujú médium 10 minút v plynnej pare, aby ho sterilizovali, pretože by sa nemal používať autokláv. Ak je médium sterilizované, môže sa až do použitia uchovávať v chladničke.
Môže sa tiež pripraviť nesterilný a môže sa podávať priamo 10 až 15 ml do sterilných skúmaviek.
V takom prípade by sa malo nechať okamžite odpočívať a používať. Pretože médium nie je sterilné, nie je možné ho uložiť v chladničke na neskoršie použitie.
- Príprava obchodného prostredia
Ak je dostupné komerčné médium, odvážte 23 g dehydratovaného média a rozpustite ho v jednom litri sterilnej destilovanej vody. Krátko zahriať, aby sa rozpustenie skončilo. Nečakujte v autokláve. Asepticky podávajte 10 alebo 15 ml v sterilných skúmavkách.
Konečné pH média by malo byť 7,0 ± 0,2.
Malo by sa poznamenať, že farba dehydratovaného média je béžová a prípravok je svetlý a priesvitný jantár.
Varianta bujónu seleničitany a cystínu
Obsahuje rovnaké zlúčeniny ako seleničitanový vývar, ale pridá sa 10 mg cystínu. Zvyšok postupu je úplne rovnaký, ako je opísané vyššie.
aplikácia
Toto médium je zvláštne na použitie v epidemiologických štúdiách, v prípadoch, keď ochorenie nie je v akútnom štádiu, u asymptomatických pacientov alebo u zdravých nosičov.
Izolácia rodu Salmonella je vo všeobecnosti obtiažna, pretože zvyčajne predstavuje len málo kontaminujúce vzorky. Keďže je v malom množstve, ľahko sa prekrýva s rastom iných bakteriálnych rodov, ktoré sa nachádzajú vo väčšom množstve.
Na druhej strane sú suroviny, z ktorých sa vyrábajú spracované potraviny, často vystavené okrem iného teplu, dehydratačným procesom, použitiu dezinfekčných prostriedkov, žiarenia a konzervačných látok.
Salmonely, prítomné v surovine, sa preto zle ošetrujú tak, že sa produkt podrobí vyššie uvedeným priemyselným procesom. Podobne v prípade klinických vzoriek, ako sú stolica, môžu byť kmene slabé, ak pochádzajú od pacientov, ktorí boli liečení antibiotikami.
Akákoľvek vzorka, u ktorej existuje podozrenie na prítomnosť Salmonely, by sa preto mala vopred obohatiť v laktózovom bujóne a následne obohatiť v selenitovom bujóne, aby sa optimalizovala jeho regenerácia v selektívnych médiách, ako je napríklad agar SS, xylóza, lyzín deoxycholát (XLD) ), enterický Hektoenov agar (HE) a jasne zelený agar.
osiatych
V prípade vzoriek stolice odoberte 1 g vzorky a suspendujte v skúmavke s 10 až 15 ml seleničitanu. Ak sú stolice tekuté, vezmite 1 ml a suspendujte v bujóne. Pre rektálne tampóny vypustite materiál na tampóny do vývaru.
V prípade vzoriek tuhej potravy odoberte 1 gram a suspendujte v seleničitanovom bujóne.
V tekutých potravinách zmiešajte v rovnakom pomere so seleničitým vývarom v dvojnásobnej koncentrácii.
V prípade vzoriek moču odstreďte supernatant, zlikvidujte všetok sediment a suspendujte ho v selenitovom bujóne.
Bujóny sa inkubujú pri 37 ° C počas 24 hodín inkubácie. Bakteriálny rast sa prejavuje zákalom. Ďalšia skúmavka na vzorku môže byť tiež zahrnutá na inkubáciu pri 42 ° C. Následne sa naočkuje selektívne pevné médium zo seleničitanového bujónu.
QA
Na kontrolu sterility sa seleničitý bujón z každej naočkovanej dávky inkubuje pri 37 ° C počas 24 hodín. Očakáva sa, že nedôjde k zákalu alebo zmene farby média.
Známe kmene sa môžu použiť na kontrolu správneho fungovania média, ako napríklad:
Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 a Proteus mirabilis ATCC 43071.
Očakávané výsledky sú:
- Pre prvé tri bakteriálne kmene musí byť rast uspokojivý.
- Pre čiastočnú inhibíciu Escherichia coli.
- Pre Proteus mierny rast.
obmedzenia
Médium seleničitanového vývaru je toxické pre ľudskú pokožku, preto by sa malo zabrániť priamemu kontaktu.
Referencie
- Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Porovnanie kultivačných médií seleničitanu sodného a tetrathionátu sodného, obidve inkubované pri 37 ° C a 42 ° C počas izolácia Salmonella spp z výkalov nosičov. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215 - 220
- Britannia Laboratories. Selenito vývar. 2015.K dispozícii na: britanialab.com
- Neogen Laboratories. Selenitový vývar. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
- González -Pedraza J, Pereira -Sandandres N, Soto-Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Mikrobiologická izolácia Salmonella spp. a molekulárne nástroje na jej detekciu. Zdravie, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. K dispozícii na adrese: http://www.scielo.org.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentína.