MALONATE VÝVAR: ZALOŽENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Malone pôda je kvapalné kultivačné médium používa pre diagnostický test (Malone), ktorý sa používa na odlíšenie určitej rody čeľade Enterobacteriaceae. Bol vytvorený Leifsonom v roku 1933 a neskôr modifikovaný Ewingom, ktorý pridal pôvodné množstvo dextrózy a kvasnicového extraktu.

Médium v ​​súčasnosti pozostáva z kvasnicového extraktu, síranu amónneho, fosforečnanu draselného, ​​fosforečnanu draselného, ​​chloridu sodného, ​​malonátu sodného, ​​dextrózy a brómtymolovej modrej. Tento test je všeobecne zahrnutý v biochemickej identifikačnej batérii pre Enterobacteriaceae, čo pomáha rozlíšiť určité rody a druhy.

Grafické znázornenie malonátového testu. A. Negatívny test, B. (Okyslenie) Negatívny test, C. (Stredná alkalizácia) Pozitívny test. Zdroj: Farebné trubice publicdomainpictures.net

Test malonátu je založený predovšetkým na schopnosti niektorých mikroorganizmov používať malonát sodný ako jediný zdroj uhlíka a síran amónny ako zdroj dusíka.

Maklonátový test je zvyčajne pozitívny u niektorých druhov rodov Enterobacter, Klebsiella a Citrobacter. Keďže väčšina druhov rodov Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus a Providencia dáva negatívnu reakciu.

základ

Test malonátu spočíva v preukázaní tých baktérií, ktoré sú schopné používať malonát sodný ako jediný zdroj uhlíka a síran amónny ako zdroj dusíka.

Väčšina Enterobacteriaceae, ktoré nepoužívajú malonáty, sú schopné rásť v tomto médiu, pričom ako živiny berú dextrózu a kvasnicový extrakt.

V tomto prípade bude akýkoľvek pokus o alkalizáciu použitím peptonov pôsobiť produkciou kyselín generovaných fermentáciou dextrózy. Podobne ako fosforečnany dvojfosforečnanu draselného a fosforečnanu draselného pôsobia ako tlmivý roztok, pričom sa pH udržuje na 6,7.

Preto, keď je test negatívny, vývar zostáva v rovnakej pôvodnej farbe (zelená). V zriedkavých prípadoch môže byť médium kyslé v dôsledku fermentácie dextrózy; bez použitia melónov a indikátora pH by zmenila farbu média na žltú. Aby sa to stalo, pH musí klesnúť na 6.

Keď je však tento test pozitívny, hovorí sa, že mikroorganizmus použil ako zdroje uhlíka a síranu amónneho sírany amónneho bez použitia ďalších zložiek.

V tomto prípade sa médium stáva zásaditým v dôsledku uvoľňovania sodíka a následnej tvorby NaOH. V tomto zmysle indikátor pH (brómtymolová modrá) zmení farbu média zo zelenej na modrú, keď je pH rovné alebo vyššie ako 7,6. Modrá môže byť svetlá alebo intenzívna (pruská modrá).

Nakoniec chlorid sodný udržuje osmolaritu média a voda je riedidlom všetkých zložiek.

interpretácia

Bujón rovnakej farby (zelený) - negatívny test

Žltý bujón: negatívny test

Svetlý alebo tmavomodrý vývar: test pozitívny

Existuje variant nazývaný fenylalanín malonátový vývar, tiež nazývaný médium Shaw a Clarke. V tomto prípade možno analyzovať dva testy, použitie malonátu ako zdroja uhlíka a výrobu kyseliny pyruvovej z fenylalanínu.

príprava

Malonate vývar

Váži sa počet gramov špecifikovaných v prílohe vybranej obchodnej spoločnosti (môže sa líšiť od jednej k druhej). Navážené gramy sa suspendujú v jednom litri destilovanej vody. Mierne zahrievajte, kým sa úplne nerozpustí. Rozdeľte 3 ml média do 13/100 skúmaviek s vatovými viečkami.

Sterilizujte v autokláve pri 121 ° C po dobu 15 až 20 minút.

Pred použitím vychladnite. Ak sa nepoužijú okamžite, skladujte ich až do použitia v chladničke. Pred naočkovaním nechajte vývar na izbovú teplotu.

PH média by malo byť 6,7 ± 0,2. Farba pripraveného média je zelená.

Bujón fenylalanínu malonát

Odvážte 11 g dehydratovaného média a rozpustite v 1 litri destilovanej vody. Zvyšok prípravku je rovnaký ako predtým.

Môže sa tiež pripraviť pridaním 2 g / l fenylalanínu do média malonátovej pôdy pred sterilizáciou.

použitie

Používa sa ako súčasť súboru biochemických testov zostavených na identifikáciu baktérií z čeľade Enterobacteriaceae.

Pomáha rozlišovať medzi:

- Rod Klebsiella a Enterobacter (+) z rodu Escherichia a Serratia (-).

- druh Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp saláma a Salmonella enterica ssp diarizonae (+), druh Salmonella enterica ssp enterica (-).

- Z rodu Klebsiella všeobecne (+) z rodu Actinobacillus (-).

- Príležitostne môže pomôcť pri diferenciácii rodov a druhov baktérií, ktoré nepatria do čeľade Enterobacteriaceae, napríklad medzi nefermentujúce gramnegatívne bacily Alcaligenes faecalis (+) a Acinetobacter sp (-).

Zdroj: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Editorial Panamericana SA Argentína.

proces

Pod zapaľovačom sa odoberie časť čistej kolínskej vody pomocou riadne sterilizovanej a chladenej rukoväte platiny. Odobraná vzorka (ľahké inokulum) sa rozpustí v malonáte. Inkubujte s uvoľneným vekom pri aerobióze pri teplote 35 ° C ± 0,2 po dobu 24 až 48 hodín.

Malonátový vývar sa môže tiež naočkovať 18 až 24-hodinovou kultúrou v sójovom bujóne s tryptikázou. V tomto prípade sa odoberie 0,01 ml sterilnou pipetou a naočkuje sa malonátový bujón. Inkubujte s uvoľneným vekom pri aerobióze pri teplote 35 ° C ± 0,2 po dobu 24 až 48 hodín.

Na konci času sú výsledky interpretované. Akákoľvek stopa modrej farby po 48 hodinách inkubácie by sa mala považovať za pozitívnu. Test by sa nemal interpretovať ako negatívny, kým neuplynie 48-hodinová inkubačná doba.

V prípade použitia variantu fenylalanín malonátu sa najskôr interpretuje malonát a potom sa pridá 5 kvapiek 1 N HCl a 3 až 5 kvapiek 8% chloridu železitého. Tmavo zelená farba sa interpretuje ako pozitívny test na fenylalanín. Ak sa naopak médium zmení na bledomodré, test na fenylalanín je negatívny.

QA

Na vykonanie kontroly sterility média by sa mala inkubovať jedna alebo dve živné pôdy pri teplote 35 ° C ± 0,2 počas 24 hodín inkubácie. Po uplynutí tejto doby by už nemalo dôjsť k zákalu alebo zmene farby.

Na kontrolu kvality sa môžu použiť známe alebo certifikované kmene, ako napríklad: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 a Escherichia coli ATCC 25922.

Očakávané výsledky sú:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae a Salmonella enterica ssp arizonae dávajú pozitívnu reakciu (stredne modrá farba).
• V prípade Escherichia coli by mal byť výsledok negatívny, to znamená, že sa neočakáva žiadna zmena farby (zelená) alebo že v dôsledku fermentácie glukózou zmení farbu na žltú.

obmedzenia

Nepoužívajte vývar, ktorý vykazuje zákal, zrazeniny, zmenu farby alebo akékoľvek známky poškodenia.

Referencie

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Mikrobiologická izolácia Salmonella spp. a molekulárne nástroje na jej detekciu. Uninorte Health. Barranquilla (pl.) 2014; 30 (1): 73-94. K dispozícii na: scielo.org.co
2. BBL. Malonate Broth, Ewing upravený. 2007. K dispozícii na: bd.com
3. Laboratóriá Senny. Malonato vývar. K dispozícii na: cientificasenna.com
4. RenyLab. Malonato vývar. 2013.K dispozícii na: es.renylab.ind.br
5. Mbiologická diagnostika. Malonato vývar. K dispozícii na: mbiolog.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Editorial Panamericana SA Argentína.
7. Conda Pronadisa Laboratories. Fenylalanín malonátový bujón. K dispozícii na adrese: condalab.com