LAKTÓZOVÝ VÝVAR: ZALOŽENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Vývar laktóza je prostriedkom non - selektívneho kvapalného kultivačného média, používané hlavne ako s predbežným obohatením v izolácii kmeňov Salmonella z mikrobiologickej analýzy na spracované potraviny, mliečne výrobky alebo vody. Odporúča to Medzinárodná komisia pre mikrobiologické špecifikácie potravín (ICMPF).

Médium obsahuje enzymatický tráviaci gél, mäsový extrakt a laktózu, látky potrebné pre bakteriálny rast. Okrem toho je laktóza fermentovateľným uhľohydrátom, takže niektoré koliformné baktérie sú schopné ju štiepiť produkciou plynu.

Laktované bujóny so zákalom. Zdroj: Fotografia zhotovená autorom MSc. Marielsa gil

Z tohto dôvodu sa odporúča Americké združenie pre verejné zdravie (APHA) na prípravu laktózy na predpokladané štúdium celkových a fekálnych koliformných baktérií, čím sa kvalifikuje ako vynikajúca alternatíva na nahradenie bujónu s tryptózovým laurylsulfátom v štandardnej technike najpravdepodobnejšieho počtu (MPN). ), ktoré sa používajú na mikrobiologickú analýzu vzoriek potravín, mlieka a povrchových vôd, podzemných, rekreačných, domácich a priemyselných odpadov.

základ

Na mikrobiologickú analýzu niektorých vzoriek je pred obohacovací krok nevyhnutný na to, aby bolo možné získať späť konkrétny mikroorganizmus, ktorý môže byť vo veľmi malom množstve alebo v nepriaznivých podmienkach, ktoré narúšajú alebo minimalizujú jeho životaschopnosť.

Tak je to v prípade sušených a spracovaných potravín, prípadne kontaminovaných Salmonellas sp. V týchto prípadoch, ak sú baktérie prítomné, počas výrobného procesu boli fyzicky a chemicky zneužívané.

Týmto spôsobom sú mikroorganizmy vystavené nepriaznivým faktorom, ako je dehydratácia, expozícia inhibičným alebo toxickým produktom a prekrývanie spôsobené prítomnosťou iných baktérií vo väčšom množstve, okrem iného.

V tomto zmysle má laktózový bujón opravný účinok na poškodené štruktúry mikroorganizmu, čo spôsobuje jeho regeneráciu a množenie takým spôsobom, aby sa dalo detegovať.

Podobne má laktózový bujón schopnosť riediť inhibičné látky, ktoré môžu ovplyvniť jeho životaschopnosť, čo umožňuje jeho vývoj. Okrem toho, nutričné ​​zloženie laktózového bujónu je strategické na podporu rastu Salmonella sp pred inými mikroorganizmami.

Na účely konečnej identifikácie sa musí subkultivovať do iných definitívnych kultivačných médií.

Na druhej strane zloženie média tiež umožňuje detekciu mikroorganizmov fermentujúcich laktózu, ktoré produkujú plyn.

príprava

Na prípravu litra laktózového bujónu sa musí odvážiť 13 gramov dehydratovaného média a rozpustiť v 1000 ml destilovanej vody.

Aby sa pomohlo rozpustiť médium vo vode, roztok sa môže zahriať trochu, ale nie príliš.

Akonáhle je homogénny, roztok sa pripraví takto: ak sa má bujón použiť na hľadanie koliformných baktérií, pripraví sa stojan na skúmavky, do ktorého sa vloží horná časť fermentačnej skúmavky Durham.

Trubica Durham je veľmi dôležitý detail, pretože umožní detekciu tvorby plynu, čo sú údaje veľmi dôležité pri hľadaní koliformných baktérií.

Akonáhle sú skúmavky pripravené, do nich sa nadávkuje 10 ml laktózového bujónu, množstvo, ktoré musí byť dostatočné na pokrytie celej Durhamovej skúmavky.

Ak sa má laktózový bujón používať ako pred obohatený bujón, nie je potrebné umiestniť fermentačnú skúmavku Durham. V tomto prípade je potrebné väčšie množstvo média (225 ml), ktoré sa podáva v 500 ml fľašiach, so širokými ústami a so žiaruvzdorným skrutkovacím uzáverom.

Potom sa skúmavky alebo banky autoklávujú pri 121 ° C počas 15 minút.

Médium musí zostať pri konečnej hodnote pH 6,9 ± 0,2 pri 25 ° C.

Vývary sa uchovávajú v chladničke až do použitia.

Pred použitím sa vývar musí zohriať na izbovú teplotu.

Na druhej strane, laktózový bujón môže byť tiež pripravený v dvojnásobnej koncentrácii.

Niektoré laboratóriá pridávajú brómokrezolovú purpurovú do laktózového bujónu ako indikátor pH, aby ukázali skúmavky, v ktorých bola laktóza fermentovaná v dôsledku zmeny farby. V tomto prípade má vývar fialovú farbu a v prípade kvasenia zožltne.

aplikácia

V mikrobiologických laboratóriách sa široko používa laktózový bujón, pretože ide o relatívne lacné médium, ktoré ponúka spoľahlivé a rýchle výsledky (24 - 48 hodín).

Môže sa použiť na analýzu celkových a fekálnych koliformných baktérií v potrave a vode alebo ako živný roztok na obohatenie Salmonellou.

Pre-obohatenie

Predbežné obohatenie je krok pred obohatením vzorky, čo výrazne zlepšuje regeneráciu baktérií rodu Salmonella v spracovaných potravinách.

Za týmto účelom sa tuhá vzorka potravín (25 g) alebo tekutina (25 ml) naočkuje do 225 ml laktózového bujónu, inkubuje sa 24 až 48 hodín. Následne sa subkultivuje v obohatenom médiu, ako je seleničitanový cystínový vývar alebo tetrationiónový vývar. Potom prejdite na selektívne médiá XLD a SS.

Celková a fekálna koliformná analýza

Je to vynikajúce médium ako indikátor fekálnej kontaminácie.

Z tohto dôvodu je laktózový bujón ideálny pre predpokladanú fázu štúdie koliformných baktérií metódou najpravdepodobnejšieho počtu.

V prípade vzoriek, u ktorých existuje podozrenie na veľké množstvo koliformných baktérií, sa naočkuje menšie množstvo (1 ml), zatiaľ čo v prípade vzoriek, u ktorých existuje podozrenie na menšie množstvo koliformných organizmov, sa naočkuje väčší objem vzoriek (10 ml).

Na analýzu sa pripravia riedenia 10 ^-1 , 10 ^-2 , ^10-3 , čím sa vytvorí batéria s 3 až 5 skúmavkami pre každú použitú koncentráciu.

Z každého riedenia sa naočkuje rovnaký objem do mliečnych bujónov.

Skúmavky sa inkubujú 24 hodín. Negatívne živné pôdy sa inkubujú ďalších 24 hodín.

Interpretácia výsledkov sa uskutočňuje pozorovaním dvoch charakteristík: prvá je prítomnosť alebo neprítomnosť zákalu a keďže toto médium neobsahuje indikátor pH, nedôjde k žiadnej zmene farby.

Druhým je výroba plynu alebo nie. Plyn je ľahko dokázateľný v trubici Durham objavením jednej alebo viacerých vzduchových bublín vo vnútri.

Považuje sa za pozitívny, ak sú pozorované obidve charakteristiky, to znamená zákal s výrobou plynu. Pozitívne skúmavky by sa mali znovu naočkovať do konfirmačného média (2% bujón so zeleným žlčom a bujón ES).

Kontrola kvality média

- Pri príprave média je dôležité nezabudnúť umiestniť Durhamsove skúmavky, ak je ich účelom študovať koliformné baktérie.

- Pred sterilizáciou médium neprehrievajte.

- Distribuujte do skúmaviek pred sterilizáciou, nikdy nie neskôr.

- Nepoužívajte, ak je médium staršie ako 3 mesiace.

- Nepoužívajte, ak spozorujete akúkoľvek zmenu obvyklých vlastností média.

- Pri príprave dávky laktózového bujónu otestujte jeho kvalitu výsevom známych kmeňov, ako sú Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii a Klebsiella pneumoniae. Rastú veľmi dobre, s produkciou plynu (pozitívna kontrola).

- Môže zahŕňať aj Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium alebo Enterococcus faecalis, ktoré síce rastú dobre, ale bez produkcie plynu (negatívna kontrola).

- Je potrebné poznamenať, že pôvodná farba dehydratovaného média je béžová a farba pripraveného média je veľmi svetlá a transparentná žltá. Ak sa zistí zmena farby alebo vzhľadu, môže sa zhoršiť.

Referencie

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biológia životného prostredia a mikrobiológia. (2013) 1. vydanie. University of Cartagenas, Kolumbia.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B a Velázquez O. (2009). Techniky mikrobiologickej analýzy potravín. 2. vydanie. Chemická fakulta, UNAM. Mexiko.
3. Conda Pronadisa Laboratories. 2017. Laktózový vývar s dvojitou koncentráciou (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Porovnanie techník extrakcie koliformných baktérií zo sedimentu jazera Xochimilco v Mexiku. Rev. argent. Microbiol. 2013; 45 (3): 180-184. K dispozícii na: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Stanovenie mikrobiologickej kvality artézskych vrtných vôd v okresoch ústredia centrálnej oblasti, Cordillera a hlavného mesta. Invest. Science. Zdravie 2013; 11 (1): 5-14. K dispozícii od: scielo.iics.