VÝVAR EC: ZALOŽENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

ES vývar či bujón Escherichia coli je selektívna kvapalné kultivačné médium. Toto médium sa odporúča podľa štandardných metód na počítanie celkových a fekálnych koliformných baktérií, najpravdepodobnejšou technikou počtu (MPN) vo vzorkách vody a potravín, pričom hlavným činiteľom je Escherichia coli.

EC vývar pozostáva z tripteínu, laktózy, žlčových solí, fosforečnanu draselného, ​​fosforečnanu draselného, ​​chloridu sodného a vody. Jeho vzorec je strategicky navrhnutý tak, aby podporoval rast celkových a fekálnych koliformných baktérií a zabránil rozvoju ďalších sprievodných mikroorganizmov.

Obrazové znázornenie prípravy vývaru ES. Zdroj: Pixabay.com

Baktéria Escherichia coli je hlavná fekálna koliforma prítomná ako kontaminant vo vode a potravinách, ktorá je príčinou významných gastrointestinálnych porúch.

Je potrebné poznamenať, že existuje mnoho sérotypov Escherchia coli; Medzi nimi možno uviesť enterohemoragické (EHEC), enteroinvazívne (EIEC), enteopatogénne (EPEC), enterotoxigénne (ETEC) a enteroagregačné (EAEC).

Toto médium má schopnosť umožniť rozvoj všetkých z nich, ale bez toho, aby ich bolo možné navzájom odlíšiť. Vyžaduje si to ďalšie testovanie.

Mikrobiologická štúdia vody a potravy podľa najpravdepodobnejšieho počtu (MPN) na hľadanie celkových a fekálnych koliformných baktérií je protokol, ktorý pozostáva z niekoľkých fáz; predpokladaná fáza, potvrdzujúca fáza a fáza dokončenia. Bujón ES sa používa v potvrdzovacej fáze.

základ

EC vývar

Médium ES je založené na poskytovaní výživových prvkov potrebných na optimálny vývoj celkových a fekálnych koliformných baktérií, v ktorých sú zahrnuté baktérie Escherichia coli.

Tieto výživové prvky poskytuje tripteín, ktorý je vynikajúcim zdrojom peptidov a aminokyselín. Okrem toho obsahuje aj laktózu, fermentovateľný uhľohydrát, ktorý dodáva energiu a umožňuje ukázať, či baktérie produkujú plyn.

Na druhej strane médium obsahuje žlčové soli, ktoré poskytujú selektívny charakter, pretože inhibujú rast grampozitívnych mikroorganizmov, ktoré môžu byť prítomné vo vzorke.

Fosforečnan draselný a fosforečnan draselný tiež fungujú ako systém na vyrovnávanie pH. Tento systém je nevyhnutný, pretože laktóza obsiahnutá v bujóne má tendenciu okysľovať médium, keď je fermentované mikroorganizmami, ale je to kompenzované fosfátovými soľami.

Preto sú tieto prvky nevyhnutné, pretože nekontrolovaná kyslosť môže ovplyvniť správny vývoj požadovaných mikroorganizmov.

Chlorid sodný stabilizuje médium osmoticky, zatiaľ čo voda je rozpúšťadlom prítomných rozpustených látok a dodáva médiu kvapalnú konzistenciu.

Novobiocínový modifikovaný bujón ES

Okrend a Rose vytvorili celý rad vývaru ES, zvaného novobiocínový modifikovaný vývar EC. Modifikácia spočívala v znížení koncentrácie žlčových solí a pridaní 20 mg / dl novobiocínu.

Táto modifikácia podporuje regeneráciu enterohemoragických kmeňov Escherichia coli (O157: H7).

Tento bakteriálny sérotyp spôsobuje závažnú hemoragickú kolitídu, ktorá môže viesť k hemolytickému uremickému syndrómu (HUS); čo zase môže spôsobiť akútne zlyhanie obličiek s vysokou mierou úmrtnosti, ktorá môže u starších ľudí dosiahnuť až 50%.

Ministerstvo pôdohospodárstva Spojených štátov amerických (USDA) vysoko odporúča použitie tohto média z dôvodu chorobnosti a úmrtnosti spôsobenej každoročne touto baktériou v dôsledku konzumácie kontaminovaných potravín.

príprava

EC vývar

Navážte 37,4 g dehydratovaného média a rozpustite v 1 litri destilovanej vody. Zmes sa nechá stáť 5 minút. Následne sa v tepelnom zdroji končí častým miešaním.

Po rozpustení sa rozdelí do predkondicionovaných skúmaviek s Durhamovou rúrkou vo vnútri. Sterilizuje sa v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.

PH média by malo byť 6,9 ± 0,2. Farba dehydratovaného média je béžová a pripravené médium je svetlo žlté.

Vývary sa uchovávajú v chladničke až do použitia. V čase použitia musia byť bujóny pri izbovej teplote.

Na druhej strane, vývar ES sa môže pripraviť aj v dvojnásobnej koncentrácii.

Novobiocínový modifikovaný bujón ES

Navážte 36,7 g dehydratovaného média a rozpustite v 1 litri vody. Zvyšok prípravku je rovnaký, ako je opísané vyššie.

použitie

Celková a fekálna koliformná analýza

EC bujón je ideálny pre potvrdzujúcu fázu štúdia koliformných baktérií metódou NMP vo vzorkách vody, ako aj vo farmaceutických výrobkoch a potravinách.

Zakalené, plyn-produkujúce laktózové bujóny získané v predpokladanej fáze by sa mali znovu vložiť do 2% žlčovo-zelených bujónov a EC bujónov.

Pokiaľ ide o celkové koliformné baktérie, EC vývary sa inkubujú aeróbne počas 24 až 48 hodín pri 37 ° C a pre fekálne koliformné formy sa inkubujú aeróbne počas 24 až 48 hodín pri 44 ° C.

V obidvoch prípadoch sa interpretuje takto: zakalené trubice s výrobou plynu sa považujú za pozitívne. Ak nedôjde k produkcii plynu do 24 hodín, inkubácia pokračuje až 48 hodín.

ES pozitívne bujóny prechádzajú do úplnej potvrdzovacej fázy, ktorá spočíva v opätovnom nasadení na selektívne médiá, ako je agar Mac Conkey, EMB agar alebo Endo agar.

Ak je použitým vývarom EC modifikovaný novobiocínom, odporúča sa, aby sa pozitívne skúmavky znovu nasadili na agar Mac Conkey so sorbitolom.

QA

Každá šarža pripraveného média musí byť kontrolovaná kvalitou. Najskôr sa musí vyhodnotiť sterilita média. V tomto zmysle sa jedna alebo dve živné pôdy inkubujú 24 hodín pri 37 ° C bez inokulácie v aerobióze. Očakávaný výsledok je priehľadný vývar bez zákalu alebo zmeny farby.

Po druhé, musí sa vyhodnotiť rast známych kmeňov, aby sa mohli použiť nasledujúce baktérie: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Vo všetkých prípadoch sa očakáva uspokojivý mikrobiálny vývoj, pri ktorom sa pozoruje zakalený vývar s produkciou plynu pre E. coli a bez plynu pre Salmonelu.

Ďalšie kmene, ktoré môžu byť zahrnuté do kontroly, sú: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Tieto kmene musia byť úplne inhibované.

odporúčanie

- Umiestnenie skúmaviek Durham je nevyhnutné pre štúdium koliformných baktérií.

-Distribuujte médium v ​​skúmavkách pred sterilizáciou, nikdy potom.

- Nepoužívajte, ak je médium staršie ako 3 mesiace.

- Nepoužívajte, ak sa pozoruje zmena obvyklých vlastností média.

Referencie

1. Britannia Laboratories. EC Medium. 2015.K dispozícii na: britanialab.com
2. Enterohemoragická E. coli. Centrum pre potravinovú bezpečnosť a verejné zdravie. 2010. K dispozícii na: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. EC médium. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. EC médium novobiocínu. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Detekcia, izolácia a charakterizácia Escherichia coli produkujúcej shiga toxín z čerstvého mletého mäsa mäsiarov v provincii Concepción v provincii Concepción. od Tucumána. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. K dispozícii na: www.scielo.org.