NEUBAUEROVA KOMORA: HISTÓRIA, CHARAKTERISTIKA, POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Neubauer komora , hematometer alebo hemocytometru, je laboratórny prístroj skladajúci sa zo špeciálneho hrubé sklenenej dosky. Táto kamera sa používa na počítanie niektorých typov buniek, ako sú červené krvinky, biele krvinky a krvné doštičky, hoci sa môže použiť na počítanie spór, spermií, parazitov atď.

Predstavuje niektoré veľmi zvláštne vlastnosti, pretože pozostáva z 3 zón, centrálnej pre počítanie a dvoch podporných zón. Každá komora má dve počítacie zóny alebo nitkové krížiky, jednu na vrchu a jednu na spodku.

Neubauerova komora. Zdroj: SantiBadia. Upravený obrázok.

Majú niekoľko divízií vo forme mriežky. Počítacie oblasti sú stredné štvorce nachádzajúce sa v 4 rohoch oboch mreží plus stredný štvorec.

Zostavenie kamery sa musí vykonávať s veľkou starostlivosťou, pretože všetky podrobnosti ovplyvňujú počet buniek. Existuje veľa chýb, ktoré je možné urobiť, ale ak sa vyskytne ktorákoľvek z nich, fotoaparát sa musí rozobrať, vyčistiť a znovu namontovať. Medzi hlavné chyby patria:

Pretečením komory alebo nedostatočným naplnením, nechaním komory vyschnúť, pokusom o odstránenie prebytočnej kvapaliny s gázou, prevrátením komory pri jej preprave, naplnením špinavej alebo mokrej komory, okrem iného nemiešaním riedenia alebo vzorky. Všetky tieto chyby budú mať za následok neskutočnú hodnotu.

histórie

Neubauerova komora je precíznym nástrojom a výrobný proces podlieha prísnej kontrole kvality. Bol vytvorený na presné počítanie častíc alebo formovaných prvkov na mm ³ , ako sú bunky v rôznych tekutinách. Jeho jemná grafika je vyrezaná diamantovou ceruzkou.

Charakteristika Neubauerovej komory

Celá komora má veľkosť normálneho sklíčka, takže sa dá umiestniť na stolík mikroskopu.

Komora sa skladá z troch stredných pravouhlých povrchov (a, b, c). V zóne „b“ sa nachádza zóna R alebo zóna počítania, ktorá sa tiež nazýva retikulum. Jedna na každej strane fotoaparátu, oddelená zónou „d“.

Grafický nákres komory Neubauerovej. Zdroj: Praktický sprievodca hematológiou. Škola bioanalýzy na University of Carabobo, Venezuela.

Každá mriežka je vyleštená oblasť, ktorá obsahuje vyrytú oblasť počítania. Skladá sa z štvorca s plochou 9 mm ² a je vnútorne rozdelená na 9 štvorcov s plochou 1 mm ² . Štyri rohové štvorce sú rozdelené do 16 menších štvorcov (0,0625 mm ² v oblasti).

Tieto mriežky sú tvorené radom milimetrových čiar, ktoré sa vzájomne prelínajú a tvoria dokonale graficky znázornené mriežky vymedzené podľa špecifikovaných meraní. Tieto línie boli vyryté diamantovým hrotom.

Vylepšené Neubauerove učebné osnovy. Zdroj: Praktický sprievodca hematológie Fakulty bioanalýzy University of Carabobo vo Venezuele.

Štyri strany zodpovedajú oblasti počítania. Na týchto stranách alebo rohoch sa počíta väčšina buniek (červené krvinky a leukocyty), zatiaľ čo doštičky sa počítajú v centrálnej oblasti.

Centrálna zóna má viac divízií, pozostáva z štvorca 1 mm ² rozdeleného na 25 štvorcov, z ktorých každá má povrchovú plochu 0,04 mm ² . Tie sú ďalej rozdelené do 16 sietí s rozlohou 0,0025 mm ² .

Opis vylepšeného Neubauerovho retikula. a) Námestie rohov, b) Stredné námestie, c) Stredné námestie centrálneho námestia. Zdroj: Praktický sprievodca hematológie Fakulty bioanalýzy University of Carabobo vo Venezuele.

Zóny „a“ ​​a „c“ slúžia ako podpera na umiestnenie špeciálneho krycieho predmetu nazývaného hematometrický sklíčok alebo hematometrický kryt.

Výška medzi fóliou a počítacím povrchom je 0,1 mm. Merania povrchu počítacej skrinky, ako aj výška komory a riedenie vzorky sú údaje potrebné pre konečné výpočty.

aplikácia

Používa sa na počítanie buniek. Je obzvlášť užitočný v hematologickej oblasti, pretože umožňuje počítanie 3 sérií krviniek; tj červené krvinky, biele krvinky a krvné doštičky.

Môže sa však použiť v iných oblastiach, napríklad na počítanie spermií, spór, baktérií alebo iných dôležitých položiek v závislosti od typu vzorky.

Ako použiť?

príprava vzorky

Na vykonanie počtu buniek sa obvykle začína predchádzajúcim riedením. Príklad: na počítanie bielych krviniek pripravte riedenie 1:20 Turkovou tekutinou. Pred nariedením pipety a namontovaním Neubauerovej komory sa riedenie dobre premieša.

Sú chvíle, keď riedenie 1:20 nestačí na spočítanie. Napríklad u pacientov trpiacich určitými typmi chronických leukémií. V týchto prípadoch by sa mali urobiť vyššie riedenia, napríklad 1: 100.

Ak je naopak počet veľmi nízky, ako v prípade závažných leukopénií, je možné na koncentráciu vzorky vykonať menšie riedenie. Príklad: môžete urobiť riedenie 1:10.

Zmeny, ktoré sa vykonajú, ovplyvňujú výpočty.

Montáž Neubauerovej komory

Neubauerova komora je zostavená umiestnením hematometrického sklíčka do strednej oblasti. Obidva musia byť veľmi čisté a suché. Pri umiestňovaní lamely ju zachytia okraje a jemne spadne na fotoaparát.

Toto je vyplnené umiestnením špičky automatickej pipety Thoma alebo pipety v uhle 35 ° na okraji ložnej zóny. Kvapalina je vypustená hladko a ložná plocha je vyplnená kapilárou. To sa deje z oboch strán, aby sa vložili dva nitkové križovatky.

Mriežky by sa nemali preťažovať a nemali by sa im tiež odopierať tekutiny. Zaťaženie musí byť presné. Je dôležité, aby sa plnenie vykonávalo homogénne, to znamená, že by nemali existovať žiadne bubliny.

Po zostavení komory sa nechá 2 minúty odpočívať, takže sa bunky vyzrážajú na dno a ich vizualizácia a počítanie sú jednoduchšie.

Po odpočinku sa na pozorovanie namontuje na stolík svetelného mikroskopu. Najprv je zameraný na 10x objektív a ak je to potrebné, potom je na 40X.

Aby sa zlepšila jeho vizualizácia, je znížený priechod svetla z mikroskopu. K tomu je kondenzátor spustený a membrána je mierne uzavretá.

počítanie

Na spočítanie bielych krviniek alebo leukocytov sa musí spočítať celá plocha štyroch stredných rohových štvorcov a stredný štvorec každého retikula.

Počítanie sa začína na štvorci v ľavom hornom rohu. Začínate od prvého štvorca prvého riadku, tj zľava doprava, až kým nedosiahnete opačný koniec.

Tam pôjdete dolu a vrátite svoj pohľad sprava doľava, až kým nedosiahnete druhý koniec a tak sa bunky v každej mriežke počítajú kľukatým spôsobom. Spočítava sa 16 mriežok každého stredného štvorca.

Aby nedošlo k dvojitému spočítaniu bunky, existujú pravidlá o bunkách, ktoré sú umiestnené na hraničných riadkoch každej mriežky. Bunky na ľavom a hornom riadku sa počítajú a bunky na pravom a dolnom riadku sa ignorujú.

Musí byť k dispozícii ručný počítadlo buniek, aby obsluha stlačila tlačidlo zariadenia toľkokrát, koľkokrát sú pozorované bunky. Pomocou počítadla môže obsluha počítať bez toho, aby sa musela pozerať z mikroskopického poľa. Na konci počítania uvidíte celkový počet buniek.

výpočty

Pri výpočtoch môžete postupovať niekoľkými spôsobmi. Môže sa spočítať jedna mriežka alebo sa môžu spočítať obidve a obe sa spriemerujú. V týchto dvoch prípadoch, musia byť počítané bunky násobí koeficientom, ktorý je v tomto prípade by bolo 40. A tak celkový počet na mm ^{sa získa 3} .

Ak sa však počítajú obe siete a priemer sa nezmeria, musí sa vynásobiť iným faktorom, v tomto prípade 20.

- Multiplikačný faktor

Takto sa vypočíta multiplikačný faktor.

Pri výpočtoch sa berú do úvahy rôzne údaje vrátane zrieďovacieho titra, výšky komory a počítanej plochy.

rozriedenie

Používané štandardné riedenie je pre počet leukocytov 1:20.

Výška komory

Výška medzi komorou a vrstvou krvných buniek je 0,1 mm.

Počítaná plocha

Ak sa počíta 5 štvorcov s plochou 1 mm ² , znamená to, že celková oblasť sčítania je 5 mm ² . Tieto údaje sa musia vynásobiť výškou komory, aby sa získal celkový odčítaný objem. To znamená, že 5 mm ² x 0,1 mm = 0,5 mm ³ .

Vzorce a výpočty

S údajmi, ktoré máme, sa hovorí:

Ak je v 0,5 mm ^3, počíta sa --- počet buniek

V 1 mm ³ --- bude - X n ° buniek

X č. Z buniek = (č. Z buniek, počítaných x 1) / 0,5 mm ³

Musí sa však zohľadniť aj riedenie. Vzorec je preto nasledujúci:

(Počet buniek počíta x 1) x 20 / 0,5 mm ³

A konečne, zhrnúť, počet buniek, počítaných môže vynásobiť 40. Preto je hodnota leukocytov na mm ^{sa získa 3} .

Ak sa počítajú dva optické mriežky, sú dáta pre počítaného oblasti sa zmení, čo v tomto prípade by bolo 10 štvorcov, ktorý je 10 mm ² . A celkový počítaný objem 1 mm3. Vzorec by bol:

(Počet buniek počíta x 1) x 20/1 mm ³

Preto by v tomto prípade bol multiplikačný faktor 20.

Chyby

- Ak je pri nakladaní kamera prekročená alebo prekročená tekutinou, jej výška sa bude meniť. To má za následok, že počet je vyšší ako skutočná vec. Ak sa pokúsite odstrániť prebytok gázou alebo bavlnou, je to veľká chyba. Táto akcia spôsobí koncentráciu buniek, čím sa zvýši počet.

-Ak je načítaný zle, počet bude nižší ako ten skutočný.

- Ak je kamera namontovaná a nechá sa zaschnúť, už nie je možné počítať, pretože poskytne nesprávne výsledky.

- Ak sa riedenie vzorky pred naplnením komory nemieša dobre, existuje riziko chyby pri odčítaní, pretože bunky nebudú homogénne rozdelené. Preto bude existovať nižšia alebo vyššia koncentrácia buniek v závislosti od toho, či sa vzorka odoberá z povrchu kvapaliny alebo zo spodku skúmavky.

- Prítomnosť bublín znižuje množstvo kvapaliny, ktorá musí vstúpiť do retikula, čo narúša správnu vizualizáciu a distribúciu buniek. To všetko významne ovplyvňuje výsledky.

- Počas počítania sa nepozerajte z mikroskopu, kým nie je každý veľký štvorec dokončený, aby nedošlo k jeho strate.

- Jedným z dôvodov chyby je naklopenie fotoaparátu po namontovaní. Z tohto dôvodu musí byť stolík mikroskopu opatrne zdvihnutý.

odporúčanie

Ak z nejakého dôvodu zistíte abnormalitu pri plnení komory, odporúča sa rozobrať tento prípravok, vyčistiť komoru a znova zostaviť od nuly.

Pri čistení fotoaparátu buďte veľmi opatrní, aby ste nepoškodili krížové chĺpky. Na druhej strane si uvedomte, že hematometrický sklíčok je krehký a krehký. Nesprávna manipulácia ju môže zlomiť.

Pred začatím počítania sa uistite, že bunky sú správne rozmiestnené. Nerovnomerná distribúcia buniek nastáva zlým zmiešaním alebo riedením vzoriek. V takom prípade sa musí zostava zopakovať.

Jeden spôsob, ako zistiť, či sú bunky dobre distribuované, je porovnaním počtu každého veľkého štvorca, počet buniek počítaných pre každý štvorec by nemal byť prehnane odlišný od jedného k druhému.

- Ak je počet bielych krviniek nad 50 000 mm ^3, je vhodné počet zopakovať, čím sa dosiahne väčšie riedenie.

- Ak zmeníte riedenie, musíte prepočítať multiplikačný faktor, pretože to ovplyvňuje vzorec.

Referencie

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Porovnanie koncentrácie spermií použitím Maklerovej komory a Neubauerovej komory. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. K dispozícii v: scielo.
2. Neubauerova komora. (2018, 27. marca). Wikipedia, slobodná encyklopédia. Dátum konzultácie: 04:10, 23. júna 2019 zo stránok es.wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Použitie alternatívnej metódy počítania v Neubauerovej komore na stanovenie koncentrácie Trichomonas vaginalis. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. K dispozícii na adrese: researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. Analýza spermogramu. Venez. Endocrinol. METABO. 2007; 5 (2): 19-20. K dispozícii na adrese: ve.scielo
5. Hematologický praktický sprievodca Školy bioanalýzy University of Carabobo. Venezuela 1998