KUKURIČNÁ MÚČKA: POZADIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Agar kukuričná múčka je pevný kultivačné médium, nízka nutričné energie, čo je užitočné pre subkultiváciu určitých húb a pre demonštráciu chlamydospór v kmeňov Candida albicans komplex. V angličtine je známy ako Corn Meal Agar.

Bežné médium z kukuričnej múky má veľmi jednoduché zloženie, obsahuje kukuričnú múčku, agar a vodu. Vďaka svojej nízkej nutričnej hladine je ideálny na použitie pri udržiavaní plesňových kmeňov počas stredne dlhých období, najmä čiernych húb.

A. Grafické znázornenie komplexu Candida albicans na agare kukuričnej múky. B. Chlamydospory z komplexu Candida albicans, pozorované pod mikroskopom, vytvorené na agare kukuričnej múky. Zdroj: A. GrahamColm / B. Autor: CDC / Dr. William Kaplan, s láskavým dovolením: Knižnica obrázkov verejného zdravia.

Sporulácia komplexu Candida albicans je v tomto médiu priaznivá, ak sa počas prípravy agaru pridá 1% Tween 80. Tvorba chlamydosporov je charakteristická pre tento druh a prakticky jediný, ktorý ovplyvňuje človeka.

Existujú aj iné druhy, ktoré tvoria chlamydospory, je však nepravdepodobné, že by ovplyvnili ľudí, ako je Candida australis, prítomný v tučniakoch alebo C. clausenii, čo je zriedkavo sa vyskytujúci saprofyt. Podobne by ich mohli tvoriť druhy C. stellatoidea a C. tropicalis.

Na druhej strane pridanie glukózy do kukuričného média uprednostňuje tvorbu pigmentov v kmeňoch Trichophytom rubrum.

Je dôležité zdôrazniť, že v agare kukuričnej múky sa nachádzajú huby, ktoré netvoria hýfy alebo pseudohyphae, napríklad Cryptococcus neoformans, ktoré sa líšia od ostatných rodov.

Kukuričnú múčku je možné pripraviť doma v laboratóriu alebo použiť aj komerčné médiá.

základ

Kukuričná múka je substrát, agar je stužovadlo a voda je rozpúšťadlo.

Kukuričnú múčku je možné doplniť Tween 80 (sorbitan monooleát alebo polysorbát polyester 80). Táto zlúčenina znižuje povrchové napätie média vďaka svojej emulgačnej schopnosti.

Vytvára tiež nepriateľské prostredie, ktoré inhibuje prehnané množenie buniek a stimuluje rast hýf, pričom podporuje produkciu chlamydospor; posledne menovaný považoval štruktúry rezistencie. Táto štruktúra pomáha pri identifikácii druhu Candida albicans.

Glukóza v tomto médiu zvyšuje pigmentovú kapacitu niektorých húb.

Malo by sa poznamenať, že médium z kukuričnej múky s glukózou nie je užitočné na demonštráciu chlamydospor v komplexe Candida albicans.

príprava

Príprava agaru z kukuričnej múky

Navážte 47 g žltej kukuričnej múky a rozpustite v 500 ml destilovanej vody. Zahrievajte na 60 ° C za stáleho miešania prípravku počas približne 1 hodiny. Potom sa filtruje cez kúsok gázy a bavlny, prípadne sa môže znova filtrovať prechodom prípravku cez filtračný papier Whatman č. 2.

Doplňte objem na 1000 ml destilovanou vodou. Pridá sa 17 g agarového agaru, zahrieva sa do rozpustenia. Autoklávujte 15 minút pri 121 ° C.

Podávajte v sterilných Petriho miskách. Uchovávajte v chladničke.

Farba pripraveného média je belavá a má hrudkovitý vzhľad.

Ak si chcete pripraviť kukuričnú múku s glukózou na vyššie opísaný prípravok, pridajte 10 g glukózy.

Komerčný kukuričný prášok

Odváži sa 17 g dehydratovaného média a rozpustí sa v 1 litri destilovanej vody. Zmes sa môže zahrievať a jemne pretrepávať, aby sa úplne rozpustila. Sterilizujte v autokláve pri teplote 121 ° C a tlaku 15 libier počas 15 minút.

Nalejte do sterilných Petriho misiek. Nechajte stuhnúť. Invertujte a skladujte v chladničke až do použitia. Pred použitím temperujte.

PH by malo byť 6,0 ± 0,2 pri 25 ° C.

Kukuričná múka s agarom Tween 80

Aby sa dosiahol súlad s normou ISO 18416, musí byť agar kukuričnej múky pripravený takto:

Navážte 65 gramov na liter a pridajte 10 ml Tween 80. Zahrievajte a varte niekoľko minút, kým sa nerozpustí, dávajte pozor, aby ste sa príliš neprehriali. Sterilizuje sa pri teplote 121 ° C počas 15 minút.

Kukuričná múčka s glukózou

Aby sa zlepšila chromogénna sila kolónií Trichophyton rubrum a odlíšili sa od T. mentagrophytes, do pôvodnej receptúry sa môže pridať 0,2% glukóza. Nemusíte mať Tween 80, pretože glukóza inhibuje tvorbu chlamydosporov.

použitie

Použitie agaru kukuričnej múky je určené najmä na štúdium kmeňov Candida, ktoré pomáha pri ich identifikácii charakteristickým pozorovaním chlamydospor u druhov Albicans. To znamená, že použitie tohto agaru slúži ako pomocný spôsob identifikácie týchto kvasiniek.

Na tomto agare sa môžu vyvíjať tak saprofytické, ako aj patogénne druhy, ale každý vytvára charakteristické myceliálne štruktúry. Napríklad druhy rodu Torulopsis neprodukujú mycélium a množia sa iba blastokonidiami.

Podobne druhy Trichosporon a Geotrichum produkujú artroconidia na agare kukuričnej múky a niekedy je ťažké rozlíšiť jeden od druhého.

Artroconidia z rodu Geotrichum vytvára predĺženie hýf pripomínajúcich hokejku.

Pri identifikácii Trichophytom rubrum je tiež užitočná výroba pigmentov s použitím agaru kukuričnej múky doplneného glukózou.

osiatych

Podozrivé kolónie Candida získané v primárnom kultivačnom médiu - agar Sabouraud - z klinických vzoriek, kozmetika, pôda sa okrem iného subkultivujú na agare kukuričnej múky. Médium sa naočkuje a inkubuje sa pri 22 ° C počas 24 až 48 hodín. V prípade potreby sa môže inkubačná doba predĺžiť.

Demonštrácia Chlamydospore

Na tento účel musí byť agar kukuričnej múky Tween 80 naočkovaný pomocou Dalmau techniky. Táto metóda spočíva v odobratí časti podozrivej kolónie pomocou platinovej rukoväte a vykonaní troch paralelných rezov v strede, pričom sa rukoväť udržuje na 45 °. Kusy by mali byť od seba vzdialené 1 cm.

Následne sa na zasiate pruhy položí predtým plameňový krycí predmet tak, že polovica je zakrytá a druhá je odkrytá.

Naočkované platne inkubujte pri 30 ° C počas 48-72 hodín a potom preskúmajte pod mikroskopom cez kryciu sklzu.

Údržba kmeňov húb

Na zachovanie kmeňov sa očkované a pestované platne udržiavajú v chladničke (4 až 8 ° C). Týmto spôsobom môžu trvať niekoľko týždňov a môžu byť použité na účely výučby alebo výskumu.

QA

Pre kontrolu sterility sa doštička inkubuje bez inokulácie pri teplote miestnosti, očakáva sa, že nedôjde k žiadnemu rastu ani zmene farby.

Na kontrolu kvality sa môžu vysiať známe kmene, ako napríklad: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Očakávané výsledky sú čiastočnou inhibíciou S. aureus a E. coli. U ostatných kmeňov sa očakáva uspokojivý rast.

Aspergillus niger rastie s čiernymi a sporulovanými kolóniami približne v 5-dňovej inkubácii.

Kvasinkové kolónie Candida albicans s produkciou chlamydospor.

Saccharomyces cerevisiae produkuje veľké kvasinkové bunky.

obmedzenia

Na dne doštičky sa vytvorí žltá zrazenina, ktorá by sa nemala zamieňať s kolóniami.

Referencie

1. Neogen Laboratories. Agar kukuričnej múky. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com.
2. Kultivačné médiá Microkit. Agar kukuričnej múky. K dispozícii na: Medioscultivo.com.
3. Linares M, Solís F. Kvasinková identifikačná príručka. K dispozícii na adrese: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Public Health, 2002; 19 (4): 206-208. K dispozícii na: Scielo.com
5. Casas-Rincón G. Všeobecná mykológia. 1994. 2. vydanie, Central University of Venezuela, Edícia knižníc. Venezuela Caracas.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentína.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Editorial Panamericana SA Argentína.
8. Castillo E. Porovnávacia štúdia niektorých makro a mikroskopických metód na izoláciu a rozpoznávanie rodu Candida. Kolumbijský rev. Z Pharmaceutical Chemical Sciences. 1970; 3 (1): 33-57. K dispozícii na adrese: Ciencias.unal.edu.co