AGER BAIRD PARKER: ZAKLADANIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Agar Baird Parker je pevná strednej selektívne a diferenčné kultúry. Bol vytvorený v roku 1962 na detekciu a počítanie koagulázovo pozitívnych stafylokokov (Staphylococcus aureus).

Skladá sa z pankreatického hydrolyzátu kazeínu, mäsového extraktu, kvasnicového extraktu, chloridu lítneho, glycínu, pyruvátu sodného, ​​teluritu draselného, ​​agaru a vaječného žĺtka.

Typické kolónie Staphylococcus aureus na agare Baird Parker. Zdroj: Daizy John

Baird Parker Agar je založený na schopnosti S. aureus redukovať telurit a produkovať lecitinázu. Obe vlastnosti vytvárajú kolóniu so špecifickými vlastnosťami pre tento druh. Preto je vysoko účinný pri detekcii tohto mikroorganizmu.

Typické kolónie S. aureus sú čierne alebo tmavo šedé, s bezfarebným okrajom a svetelným halogénom, ktorý ich obklopuje, čím sa odlišujú od ostatných mikroorganizmov. Tento patogén sa nachádza v klinických vzorkách, vodách, kozmetike a v surových alebo varených potravinách.

Jeho diagnostika alebo detekcia je nanajvýš dôležitá, okrem iného z dôvodu rôznych patologických stavov, ako sú otrava jedlom, syndróm oparenej kože, syndróm toxického šoku, abscesy, meningitída, septikémia, endokarditída.

základ

Výživná sila

Pankreatický hydrolyzát kazeínu, mäsového extraktu a kvasnicového extraktu sú zdrojom výživných látok, vitamínov a minerálov potrebných na všeobecný mikrobiálny vývoj, zatiaľ čo pyruvát a glycín sú zlúčeniny, ktoré podporujú špecifický rast Staphylococcus aureus.

selektívne

Baird Parker Agar je selektívny, pretože obsahuje látky, ktoré inhibujú rast sprievodnej flóry, pričom podporuje rozvoj S. aureus. Inhibičné zlúčeniny sú chlorid lítny a telurit draselný.

diferenciál

Toto médium umožňuje odlíšiť S. aureus od zvyšku koagulázovo negatívnych stafylokokov. S. aureus má schopnosť redukovať telurit na voľné kovové čierne telúr, čím sa tvoria čierne alebo tmavošedé kolónie.

Podobne vaječný žĺtok poskytuje substráty na preukázanie prítomnosti enzýmu lecitinázy a lipázy. S. aureus je pozitívny na lecitinázu, a preto okolo kolónie bude pozorovaný jasný halo, čo naznačuje, že lecitín bol hydrolyzovaný.

V tomto zmysle výskyt lesklých čiernych alebo tmavošedých kolónií na tomto agare naznačuje, že okolo nich je prítomný S. aureus.

Ak sa vytvorí precipitačná zóna, naznačuje to aktivitu lipázy. Niektoré kmene S. aureus sú pozitívne na lipázu a iné negatívne.

V prípade, že S. aureus je pozitívny na lipázu, bude okolo čiernej alebo tmavošedej kolónie pozorovaná nepriehľadná oblasť a potom pôsobením lecitinázy svetlý halo.

V kolóniách baktérií iných ako S. aureus, ktoré sú schopné rásť na tomto médiu, sa vytvoria bezfarebné alebo hnedé kolónie bez okolitého halo.

Atypické čierne kolónie možno vidieť aj s bezfarebným okrajom alebo bez neho, ale bez svetelného svalu. Tieto kolónie by sa nemali brať do úvahy, nezodpovedajú S. aureus.

príprava

Emulzia vaječného žítka

Vezmite čerstvé kuracie vajce, dobre ho umyte a vložte ho do 2 - 3 hodín do 70% alkoholu. Vajce sa potom asepticky otvorí a biele sa starostlivo oddelí od žĺtka. Potom sa odoberie 50 ml žĺtka a zmieša sa s 50 ml sterilného fyziologického roztoku.

Tellurit draselný 1% hm./obj

Niektoré komerčné domy predávajú 1% telurit draselný pripravený na použitie. Pridá sa do média skôr, ako médium stuhne.

Na prípravu tohto roztoku v laboratóriu sa naváži 1,0 g teluritu draselného a rozpustí sa v jednej časti vody. Následne sa množstvo vody doplní do dosiahnutia 100 ml. Roztok musí byť sterilizovaný metódou filtrácie.

Príprava kultivačného média

Odváži sa 60 g dehydratovaného média a rozpustí sa v 940 ml destilovanej vody. Nechajte zmes stáť približne 5-10 minút.

Na zlepšenie procesu rozpúšťania aplikujte teplo častým miešaním média. Nechajte minútu variť. Sterilizujte v autokláve pri 121 ° C po dobu 15 minút.

Nechajte stáť, až kým nedosiahne teplotu 45 ° C a pridajte 50 ml emulzie vaječného žítka a 10 ml 1% teluritu. Dobre premiešajte a nalejte 15 - 20 ml na sterilné Petriho misky.

Nechajte stuhnúť, obráťte sa v doskách a skladujte v chladničke až do použitia.

Konečné pH pripraveného média musí byť 6,8 ± 0,2.

Pred naočkovaním vzorky počkajte, až doska dosiahne izbovú teplotu. Platne sa naočkujú pruhovaním alebo povrchovým očkovaním špachtľou Drigalski.

Farba dehydratovaného média je svetlo hnedá a farba pripraveného média je svetlo žltá.

použitie

Klinické vzorky

Klinické vzorky sa vysejú priamo a vypustia časť materiálu na jednom konci platne a odtiaľ sa vyčerpajú. Inkubujte 24 až 48 hodín pri teplote 35 - 37 ° C.

Vzorky potravín

Navážte 10 g vzorky potravín a homogenizujte v 90 ml 0,1% peptónovej vody, z čoho sa podľa potreby pripravia riedenia. Platne naočkujte trojmo s 0,3 ml pripravených roztokov a na povrch očkujte špachtľou Drigalski. Inkubujte 24 až 48 hodín pri teplote 35 - 37 ° C.

Táto metodika umožňuje spočítať typické získané kolónie a je ideálna, ak je podozrenie na prítomnosť S. aureus nad 10 CFU na g / ml vzorky.

Ak je podozrenie, že množstvo S. aureus je malé alebo existuje veľa sprievodnej flóry, odporúča sa obohatiť vzorku v sójovom bujóne s tryptikázou 10% NaCl a 1% pyruvátom sodným. Tým sa podporí rast S. aureus a spomalí sa vývoj sprievodnej flóry. Zakalené skúmavky sa naočkujú na agar Baird Parker.

Vzorky vody

V sterilizovanom vákuovom filtračnom systéme sa filtruje 100 ml študovanej vody a následne sa sterilnou pinzetou odstráni 0,4 mikrónová mikroporézna membrána a umiestni sa na platňu Baird Parker. Inkubujte 24 až 48 hodín pri teplote 35 - 37 ° C. Táto technika umožňuje počítanie typických kolónií S. aureus.

QA

Na hodnotenie kvality agaru Baird Parker sa môžu použiť známe kmene, ako napríklad Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 alebo Proteus mirabilis ATCC 43071.

V prípade kmeňov ATCC S. aureus je známe, že redukuje telurit a sú pozitívne na lipázu a lecitinázu. Preto musí existovať uspokojivý vývoj a pestovať konvexné kolónie s čiernym stredom a bezfarebným okrajom, s nepriehľadným halo a ľahkým najvzdialenejším halo.

Očakáva sa, že S. epidermidis sa bude na tomto médiu vyvíjať zle, s hnedasto-šedými až čiernymi kolóniami bez svetelného svalu.

Očakáva sa, že v prípade E. coli a P. mirabilis bude úplne alebo čiastočne inhibovaná. V prípade rastu sa hnedé kolónie vyvinú bez nepriehľadnej oblasti alebo svetelného svalu.

odporúčanie

- Médium by sa nemalo zahrievať po pridaní teluritu a vaječného žítka.

- Príprava emulzie vaječného žĺtka a jej pridanie do stredu je veľmi zraniteľným krokom z hľadiska kontaminácie. Je potrebné venovať mimoriadnu pozornosť.

- Ak sú prítomné typické kolónie S. aureus, malo by sa to potvrdiť pripojením koagulázového testu na uvedený kmeň.

- Ak existujú pochybné výsledky s koagulázou, mali by sa vykonať ďalšie potvrdzujúce testy.

- Dávajte pozor, aby ste nezamieňali prítomnosť typických kolónií S. aureus s atypickými čiernymi kolóniami.

Referencie

1. Prispievatelia Wikipedia. Baird-Parkerov agar. Wikipedia, slobodná encyklopédia. 15. marca 2017, 19:36 UTC. K dispozícii na: wikipedia.org/ Prístup k 18. februáru 2019.
2. Laboratóriá BD. Baird Parker Agar. 2006. Dostupné na: bd.com
3. Britannia Laboratories. Základňa agaru Baird Parker. 2015.K dispozícii na: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. K dispozícii na: http://f-soria.es/Inform
5. Britannia Laboratories. Tellurit draselný. 2015.K dispozícii na: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Preprava enterotoxigénnych Staphylococcus aureus typu A, v nosohltrových náteroch v spracovateľoch potravín. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
7. Venezuelský štandardný koberec 1292-89. (1989). Foods. Izolácia a stanovenie počtu Staphylococcus aureus. K dispozícii na: sencamer.gob.ve