SAFRANIN: CHARAKTERISTIKA, POUŽITIE, TECHNIKY, TOXICITA - CHÉMIA

Safranín je meriquinoide farbivo, pomenovaný pre jeho chemickej štruktúry, ktorá má dva benzenoidním kruhy a 2 chinoidní krúžkov, druhé bytia tie, ktoré poskytujú červenej farby.

To je tiež nazývané dimetyl safranín alebo základné červená 2 vo svojej krátkej forme, pretože jeho vedecký názov je 3,7-diamino-2,8-dimetyl-5-fenyl-phenaziniumchloro dimetyl safranínu a chemický vzorec je C ₂₀ H ₁₉ N ₄ cl.

Chemická štruktúra safranínu označujúca benzenoidové a chinoidné kruhy / Vodný roztok safranínu. Zdroj: NEUROtiker editoval MSc. Marielsa Gil / LHcheM

Existuje variant nazývaný trimetyl-safranín, ale medzi týmito dvoma látkami nie je významný rozdiel.

Safranin je monochromatické farbivo a v závislosti od vlastností chemického vzorca je pozitívne nabitá látka. Preto má afinitu k negatívne nabitým štruktúram. Tieto štruktúry budú zafarbené na červeno.

Táto vlastnosť poskytuje použiteľnosť v mnohých histologických technikách na farbenie rôznych bunkových štruktúr, eukaryotických aj prokaryotických organizmov.

Safranín sa používa ako kontrastné farbivo v dôležitých a dobre známych technikách na rutinné použitie v bakteriológii. Týmito technikami sú okrem iného Gram-Huckerove farbenie, Schaeffer Fultonove farbenie na spóry alebo farbenie bakteriálnych kapsúl.

vlastnosti

Farba šafranu (korenie získané zo stigiem kvetu Crocus sativus) bola inšpiráciou pre pomenovanie tohto farbiva. Od termínu šafran pochádza názov safranín. Je to kvôli veľkej podobnosti medzi farbou šafranu a sfarbením, ktoré toto farbivo poskytuje.

Safranín je dostupný vo forme kryštálov alebo prášku, pričom obidve formy sú rozpustné vo vode. Farbivo safranínu je bez zápachu. Škvrny sú červené. Štruktúry, ktoré priťahujú farbivo safranínu, sa nazývajú safranofily.

Štruktúrovaný safranín je komplexný, má na koncoch dva benzenoidové kruhy a v strede sú umiestnené dva chinoidné kruhy, v ktorých sa nachádza katión N ⁺ . Stredom štruktúry je systém zodpovedný za zabezpečenie farby. Vzhľadom na túto charakteristiku je toto farbivo zaradené do kategórie II.

použitie

Safranín sa používa na farbenie rôznych štruktúr. Osobitne vyzdvihuje Kulchitsky bunky prítomné v gastrointestinálnom trakte, tiež nazývané enterochromafínové bunky.

Je schopný farbiť mikroorganizmy patriace do rodiny Rickettsiaceae. Podobne sa používa pri rôznych technikách, ako je napríklad Kosterova metóda, ktorá sa používa na farbenie baktérií rodu Brucella.

Na druhej strane sa safranín používa pri farbení spór Schaeffer Fulton a pri farbení podľa Gram-Huckera. V obidvoch technikách funguje safranín ako kontrastné farbivo.

V prvom spóry majú farbu malachitovej zelene a zvyšné štruktúry sú červené pomocou safranínu. V druhom kroku gramnegatívne baktérie strácajú farbu fialového kryštálu v kroku sfarbenia, a preto je safranín tým, ktorý vyfarbuje gramnegatívne baktérie červeno.

Safranin sa ďalej používa v bakteriológii na prípravu agaru Brucella s riedením safranínu 1: 5000. Toto médium slúži na odlíšenie druhu Brucella suis od zvyšku tohto druhu. Brucella melitensis a Brucella abortus rastú na tomto médiu, ale B. suis je inhibovaný.

V agropriemyselnej oblasti sa safranín použil v množstve 2,25% a zriedil sa v pomere 1:10 na farbenie vzoriek stoniek rastlín cukrovej trstiny.

Táto rastlina je obyčajne ovplyvnená baktériou Leifsonia xyli subsp. xyli, ktorý poškodzuje xylém rastliny. Vyfarbené stonky sa vyhodnotia, aby sa stanovila funkcia xylemových ciev.

Techniky v oblasti bakteriológie

Castañeda škvrna na farbenie r

Krvný alebo tkanivový náter sa umiestni do tlmivého roztoku (fosfátový tlmivý roztok, pH 7,6). Nechajte samovoľne schnúť a potom prikryte metylénovou modrou po dobu 3 minút a kontrastne sfarbite safranínom. Rickettsiae majú modrú farbu, ktorá kontrastuje s červeným pozadím.

Farbenie podľa Kostera modifikované pre

V zapaľovači je urobený náter a zapálený na fixáciu. Následne sa na 1 minútu prekryje zmesou 2 dielov nasýteného vodného safranínu s 3 dielmi 1 mol / l roztoku KOH. Premýva sa destilovanou vodou a kontrastne sa zafarbí 1% karbolovou metylénovou modrou.

Ak vzorka obsahuje baktérie rodu Brucella, objavia sa na modrom pozadí oranžovo.

Farbenie bakteriálnych kapsúl

Zmes bakteriálnej suspenzie sa pripraví z indického atramentu a pridá sa safranín. Pod mikroskopom sa okolo každej bakteriálnej kapsuly s čiernym pozadím objaví červenkastý halo.

Farbenie spór

Vytvorí sa nátierka s bakteriálnou suspenziou. Potom sa fixuje na teplo. Je pokrytá 5% malachitovou zeleňou, plameňom často až do emisie pár. Proces sa opakuje 6 až 10 minút. Nakoniec sa premyje vodou a kontrastne vyfarbí 0,5% safranínom počas 30 sekúnd. Bacily sfarbujú červenú a spóry zelené.

Gram-Huckerovo farbenie

Rozter sa vytvorí s bakteriálnou suspenziou a fixuje sa v teple. Sklíčko prikryte kryštálovou fialovou na 1 minútu. Potom sa lugol umiestni ako moriaci roztok na 1 minútu. Následne sa bieli acetónalkoholom a nakoniec sa vyfarbí safranínom počas 30 sekúnd.

Gram pozitívne baktérie zafarbujú namodralú fialovú a Gram negatívne baktérie červenú.

Niektoré laboratóriá prestali používať techniku Gram-Hucker, aby prijali modifikovanú techniku Gram-Kopeloff. V posledne menovanom prípade sa safranín nahrádza bázickým fuchsínom. Dôvodom je, že safranin slabo zafarbí druhy rodov Legionella, Campylobacter a Brucella.

Techniky v oblasti histológie

Farbenie Kulchitského buniek (enterochromafíny)

Tkanivové rezy z gastrointestinálneho traktu sa zafarbia chloridom strieborným. Potom sa odfarbí tiosíranom sodným a nakoniec sa vyfarbí safranínom.

Kulchitského bunky sa vyznačujú prítomnosťou černohnedých granúl.

Osteoartritická škvrna

Pretože safranín má kladný náboj, veľmi dobre sa viaže na karboxylové a sulfátové skupiny glykozaminoglykánov. Sú súčasťou proteoglykánov, ktoré tvoria kĺbovú chrupavku. V tomto zmysle je možné pri farbení safranínom O zistiť, či došlo k strate chrupavky.

Strata chrupavkového tkaniva môže byť meraná pomocou Mankinovej stupnice alebo tiež nazývaná stupnica osteoartritídy.

Technika je vysvetlená nižšie: histologická časť sa ponorí do misky s Weigertovým roztokom hematoxylínu železa, potom prechádza kyslým alkoholom a premyje sa vodou.

Pokračujte vo vyfarbovaní ponorením listu do zelenej, premytý kyselinou octovou a teraz ponorený do safranínu O. Na ukončenie procesu sa dehydratuje pomocou alkoholov v rôznych koncentráciách vo vzostupnom poradí. Posledný krok vyžaduje na vyčistenie vzorky xylén alebo xylén.

Sklíčka sa kondicionujú balzamom z Kanady alebo podobným spôsobom, ktorý sa pozoruje pod mikroskopom.

Pri tejto technike sú jadrá zafarbené čierne, kosťovo zelené a chrupavka, kde sa proteoglykány nachádzajú červené.

Škvrny na identifikáciu makrorias

Pérez a kol. V roku 2003 navrhli jednoduchú a lacnú techniku farbenia makro rias. Vzorky sa pripravujú v parafínových histologických rezoch. Rezy sa fixujú 1% glycerínom, čo umožňuje ich úplné vyschnutie. Potom sa umiestni do xylolu, aby sa odstránil parafín.

Rez sa rehydratuje prechodom cez sériu podnosov obsahujúcich etanol v rôznych stupňoch koncentrácie (v zostupnom poradí) počas 2 minút v každom z nich.

Následne sa zafarbí po dobu 5 minút zmesou 1% safranínu s 1% toluidínovou modrou 3: 1, obidve pripravené 50% etanolom. K zmesi sa pridajú tri kvapky kyseliny pikrovej, ktorá pôsobí ako moridlo.

Potom sa dehydratuje opätovným priechodom zásobníkmi na alkohol, ale tentoraz vzostupne. Nakoniec sa prepláchne xylolom a vzorka sa pripraví na pozorovanie balzamu v Kanade.

toxicita

Našťastie je safranín farbivo, ktoré nepredstavuje nebezpečenstvo pre tých, ktorí s ním manipulujú. Je to neškodné farbivo, nie je karcinogénne a nie je horľavé.

Priamy kontakt s pokožkou alebo sliznicou môže spôsobiť mierne začervenanie oblasti bez väčších komplikácií. Z tohto dôvodu sa odporúča postihnuté miesto umyť veľkým množstvom vody.

Referencie

García H. Colorante safranina O. Technik v zdravotníctve, 2012; 1 (2): 83-85. K dispozícii na: medigraphic.com
Farba Gil M. Gram: základ, materiály, technika a použitie. 2019. Dostupné na adrese: lifeder.com
Farbenie Gil M. Spore: zdôvodnenie, techniky a použitia. 2019. Dostupné na adrese: lifeder.com
Safranina. “ Wikipedia, slobodná encyklopédia. 7. marca 2017, 10:39 UTC. 3. augusta 2019, 20:49 en.wikipedia.org
Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Užitočné farbiace techniky v anatomickej interpretácii Gracilariopsis tenuifrons a Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Act Bot. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. K dispozícii na: scielo.org.
Kostol Aleika, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Vzťah funkčnosti xylemových ciev a prítomnosti Leifsonia xyli subsp. XYLIO. Rev. Veg Protection. 2007; 22 (1): 65 - 65. K dispozícii na: scielo.sld

SAFRANIN: CHARAKTERISTIKA, POUŽITIE, TECHNIKY, TOXICITA - CHÉMIA - 2026