KRVNÝ NÁTER: CHARAKTERISTIKA, TYPY, TECHNIKY A HISTOLÓGIA - BIOLÓGIE - 2025

Krvný náter je náter z periférnej krvi , ktoré sa používa na analýzu komponenty prítomné v krvnom obehu. Pozorovanie krvného náteru poskytuje hematologické údaje, ktoré sú veľmi užitočné na diagnostiku a sledovanie mnohých patológií.

Krvný náter umožňuje kvantifikovať počet rôznych typov bielych krviniek (vzorec leukocytov), ​​ako aj analyzovať morfológiu a tvar erytrocytov, leukocytov a krvných doštičiek.

Príprava krvného náteru. Zdroj: Krv v laboratórnom pohári. Public DomainPictures.net

V ňom je možné zistiť abnormality v počte buniek, ako napríklad: leukocytóza alebo leukopénia, lymfocytóza alebo lymfopénia, neutrofília alebo neutropénia, trombocytóza alebo trombocytopénia a eozinofília. Môžu byť tiež pozorované abnormality veľkosti buniek a tvaru.

Ďalej je možné detegovať rôzne typy anémií, leukémií a bakteriálnych infekcií alebo infekcií parazitmi v krvi.

Na tento účel existujú rôzne typy náterov, ktoré sa vykonávajú v závislosti od účelu štúdie. Existujú tenké šmuhy a silné šmuhy. Tieto nátery sa líšia technikou vykonávania a účelom štúdie.

Ľudia s jemnými kvapkami sa používajú ako doplnok na dokončenie hematológie. Toto poskytuje údaje o vzorci leukocytov, okrem analýzy tvaru a morfológie troch buniek, ktoré tvoria krv: červená séria, biela séria a krvné doštičky. Aj keď tiež slúžia ako doplnok k štúdiu hrubého krvného filmu.

Hrubý film sa používa na diagnostiku chorôb spôsobených hemoparazitmi, ako je malária alebo malária, toxoplazmóza, leishmanióza, Chagasova choroba, babesióza a mikrofilarióza.

Charakteristiky krvného náteru

Dobrý krvný náter musí spĺňať určité vlastnosti. Medzi nimi môžeme spomenúť:

- Vzorka musí spĺňať minimálne požiadavky na kvalitu, aby bola reprezentatívna.

- Odber vzoriek musí byť dobre vykonaný.

-Časné vykonanie náteru.

- Ak sa vykonáva so žilovou krvou, použite antikoagulačné činidlo, ktoré nedeformuje bunky a pred vytvorením náteru zmiešajte skúmavku.

- Ak sa to robí kapilárnou krvou, prvú kvapku zlikvidujte.

- Rozpätie musí byť homogénne. To zaisťuje, že bunky sú rovnomerne rozložené a krvné bunky môžu byť dobre analyzované na tvar a počet.

- Strany náteru by mali byť hladké od začiatku do konca.

- Rozter musí rešpektovať okraj 1 až 2 mm po stranách posúvača.

- Vrstva náteru by sa mala postupne zmenšovať od začiatku do konca (náter jemnou kvapkou pomocou metódy kĺzania).

- Musí byť správne označený, aby nedošlo k zámene vzoriek.

-Nasledujte a riadne zafarbujte, aby ste mohli jasne sledovať krvné zložky.

- Pred pripevnením prípravku pod mikroskopom nechajte náter veľmi dobre vyschnúť. Umiestnenie imerzného oleja na mokrý náter spôsobí tvorbu miciel, ktoré bránia videniu buniek.

Druhy krvného náteru

Nátery z periférnej krvi sa dajú rozdeliť na tenké a silné nátery. Tí s tenkou vrstvou sa používajú na štúdium leukocytov a morfologické pozorovanie krviniek. Môžu byť tiež pozorované extracelulárne baktérie, ako je borrelia a intracelulárne hemoparazity, ako je napríklad plazmodium.

V jemných blokoch je možné identifikovať druh parazita, je to teda špecifickejšia technika ako hustá blob, ale hrubá blob je citlivejšia, pretože ide o techniku ​​koncentrácie použitú na vyčerpávajúce hľadanie extracelulárnych hemoparazitov.

Existujú dva typy náterov jemných kvapiek: tie, ktoré sa vykonávajú na podložných sklíčkach a tie, ktoré sa vykonávajú na krycích sklíčkach. Hrubé šmuhy sa vykonávajú na podložných sklíčkach.

Techniky odoberania vzoriek krvi

Krvné nátery môžu byť vyrobené kapilárnou punkciou alebo žilovou vzorkou odobratou s antikoagulantom. Ak sa vykonáva z krvi pomocou antikoagulantu, náter sa môže pripraviť do 2 hodín po odobratí vzorky.

Opatrnosť je potrebná pri použití antikoagulancií, ktoré nedeformujú krvné bunky. Najlepšie je EDTA. Naopak, je potrebné sa vyhnúť použitiu antikoagulancií, ako je citran trisodný.

Ak sa vzorka odoberie kapilárnou punkciou, mal by sa náter predĺzať okamžite pred zrážaním krvi.

Prvá kvapka by sa mala zlikvidovať, aby ďalšia kvapka mohla spontánne uniknúť, aby sa zabránilo zriedeniu vzorky tkanivovou tekutinou. Je to najviac odporúčaná technika na pozorovanie morfológie buniek, pretože krv neobsahuje žiadne prísady.

Na pozorovanie hemoparazitov Solari a kol., Vo svojej výskumnej práci dospeli k záveru, že obidve techniky (venipunkcia a kapilára) sú rovnako účinné.

Druhy odberu krvi: A. Kapilárna punkcia. B. Žilová vpich. Zdroj: A. Flickr.com B. Pxhere.com

Techniky na prípravu krvného náteru

Krvný náter sa môže vykonať ručne na podložných sklíčkach alebo na krycom sklíčku alebo sklíčku. Je to tiež možné prostredníctvom automatizovaného zariadenia.

-Sidesides rozmazáva

Je to technika, ktorú väčšina laboratórií uprednostňuje vďaka svojej ľahkej manipulácii.

Pomocou Pasteurovej pipety vložte do stredu čistého podložného sklíčka nie príliš silnú alebo veľmi jemnú kvapku krvi.

Náter sa vyrába pomocou ďalšieho posúvača so zemou. Brúsená sklenená šmýkačka je umiestnená kolmo na opačný koniec miesta, kde je kvapka umiestnená.

Nakloní sa pod uhlom 30 - 45 ° a kĺzavo klesá; Po dotyku sa plech rozťahuje lineárne cez okraj pozemného posúvača a konštantným a definovaným pohybom sa plachta vracia; pred dosiahnutím konca sa posúvač zdvihne.

Týmto spôsobom sa homogénna vrstva rozprestiera po povrchu prijímacieho posúvača.

Náter sa nechá uschnúť. Potom sa fixuje a zafarbí sa preferovaným farbením. Pred pozorovaním pod mikroskopom nechajte dobre uschnúť. Na tvár sa položí kvapka oleja, ktorá bude rozmazaná a pozorovaná pod svetelným mikroskopom.

Krvný náter na sklíčku. Horný obrázok: nenatretý náter. Dolný obrázok: zafarbený náter. Zdroj: Coinmac

Časti náteru vyrobené na podložných sklíčkach

Pri tomto type náteru sa dajú rozlíšiť tri definované oblasti: hlava, telo a chvost. Hlava zodpovedá oblasti, kde začína náter, je to najhrubšia oblasť a nie je dobré ju pozorovať.

Telo je strednou alebo strednou časťou náteru, je to najlepšia oblasť na pozorovanie pod mikroskopom, pretože tam sú bunky rovnomerne rozložené a zachováva sa ich morfológia.

Chvost zodpovedá poslednej časti náteru; tu už distribúcia nie je jednotná a morfológia erytrocytov sa stráca.

Kontrola kvality v technike sklíčka

V tejto technike hrá zásadnú úlohu:

- Čistenie a odmasťovanie podložného sklíčka: zaručuje dobré kĺzanie vzorky.

- Veľkosť kvapky: pri veľmi veľkých kvapkách sa získa silnejšia a dlhšia škvrna, pri veľmi malej kvapke bude nátierka kratšia a veľmi jemná.

- Rýchlosť použitá v predĺžení: čím nižšia je rýchlosť rozteru, tým vyššia bude rýchlosť.

- Uhol vykonania: čím menší je uhol, tým jemnejší je náter, tým väčší je uhol.

-Step na kryte sklíčko

Nie je široko používaný, pretože manipulácia s krehkými krycími sklíčkami je ťažkopádna, ponúka však veľké výhody, pretože lepšia distribúcia buniek sa dosahuje v nátere.

Do stredu krycieho sklíčka sa umiestni nie príliš hrubá, nie príliš jemná kvapka. Hneď na to sa umiestni ďalší krycí sklíčko tak, aby špičky oboch krycích skiel vyčnievali a vytvorili hviezdu.

Kvapka sa spontánne rozšíri po povrchu oboch krycích sklíčok. Na konci predĺženia sa každý posúvač rýchlo posunie na opačnú stranu (jedna doprava a druhá doľava).

Táto technika poskytuje dva nátery namiesto jedného.

Sú umiestnené do sucha s roztiahnutou stranou nahor. Po zaschnutí sa fixuje a zafarbí zvolenou technikou. Nechajte to zaschnúť. Kvapka imerzného oleja sa umiestni na podložné sklíčko, náter sa umiestni tak, aby strana pre náter smerovala nadol a pozorovala sa pod mikroskopom.

Kontrola kvality v technike krycieho sklíčka

Na získanie dobrého náteru pre túto techniku ​​je dôležité:

- Čistenie krycích sklíčok (pomáha hladkému skĺznutiu vzorky).

- Veľkosť kvapky (ovplyvňuje hrúbku náteru).

- Rýchlosť separácie krycích skiel (ovplyvňuje homogenitu nátierky).

- S automatickým zariadením

Môžu byť vykonané prostredníctvom ktoréhokoľvek z týchto tímov: Spinner a Autoslide.

Spinner pozostáva z umiestnenia sklíčka s kvapkou krvi na špeciálnu doštičku pre odstredivky. Vzorka sa odstredí pri vysokých rýchlostiach; Týmto spôsobom sa vytvorí homogénny a jemný náter vzorky. Nevýhodou je možnosť hemolýzy vzorky.

Autoslide je prístroj, ktorý mechanicky vykonáva pohyby na vykonanie náteru na podložných sklíčkach. Náter môžete tiež opraviť a zafarbiť. Môže sa dokonca prispôsobiť niektorým automatickým hematologickým počítadlám.

Hrubá technika rozmazania

Na hľadanie hemoparazitov sa odporúčajú dva nátery: jedna s jemnou kvapkou a druhá s hustou kvapkou.

Vykonajte kapilárnu punkciu, vyčistite prvú kvapku. Na sklíčko položte jemnú kvapku a rozotrite ju, ako už bolo uvedené. Pri hrubej guľôčke umiestnite veľkú guľôčku na ďalšiu podložku a roztiahnite ju do štvorca 1,55 mm. Nechajte tieto dva nátery zaschnúť.

Farbenie škvrny

Na jemné kvapky je možné okrem iného použiť škvrny Giemsa alebo Wright. Na silné nátery sa odporúča farbenie Giemsa alebo May-Grunwald.

Giemsa škvrna

Náter sa fixuje po dobu 3 minút metanolom, vypustí sa a nechá sa opäť zaschnúť. Náter je potom potiahnutý Giemsovým farbivom po dobu 10-15 minút. Premyje sa destilovanou vodou a nechá sa vysušiť. Na pozorovanie pod mikroskopom sa umiestni kvapka imerzného oleja.

Wrightova škvrna

Náter je pokrytý Wrightovou škvrnou po dobu 5 minút. Zlikvidujte a umiestnite tlmivý roztok na pH 6,8 na 6 minút. Vyfúknite prípravok, aby sa homogenizoval. Opláchnite destilovanou vodou a nechajte uschnúť. Pozorujte pod mikroskopom.

Typy chybných náterov

Vyskytuje sa u študentov v technike jemných kvapiek so sklíčkami.

Šmuhy s oblasťami rôznych hrúbok (tenké a hrubé rozptýlené)

Je to preto, že vykonávaný pohyb nebol počas šírenia konštantný, zastavoval sa a znova sa spúšťal.

Veľmi krátky náter

Majú 2 príčiny: jedna je spôsobená tým, že zemný posúvač bol zdvihnutý pred dosiahnutím druhého konca posúvača. V tomto prípade je extrémne hrubá a krátka.

Na druhej strane, ak je náter krátky, ale tenký, je to preto, že veľkosť kvapky bola veľmi malá.

Na konci náteru je potrebné rozmazať škrabkou

To má niekoľko príčin: jednou je, že zemná hrana je chybná, že tlak vyvíjaný na prijímací posúvač sa zvyšuje v čase rozmetávania alebo že je opotrebovaný okraj posúvača.

Šmuhy s vytváraním vakuol alebo čisté zaoblené alebo eliptické oblasti

Sú spôsobené použitím mastných škvŕn (zle umytých a odmastených).

Veľmi silné alebo veľmi tenké šmuhy

Príliš veľké kvapky spôsobia od začiatku do konca veľmi silné nátery a veľmi malé kvapky spôsobia veľmi jemné nátery.

histológia

Krvné bunky je možné vidieť v krvnom nátere. Medzi ne patrí:

- erytrocyty alebo červené krvinky

Ľudská krv, erytrocyty alebo červené krvinky a dve biele krvinky. Prevzaté a upravené: Viascos Vaše pozorovanie je nanajvýš dôležité. Na tejto úrovni sa dajú zistiť anémie, talasémia, ochorenie kostnej drene atď.

Počet erytrocytov alebo červených krviniek je približne 5 x 10 ⁶ mm3 vo mužov a 4,5 x 10 ⁶ u žien. Červené krvinky sú tvarované ako bikonkávne disky s centrálnym fyziologickým blednutím. Môžu byť videné samostatne (normálne) alebo vytvárajú komíny rouleaux (abnormálne).

Šmuhy tiež vykazujú poikilocytózu (červené krvinky rôznych tvarov), anizocytózu (červené krvinky rôznych veľkostí), anizopoikilocytózu (rôzne tvary a veľkosti), anizochrómy (rôzne farby), erytroblasty (nezrelé červené krvinky), mikrocytózu (menšie červené krvinky) ) a makrocyty (väčšie erytrocyty).

Keď vykazujú nedostatok v množstve hemoglobínu a zvyšuje sa centrálna bledosť, hovorí sa, že existuje hypochrómia. Ak je pozorovaná normálna červená séria, bude hlásená ako normocytická a normochromická.

-Biele krvinky alebo leukocyty

biele krvinky

Normálne množstvo sa pohybuje od 5 000 do 10 000 mm ³ . Menia sa pri infekčných procesoch, pri alergiách a pri leukémii. V krvnom nátere sa dá rozlíšiť niekoľko typov, ktoré sú vysvetlené nižšie.

Segmentované neutrofily

Predstavujú 55 - 65% celkových leukocytov. Meria medzi 10-15 μm. Majú segmentované alebo lobované jadro, ktoré prijíma rôzne morfológie, preto sa nazýva polymorfonukleárne.

Vo svojej cytoplazme majú bohaté neutrofilné granule a niektoré azurofily. Zvyšujú bakteriálne infekcie (neutrofília), znižujú vírusové infekcie (neutropénia).

Môžu sa pozorovať morfologické abnormality, ako je pleokaryocytóza (hypersegmentované jadrá), oblúky (nezrelé bunky) alebo makropoly (oválne a veľké).

Ďalšie zmeny:

-Toxické granulácie

-Pseudo Pelger neutrofily (jadro nevyvoláva lobácie alebo sú bilobované).

-Döhleho telá: tmavo modré cytoplazmatické inklúzie.

- Zvýšená cytoplazmatická bazofília.

- intracytoplazmatické vakuoly.

- Bunková piknóza (strata jadrových mostíkov).

Segmentované eozinofily

Predstavujú 1-3% celkových bielych krviniek. Meria 9-10 μm. Vyznačujú sa prítomnosťou hojných acidofilných cytoplazmatických granúl a malého množstva azurofilov. Jeho jadro má dve lobulácie. Ich počet sa zvyšuje v alergiách a chorobách parazitického pôvodu.

Segmentované basofily

Sú veľmi zriedkavé a predstavujú 0-1% leukocytov. Meria 10-12 μm. Jadro je obvykle nepravidelné v okrajoch a môže byť bilobované, ale nie je pozorované kvôli veľkému počtu bazofilných hrubých granulácií v jeho cytoplazme. Veľmi zriedkavo je možné vidieť basofíliu.

lymfocyty

Sú to malé bunky s bazofilnou cytoplazmou, s jadrom, dobre definované, okrúhle, s kondenzovaným chromatínom. Jadro zahŕňa takmer celú bunku. Predstavujú 26-40% krvných leukocytov. Zvyšujú vírusové infekcie (lymfocytóza). Je možné vidieť reaktívne lymfocyty.

monocyty

Bunky väčšie ako lymfocyty, s väčšou cytoplazmou a voľnejším oválnym chromatínovým jadrom. Meria 9-12μm. Cytoplazma je hojná a pri štandardných farbiacich technikách sa zvyčajne javí ako bledošedá modrá. Medzi zmenami možno pozorovať vákuované monocyty a monocytózu.

-Platelets

Meria medzi 1,5-3 μm. Jeho tvar je guľatý alebo oválny. Normálna hodnota sa pohybuje od 150 000 do 350 000 doštičiek / mm3. Môžu znížiť niektoré vírusové infekcie. Nemajú jadro a sú fialové. V tejto sérii je možné pozorovať abnormality, ako sú makro alebo mikroštičky, trombocytóza alebo trombocytopénia a fragmenty krvných doštičiek.

Patologické prvky

Krvné parazity

Hemoparazity, ako je pôvodca malárie alebo malárie (parazity rodu Plasmodium), sa môžu vyskytovať v krvných náteroch. Z tohto dôvodu je dôležité, aby sa náter analyzoval ručne, pretože automatickému zariadeniu chýba tento nález.

baktérie

V patológiách, ako je relapsujúca horúčka alebo Lymeova choroba, je možné pozorovať jej pôvodcu. V tomto prípade to zodpovedá Borrelia recurrenti spirochetes a Borrelia burgdorferi v krvnom nátere.

Nezrelé bunky

Závažné prípady sú okrem iného pozorované pri leukémiách, leukemoidných reakciách a leukoerytroblastickej reakcii. Pri bakteriálnych infekciách môžu existovať mierne odchýlky vľavo (prítomnosť podvodníkov). Pri niektorých anémiách sa môžu vyskytnúť aj erytroblasty.

Referencie

1. Krvné a krvotvorné tkanivo. K dispozícii na: sld.cu
2. Gomez A, Casas M. 2014. Angel. Interpretácia klinického laboratória. 8. vydanie. Editorial Médica Panamericana.
3. Solari Soto L, Soto Tarazona A, Mendoza Requena D, Llanos účty A. Porovnanie parazitických hustôt v hustej kvapke krvi v porovnaní s akupresúrou v diagnostike malárie vivax. Rev Med Hered 2002; 13 (4): 140-143. K dispozícii na: scielo.org.
4. Terry Leonard Nelson, Mendoza Hernández Carlos. Dôležitosť štúdie náteru periférnej krvi u starších ľudí. Medisur 2017; 15 (3): 362 - 382. K dispozícii na: scielo.sld
5. Grinspan S. Štúdium náteru periférnej krvi. Ďalšie lekárske vzdelávanie. K dispozícii na: bvs.hn/RMH