TRYPTIKÁZA V SÓJOVOM BUJÓNE: ZALOŽENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Sójový bujón tryptón je kvapalné kultivačné médium, vysoko výživné, neselektívne. Vďaka svojej veľkej univerzálnosti je to jedno z najpoužívanejších tekutých kultivačných médií v mikrobiologickom laboratóriu.

Známe je tiež názvom tryptickej sójovej bujóny alebo štiepenej kazeínovej sóje, ktorej skratka je TSB pre jej skratku v angličtine Tryptic Soy Broth alebo CST pre jej skratku v španielčine. Jeho použitie je veľmi rôznorodé kvôli svojmu zloženiu. Skladá sa z tripteínu, sójového peptónu, chloridu sodného, ​​fosforečnanu draselného a glukózy.

Sójový bujón Trypticaseínu naočkovaný kmeňom Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, kde sa pozoruje tvorba pigmentu. Zdroj: Fotografia zhotovená autorom MSc. Marielsa Gil.

Je schopný reprodukovať klinicky dôležité patogénne baktérie vrátane tých, ktoré sú nutrične náročné a anaeróbne baktérie. V tomto prostredí sa môžu vyvinúť aj niektoré oportunistické a kontaminujúce huby.

Vzhľadom na svoju vysokú výživovú silu má vysokú citlivosť na detekciu mikrobiálnej kontaminácie, a preto ju na účely mikrobiologickej analýzy vakcín vybrala veterinárna inšpekčná služba USDA pre zvieratá a rastliny.

Sójový bujón tryptikazínu rovnako spĺňa požiadavky rôznych liekopisov (European EP, Japanese JP a North American USP) na mikrobiologické štúdium produktov na priemyselnej úrovni, ako sú kozmetika a potraviny.

Na druhej strane stojí za zmienku, že napriek svojej veľkej užitočnosti je toto médium relatívne lacné, čo ho robí dostupným pre väčšinu mikrobiologických laboratórií. Je tiež veľmi ľahké sa pripraviť.

základ

Tripteín, peptón a glukóza poskytujú základné výživové vlastnosti, vďaka ktorým je ideálnym médiom pre rýchly mikrobiálny rast.

Približne za 6 až 8 hodín inkubácie je už možné pozorovať rast u väčšiny mikroorganizmov. Existujú však pomaly rastúce kmene, ktorých rast môže trvať niekoľko dní.

Chlorid sodný a fosforečnan draselný pôsobia ako osmotická rovnováha a regulátor pH. Prítomnosť rastu je dokázaná výskytom zákalu v médiu; ak nedochádza k rastu, médium zostáva priesvitné.

Vďaka svojej svetlej farbe je možné pozorovať produkciu pigmentov, ako je napríklad pigment zobrazený na obrázku na začiatku článku, ktorý zodpovedá pigmentu produkovanému Pseudomonas aeruginosa.

príprava

-Trtytyínový sójový vývar

Na prípravu tryptického sójového bujónu sa musí digitálne zvážiť 30 g dehydrovaného komerčného média. Potom sa rozpustí v litri destilovanej vody obsiahnutej v banke.

Zmes sa nechá 5 minút odpočívať a potom sa prenesie na zdroj tepla, ktorý pomôže rozpustiť médium. Mal by sa často miešať za varu 1 minútu.

Po rozpustení sa podľa potreby distribuuje do skúmaviek primeranej veľkosti. Môžu sa použiť skúmavky s bavlnenými sviečkami alebo s uzávermi Bakelite. Potom sa skúmavky sterilizujú s médiom v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.

PH média musí zostať na 7,3 ± 0,2

Malo by sa poznamenať, že farba dehydratovaného kultivačného média je svetlo béžová a musí sa uchovávať pri teplote 10 až 35 ° C na suchom mieste. Pokiaľ je pripravený bujón svetlej jantárovej farby a mal by sa uchovávať v chladničke (2 až 8 ° C).

-Variácie tryptikazínového sójového bujónu

Modifikovaný sójový bujón tryptikazínu sa môže pripraviť pridaním žlčových solí a novobiocínu, aby bol selektívny na izoláciu E. coli. Inou možnosťou na ten istý účel je pripraviť sójový bujón tryptikázy doplnený o vankomycín, cefixím a tellurit (2,5 ug / ml).

Na druhej strane, viac glukózy (0,25%) sa môže pridať do tryptického sójového bujónu, keď je cieľom stimulovať tvorbu biofilmov.

použitie

Je dostatočne výživný na to, aby umožnil rast náročných alebo náročných baktérií, ako sú Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp a Brucella sp, bez potreby doplňovania krvou alebo sérom.

Podobne sa v tomto vývare môžu vyvinúť niektoré huby, ako je napríklad Candida albicans Complex, Aspergillus sp a Histoplasma capsulatum.

Okrem toho je toto médium v ​​anaeróbnych podmienkach ideálne na izoláciu baktérií rodu Clostridium, ako aj nesporulovaných anaeróbnych baktérií klinického významu.

Ak sa pridá 6,5% chlorid sodný, môže sa použiť na rast enterokoka a ďalších streptokokov skupiny D.

Na výskumnej úrovni je veľmi užitočný v rôznych protokoloch, najmä pri štúdiu baktérií tvoriacich biofilm alebo biofilm. Používa sa tiež na prípravu 0,5% bakteriálnej suspenzie Mac Farland potrebnej na vykonanie antibiogramu metódou Kirbyho a Bauera.

V tomto prípade sa odoberú 3 až 5 kolónií podobného vzhľadu a emulgujú sa v 4-5 ml sójového bujónu trypticaseínu. Potom sa inkubuje 2 až 6 hodín pri 35 až 37 ° C a následne sa sterilnou soľankou upraví na požadovanú koncentráciu. Tryptikázové sójové bujóny by sa nemali používať od 18 do 24 hodín inkubácie.

osiatych

Vzorka sa môže naočkovať priamo alebo sa môžu subkultivovať čisté kolónie odobraté zo selektívneho média. Inokulum by malo byť malé, aby nedošlo k zákalu média pred inkubáciou.

Normálne sa inkubuje pri aerobióze pri 37 ° C počas 24 hodín, ale tieto podmienky sa môžu líšiť v závislosti od hľadaného mikroorganizmu. Ak je to potrebné, môže sa tiež inkubovať za anaeróbnych podmienok pri 37 ° C niekoľko dní. Napríklad rýchlo rastúce alebo náročné mikroorganizmy sa môžu inkubovať až 7 dní.

V mikrobiologickej analýze farmaceutických látok - napríklad vakcín - sú protokoly prísnejšie. V týchto prípadoch sa vývar bez rastu zlikviduje až do dosiahnutia 14 dní nepretržitej inkubácie.

QA

Z každej pripravenej šarže by sa mala inkubovať 1 alebo 2 nenaočkované skúmavky, aby sa preukázala ich sterilita. Musí zostať nezmenená.

Známe kmene sa môžu tiež vysadiť, aby sa vyhodnotilo ich správanie. Medzi kmene, ktoré sa môžu použiť, patria:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 alebo 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae, ATCC28CC305 pneumoniae ATCC28omonas 905, pneumoniae ATCC28omonas305.

Vo všetkých prípadoch musí byť rast uspokojivý pri vhodných podmienkach atmosféry a teploty pre každý mikroorganizmus.

obmedzenia

- Fermentácia glukózy spôsobuje zníženie pH média v dôsledku produkcie kyselín. To môže byť nepriaznivé pre prežitie niektorých mikroorganizmov citlivých na kyslosť.

- Neodporúča sa na udržiavanie kmeňov, pretože baktérie vyčerpávajú živiny po niekoľkých dňoch s následnou akumuláciou toxických látok, ktoré spôsobujú nehostinnosť životného prostredia.

- Musíte pracovať so starostlivosťou o všetky protokoly o sterilite, pretože bujóny sú ľahko kontaminovateľné.

- Po príprave sójového bujónu s obsahom tryptikázy by ste sa nemali snažiť preniesť bujón do inej sterilnej skúmavky, pretože tento typ manévru je veľmi náchylný na kontamináciu.

Referencie

1. Cona E. Podmienky pre dobrú štúdiu citlivosti agarovou difúznou skúškou. Chil. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. K dispozícii na: scielo.org
2. Britannia Laboratory. Tripteínový sójový vývar. 2015.K dispozícii na: britanialab.com
3. Laboratórium MCD. Trypticasein Soy Broth. K dispozícii na adrese: electronic-systems.com
4. Neogen Laboratory. Triptych Soy Broth. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentína.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Hodnotenie techniky magnetickej imunoseparácie na získanie Escherichia coli O157: H7 v mliečnych krémoch. ALAN. 2006; 56 (3): 257 - 264. K dispozícii na: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Tvorba biofilmu v izolátoch Staphylococcus aureus podľa antimikrobiálnej citlivosti a klinického pôvodu. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. K dispozícii na adrese: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Izolácia Escherichia coli O157: H7 vo vzorkách hovädzieho dobytka s dvojakým použitím zo Miranda, štát Zulia, Venezuela. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. K dispozícii na: scielo.org