KONGO ČERVENÁ: CHARAKTERISTIKA, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Konžskej červeno je azofarbivo proteínmi tvorenými spojením diazóniové soli a aktívny aromatický kruh. Táto látka je schopná absorbovať elektromagnetické žiarenie vo viditeľnom spektre, a preto má intenzívnu farbu.

Je záporne nabitá. Preto má afinitu k pozitívne nabitým bunkovým komponentom, ako sú určité proteínové látky. Jeho farba sa mení v závislosti od pH. V tomto zmysle, ak je médium kyslé (<ako pH 3), farba je intenzívna modrá. Medzi pH 3 - pH 5,2 je fuchsia (sústruženie) a pri pH> 5,2 je farba tmavočervená.

Koloidný roztok dehydratovanej Kongo červenej a Kongo červenej. Zdroj: Pixinio.com a Wikipedia.com

Je to veľmi univerzálna látka, pretože má viacnásobné použitie. Používa sa ako farbivo v textilnom priemysle a tiež pre bunky a textílie.

Tiež pripraviť kultivačné médiá, ktoré merajú enzymatický účinok, ako indikátor pH, ako kontrolnú látku pri hodnotení správneho fungovania spektrofotometrov, pri štúdiu tvorby biofilmu alebo pri diagnostike amyloidov.

Podobne umožnil rozlíšiť bakteriálne a plesňové sérotypy identifikáciou špecifických štruktúr v ich stene (lipopolysacharidy).

Vlastnosti konžskej červenej

Túto látku objavil Böttiger v roku 1884. Je to derivát diazónia, ktorý tvorí kyselina bis-diazoová benzidínová s naftiónovou kyselinou. Konžská červená molekula meria 21 Armstrong a molekulová hmotnosť je približne 8000 g / mol.

Konžská červeň sa vyznačuje tým, že je rozpustná vo vode, a ešte viac v organických rozpúšťadlách, ako je etanol, za vzniku koloidného roztoku.

Má afinitu pre celulózu, pre amyloidné tkanivo a pre pozitívne nabité bunkové zložky.

príprava

Kongo červená sa pripravuje v rôznych koncentráciách v závislosti od použitej techniky. Najčastejšie sa používa okrem iného Kongo červená 1%, 2%, 0,1%.

Napríklad na prípravu 2% konžskej červene by sa mali odvážiť 2 g dehydratovaného potravinárskeho farbiva a pridať 100 ml destilovanej vody. Potom sa uchováva v jantárovej fľaši.

aplikácia

Ako farbivo v textilnom priemysle

Po určitú dobu sa v textilnom priemysle široko používal kvôli jeho fixácii na bavlnu, ale v súčasnosti je nepoužívaný, pretože je karcinogénny a tiež preto, že farba nie je stabilná a jeho trenie zmenilo farbu.

Stanovenie kapacity tvorby biofilmu

Ukázalo sa, že schopnosť mikroorganizmov tvoriť biofilmy je faktorom virulencie.

V tomto zmysle sa kongo červené farbivo používa ako metóda na stanovenie tvorby biofilmu. Kongo červená sa viaže na exopolysacharidy prítomné v biofilme. V porovnaní s inými metódami je však najmenej odporúčaný vzhľadom na vysoké falošné negatívy, ktoré sa vyskytujú.

Táto metóda využíva agar Kongo červenej, ktorý sa skladá z krvného agaru ako bázy, glukózy (10 g / l) a farbiva Kongo červenej (0,4 g / l). Hodnotené kmene sa naočkujú do média a inkubujú sa 24 hodín pri 37 ° C a následne sa inkubujú 48 hodín pri teplote miestnosti.

Pozitívny test sa preukáže, ak sa pozorujú kryštalické kolónie čiernej farby a suchého vzhľadu.

Kontrola kvality spektrofotometrov

Na vyhodnotenie toho, či zariadenie na meranie absorbancie alebo transakcie vyhovuje fotometrickým parametrom stanoveným medzinárodnými predpismi, sa môže použiť jednoduchá technika na zistenie, či zariadenie emituje výsledky v rozsahu prijateľnosti.

Jednou z metód hodnotenia je použitie konžskej červenej na základe izosbestického bodu.

Izosbestickým bodom je vlnová dĺžka, pri ktorej konžská červená emituje rovnakú absorbanciu nezávisle od pH, koncentrácie a teploty. Hodnota absorbancie je pevná a môže sa použiť ako referencia.

Teoretický izosbestický bod konžskej červene je známy ako 541 nm. Ak je získaná hodnota iná, je známe, že zariadenie má problémy s vlnovou dĺžkou a musí byť skontrolované špecializovaným technikom.

Príprava kultivačných médií

Ortiz et al. Opíšte kultivačné médium pripravené s konžským červeným farbivom a karboxymetylcelulózou, ktoré sa nazýva CMC agar, aby sa detegovali mikrobiálne kmene celulitídy; to znamená výrobcovia celulázy (endoglukózy, exoglukanázy a ß-glukozidáza).

Toto médium má intenzívne sfarbenie. Farba sa rozptýli pôsobením endoglukanázového enzýmu, ktorý narušuje štruktúru karboxymetylcelulózy. To naznačuje pozitívnu reakciu.

Zníženie viskozity a absorbancie umožňuje kvantifikáciu enzýmovej aktivity. Napríklad v kmeňoch Streptomyces sp.

Identifikácia mikroorganizmov

Kongo červená má afinitu k polysacharidovým štruktúram určitých kmeňov, čím sa dosahuje identifikácia týchto mikroorganizmov. Medzi nimi sú Escherichia coli a Shigella flexneri.

Doštičky s agarom červeného agaru sa tiež používajú na získanie charakteristických kolónií, ako je tomu napríklad v prípade Azospirillum sp, ktorý okrem iného dodáva šarlálové červené kolónie.

Farbenie buniek a tkanív

Jednou z najbežnejších aplikácií konžskej červene je jej užitočnosť pri diagnostike amyloidózy. Toto zvláštne ochorenie spočíva v extracelulárnej akumulácii abnormálneho proteínu v rôznych orgánoch. Tento abnormálny proteín sa vyrába v kostnej dreni a nazýva sa amyloid.

Kongo červená má vysokú afinitu k tejto látke. Táto vlastnosť sa používa na preukázanie jej prítomnosti v histologických rezoch tkaniva. Kongo červená sa na tento účel používa v spojení s hematoxylínom / eozínom.

Spojenie amyloidného tkaniva a konžskej červene nastáva prostredníctvom nepolárnych vodíkových väzieb medzi karboxylovými skupinami a aminoskupinami. Amyloidový proteín poskytuje karboxylové skupiny (COOH) a konžská červená aminoskupina.

Amyloidné tkanivo je zafarbené v rôznych odtieňoch od ružovej po tmavo červenú, keď je vidieť pod svetelným mikroskopom. V mikroskopoch s dvojnásobne polarizovaným svetlom sa tieto prípravky pozorujú s patognomonickým dvojlomom jablkovo-zelenej.

To znamená, že predstavujú dichroizmus, pretože amyeloidné vlákna sú anizotropné. Toto pozorovanie potvrdzuje diagnózu.

Farbenie tkanív konžskou červeňou je kompatibilné s inými diagnostickými metodikami, ako sú imunocytochemické metódy, a môže sa dokonca zmeniť.

Ako indikátor pH

Vlastnosť otáčania proti zmenám pH sa používa technikou nazývanou chromoendoskopia.

Táto technika využíva farbivá a indikátory pH, ktoré umožňujú detekciu určitých patológií. Medzi nimi je použitie konžskej červenej, ktorá môže odhaliť ložiská skorej rakoviny v žalúdočnej sliznici, ktorá sa používa ako marker kyslosti.

Táto technika je založená na skutočnosti, že konžská červeň pri kyslom pH je čierna. Preto po umiestnení roztoku konžskej červene na žalúdočnú sliznicu sa vyberú oblasti, v ktorých je bledosť, aby sa vzorka odobrala na biopsiu, tj tam, kde nedochádza k produkcii kyselín. To naznačuje prítomnosť rakovinového ohniska alebo straty parietálnych buniek.

Referencie

1. "Kongo červená." Wikipedia, slobodná encyklopédia. 8. mája 2019, 12:13 UTC. 16. mája 2019, 04:08, es.wikipedia.org.
2. Ortiz M, Uribe D. Nová metóda na kvantifikáciu endoglukanázovej aktivity na báze komplexu celulóza - Kongo. Orinoquia. 2011 jún; 15 (1): 7-15. K dispozícii na adrese: scielo.org.
3. Peña J, Uffo O. Produkcia biofilmu v genotypoch Staphylococcus aureus izolovaných z bovinnej mastitídy na Kube. Rev Salud Anim. , 2013 december; 35 (3): 189-196. K dispozícii na: scielo.s
4. Fich F, Chahuán M, Farías M, Cárdenas C, Abarzúa A, Araya G a kol. Kožné prejavy systémovej amyloidózy ako diagnostického kľúča: Klinický prípad. Medic. Čile. 2012 apríl; 140 (4): 499 - 502. K dispozícii v: scielo.
5. Duymovich C, Acheme R, Sesini S, Mazziotta D. Spektrofotometre a fotokolorimetre Praktický sprievodca aktualizáciou. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana 2005, 39 (september - december): K dispozícii na: redalyc.org
6. Marín J, Díaz J a Solís J. Chromoendoskopia pri infekcii Helicobacter pylori: je to reakčný čas? Rev Esp Enferm Dig 2012; 104 (1): 1-3
7. Fieser L, Fieser M. 1985. Organická chémia. Redakcia Reverté. Barcelona, ​​Španielsko. K dispozícii na adrese: books.google.co.ve
8. Murillo M. Techniky histologického farbenia tkanív. Univerzita v Guadalajare v Mexiku. K dispozícii na: academia.edu
9. Paillié M. Stanovenie celulolytickej, ligninolytickej a amylolytickej aktivity Actinobacteria izolovaných z rhizosférickej pôdy ďateliny bieleho (Trifolium repens). 2012. Pontificia Universidad Javeriana Přírodovědecká fakulta Priemyselná mikrobiológia Bogotá DC Dostupné na: repository.javeriana.edu.co
10. Cárdenas, D, Garrido M, Bonilla R a Baldani V. Izolácia a identifikácia Azospirillum sp. na guinejskej tráve (Panicum maximum Jacq.) z údolia Cesar. Pasienky a krmoviny, 2010; 33 (3): 1-8 K dispozícii v: scielo.