KOAGULAČNÝ TEST: ZDÔVODNENIE, POSTUP A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Test koaguláza je laboratórna technika používaná na zisťovanie prítomnosti enzýmu koaguláza. Tento enzým má vlastnosť zrážania plazmy. Loeb v roku 1903 bol prvý, ktorý opísal tento enzým.

Tento test sa vykonáva na grampozitívnych, katalázovo pozitívnych kokoch, čo umožňuje rozlíšiť kmene Staphylococcus aureus od zvyšku stafylokokov, pretože je jediným mikroorganizmom, ktorý má klinický význam.

Oba obrázky odhaľujú pozitívny koagulázový test. Zdroj: Ľavý obrázok: Philippinjl. Pravý obrázok: fotografia zhotovená autorom MSc. Marielsa Gil.

V tomto zmysle sa členovia rodiny Staphylococaceae, ktorí vykazujú negatívny výsledok, často označujú ako koagulázovo negatívny Staphylococcus.

Existujú iné kmene ako S. aureus, ktoré môžu produkovať koagulázu, ako sú napríklad koagulanty Staphylococcus schleiferi spp, S. hyicus, S. intermedius a S. delphini.

Prvé tri však majú klinický význam na veterinárnej úrovni a veľmi zriedkavo sa môžu vyskytovať ako pôvodca infekcií u ľudí, zatiaľ čo S. delphini sa vyskytuje iba v morskom prostredí.

Ďalej sú ľahko rozlíšiteľné, pretože S. hyicus a S. intermedius nefermentujú manitol a S. schleiferi spp koagulanty nefertujú maltózu ani trehalózu, zatiaľ čo S. aureus fermentuje tieto uhľohydráty.

Prítomnosť enzýmu koaguláza je spojená s virulenciou kmeňov. Táto teória sa však rozpadá, pretože sa pozorujú aj ďalšie virulentné druhy negatívne na koagulázu schopné vyvolať významné infekcie.

základ

interpretácia

Aglutinácia do 5 - 20 sekúnd (silný pozitívny test).

Variabilná aglutinácia, ktorá sa vyskytuje medzi 20 sekundami a 1 minútou (oneskorený pozitívny test).

Určitý stupeň aglutinácie po jednej minúte (pochybné dôkazy). Odporúča sa opakovať test alebo potvrdiť pomocou skúmavky.

Neexistuje aglutinácia (negatívny test).

Výsledok s SSF. Vždy musí dať záporné číslo, ak je kladné automaticky, výsledok testu je neplatný.

-Tube koagulačný test

materiály

- sterilná skúmavka

-Plasma

- kúpeľ Mary pri 37 ° C

technika

Sterilnou pipetou napipetujte 0,5 ml plazmy do skúmavky s rozmermi 12 x 75. Vložte platinovú slučku do 2 až 4 čistých kolónií, aby ste mohli študovať z pevnej kultúry počas 18 až 24 hodín a rozpustiť sa v plazme. opatrne premiešajte a inkubujte pri 37 ° C počas 4 hodín.

Skúmajte skúmavku v prvej hodine bez jej trepania, len ju jemne nakloňte. Pokiaľ zrazenina ešte nie je vidieť, môže sa pozorovať každých 30 minút, až kým nie sú dokončené 4 hodiny. Ak je po 4 hodinách stále negatívny, môže sa nechať až 24 hodín, ale pri izbovej teplote. Pozorujte a nahláste výsledok.

Na základe skúseností niektorí mikrobiológovia odporúčajú na vykonanie testu použiť 500 µl bakteriálnej suspenzie z 18-hodinovej kultúry v kvapalnom médiu.

Zdá sa, že ponúka rýchlejšie a spoľahlivejšie výsledky ako pri emulgácii kolónií z pevného média, najmä ak sa použila ľudská plazma získaná z krvnej banky.

Použitie kmeňov z bujónu pomáha riediť možnú prítomnosť ľudských anti-stafylokokových protilátok v plazme, ktoré môžu inhibovať účinok koagulázy.

interpretácia

Ak je vidieť zrazeninu, ktorá obsahuje všetku tekutinu (úplné zrážanie) alebo zrazeninu so zvyškom tekutiny (čiastočné zrážanie), malo by sa to považovať za pozitívny test.

Ak sa nevytvorí žiadna zrazenina, to znamená, že suspenzia zostáva homogénna, test je negatívny.

- test na koagulázu s použitím fibrinogénu

Fibrinogén sa používa rovnako ako plazma a používa sa ako na sklíčka, tak aj na skúmavky. Postupujte podľa popisu pre plazmu a interpretujte rovnakým spôsobom.

použitie

Používa sa na odlíšenie Staphylococcus aureus od koagulázovo negatívnych stafylokokov.

QA

Majte k dispozícii čerstvé kultúry kmeňa S. aureus, ktoré sa dajú použiť ako pozitívna kontrola. Kmeň S. epidermidis je tiež k dispozícii ako negatívna kontrola.

obmedzenia

- Pozitívny test by nemal byť ponechaný v inkubácii počas 24 hodín, pretože S. aureus produkuje fibrinolyzín, ktorý rozpúšťa zrazeninu.

- Na spoľahlivý test by sa mala použiť čerstvá alebo novo rekonštituovaná plazma, ako aj dôležité je použitie čerstvých bakteriálnych kultúr (18 až 24 hodín). Tým sa vyhnete falošným negatívom.

- Test sa musí vykonať spolu s negatívnou a pozitívnou kontrolou.

- Niektoré pevné médiá môžu interferovať s testom koagulázy. Neodporúča sa používať kolónie zo slaného manitolového agaru.

- Ak sa používa citrátová plazma, odporúča sa umiestniť 5 jednotiek heparínu na ml plazmy, aby sa zabránilo falošne pozitívnym výsledkom. Dôvodom je skutočnosť, že niektoré iné mikroorganizmy ako S. aureus môžu štiepiť citrát a spôsobiť zrážanie plazmy. V takom prípade je vhodné urobiť test na prítomnosť gramasu a katalázy.

- V skúmavke je dôležité monitorovať reakciu každých 30 minút, pretože existujú kmene S. aureus, ktoré produkujú vysoké koncentrácie fibrinolyzínu a rýchlo novo vytvorenú zrazeninu rýchlo riedia. Vyvarujte sa falošných negatívov.

- Pri monitorovaní testu zabráňte náhlemu pretrepávaniu skúmavky, čo môže zničiť začatie tvorby zrazeniny, ktorá sa neskôr neobnoví, čo môže spôsobiť falošné negatívy.

Referencie

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Editorial Panamericana SA Argentína.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentína.
3. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy na identifikáciu baktérií klinického významu. 3. vydanie. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentína.
4. Pro-Lab Laboratories. Králik koaguluje plazmu. K dispozícii na adrese: prolab.com
5. "Koaguláza." Wikipedia, slobodná encyklopédia. 12. februára 2019, 04:23 UTC. 22. apríla 2019, 15:50 wikipedia.org.