KINYOUNOVO FARBENIE: ZDÔVODNENIE A TECHNIKY - BIOLÓGIE - 2026

Farbenie Kinyoun je farbenie technika používaná na farbenie baktérií a parazitov kyseliny odolnú alkohol. Zrodilo sa z modifikácie Ziehl-Neelsenovho sfarbenia; Obidve techniky sa interpretujú rovnakým spôsobom, ale líšia sa dvoma prvkami: pri príprave hlavného činidla a tým, že Kinyounova technika nevyužíva teplo.

Z tohto dôvodu je tiež známa ako studená škvrna Ziehl-Neelsen alebo Kinyoun. Je určený na farbenie Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atypických mykobaktérií, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris a Cyclosporas cayetanensis.

Cryptosporidium parvum zafarbené Kinyounovým farbením. Punlop Anusonpornperm, od Wikimedia Commons

Je potrebné poznamenať, že Nocardia sa pri tejto technike slabo zafarbí, pretože je čiastočne odolná voči kyselinám a alkoholom, takže pre tento rod existuje modifikácia metodiky.

Na druhej strane bola studená Kinyounova technika kombinovaná s trichrómovou technikou modifikovanou Didierom na detekciu kokcidií (Cryptosporidium parvum a Isospora belli) a spór mikrosporídií (Enterocytozoon bieneusi a Encephalitozoon intestinalis).

základ

Hlavným farbiacim činidlom je karbolfuchsín alebo karbol fuchsín, ktorý má tú vlastnosť, že sa viaže na karbolové kyseliny, ktoré existujú vo vnútri bunkovej steny voskovitej bunkovej steny bohatej na lipidy (kyseliny mykolové) mykobaktérií a určitých parazitov.

Táto väzba nie je ovplyvňovaná kyslým bielidlom; preto sú mikroorganizmy definované ako kyslé.

Na rozdiel od techniky Ziehl-Neelsen - ktorá fixuje farbivo teplom - nie je tento krok v Kinyounovej technike potrebný, pretože roztok karbolického fuchsínu pripravený pre túto techniku ​​obsahuje vysokú koncentráciu fenolu.

Fenol rozpúšťa lipidový materiál v bunkovej stene, čo umožňuje vstup karbolfuchsínového farbiva. Po preniknutí farbiva zostane fixované napriek premývaniu kyslým alkoholom.

Týmto spôsobom získajú kyslé rýchle mikroorganizmy charakteristickú červenú farbu, zatiaľ čo všetko, čo nie je kyslé, sa zmení na farebné a zafarbí sa modro.

technika

materiály

- Modifikovaný karbol fuchsín.

- Alkyselina.

- Metylénová modrá.

Príprava fuchsínu z karbolu Kinyoun

- Základný fuchsín: 4 g.

- fenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Destilovaná voda: 100 ml.

Základný fuchsín by sa mal pomaly rozpustiť v alkohole za stáleho miešania. Následne sa kryštalizovaný fenol topí vo vodnom kúpeli pri 56 ° C. Po rozpustení sa pridá 8 ml roztoku fuchsínu pripraveného vyššie.

Príprava kyslého alkoholu

- Koncentrovaná kyselina chlorovodíková: 3 ml.

- etanol (95%): 97 ml.

Musí sa odmerať, spojiť a zmiešať.

Príprava kontrastného farbiva metylénovej modrej

- metylénová modrá: 0,3 g.

- Destilovaná voda: 100 ml.

Odváži sa a rozpustí.

Technika farbenia Kinyoun

1. Pripravte náter priamo zo vzorky, ktorým môže byť okrem iného spútum, pľúcna tekutina, močový sediment, cerebrospinálna tekutina alebo výkaly; alebo zo suspenzie mikroorganizmov získaných z čistých kolónií vyvinutých v primárnych kultivačných médiách.

2 - Opravte náter teplom.

3 - Náter umiestnite na farbiaci mostík a prikryte ho pripraveným fuchsínovým činidlom Kinyoun karbol. Nechajte odpočinúť 3 až 5 minút.

4. Opláchnite destilovanou vodou.

5 - Bieli sa kyslým alkoholom počas 3 minút a znova sa premyje destilovanou vodou.

6- Bielenie znova s ​​kyslým alkoholom počas 1 alebo 2 minút, až kým už neprestane viac vyfarbovať.

7. Opláchnite destilovanou vodou a nechajte ho vypustiť, sklíčko umiestnite do zvislej polohy.

8. Prípravok prikryte metylénovou modrou a nechajte pôsobiť 4 minúty.

9 - Umyte destilovanou vodou a nechajte uschnúť na vzduchu.

10- Skúmajte pri 40 x a potom 100 x.

Na zlepšenie a urýchlenie zafarbenia acidorezistentných mikroorganizmov pridajte 1 kvapku zmáčadla (ako je Tergitol č. 7) do 30 až 40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin.

Niektoré laboratóriá menia kontrastné farbivo metylénovej modrej na svetlo zelenú alebo kyselinu pikrovú; prvá dáva zelenú farbu pozadia a druhá generuje žltú farbu.

Špeciálna technika Kinyoun pre Nocardias

Na zlepšenie vyfarbenia baktérií rodu Nocardia sa používa modifikácia farbenia Kinyoun. Technika je nasledovná:

1 - Náter zakryte fuchsínom Kinyoun z karbolu na 3 minúty.

2. Umyte destilovanou vodou.

3 - Krátko zafarbite kyslým alkoholom pripraveným v 3%, až kým už neprestane viac sfarbenie.

4. Znovu umyte destilovanou vodou.

5- Prípravok prikryte metylénovou modrou a nechajte pôsobiť 30 sekúnd.

6. Opláchnite destilovanou vodou a nechajte uschnúť na vzduchu.

Kombinovaná karbolová fuchsínová a trichrómová technika modifikovaná Didierom

Táto technika sa odporúča na analýzu vzoriek stolice na spory kokcídií a mikrospórid sp. Postupuje sa nasledovne:

1 - Náter zakryte fuchsínom Kinyoun z karbolu na 10 minút.

2. Odstráňte farbivo a umyte ho destilovanou vodou.

3 - Bielenie po dobu 30 sekúnd alkoholom kyseliny chlorovodíkovej.

4. Znovu umyte destilovanou vodou.

5 - Náter zakryte roztokom trichrómu po dobu 30 minút pri teplote 37 ° C.

6. Opláchnite destilovanou vodou.

7- Bielenie po dobu 10 sekúnd alkoholom kyseliny octovej.

8. Náter umyte 30 sekúnd s použitím 95% etanolu.

QA

Ako pozitívna kontrola sa pripravia škvrny s kmeňmi Mycobacterium tuberculosis a zafarbia sa činidlami pripravenými na overenie, či baktérie nadobúdajú vhodnú farbu (červená-fuchsia).

Negatívne kontroly sa môžu tiež použiť tak, že sa rýchlo pripravia nátery s akýmkoľvek iným kmeňom než kyslým alkoholom, čím sa overí, či celá vzorka dostáva kontrastnú farbu.

Kinyounova technika v porovnaní s technikou Ziehl-Neelsen

Technika Kinyoun je jednoduchšia, pretože eliminuje krok zahrievania, ale jej hlavnou výhodou je to, že sa dlhodobo vyhýba emisii pár, vysoko toxických a rakovinotvorných. Preto je farbenie Kinyoun bezpečnejšie pre farbiaci personál.

Je dôležité vziať do úvahy, že činidlá sa nesmú dostať do priameho kontaktu s pokožkou, pretože sú žieravé a bielidlo je horľavé.

Pokiaľ ide o nevýhody, negatívny náter nemusí nutne znamenať, že organizmus nie je prítomný. Okrem toho prítomnosť bunkových zvyškov môže viesť k falošne pozitívnym výsledkom, čo vedie k zámene v diagnostike.

referencie

1. Aplikovaná klinická chémia. (2016). BK Kinyoun Kit. Dostupné na: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Kinyounove škvrny a dve Coccidia pri HIV. Medical Journal MD. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentína. Editorial Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydanie). Argentina, Editorial Panamericana SA
5. Prispievatelia Wikipedia. "Kinyounova škvrna." Wikipedia, slobodná encyklopédia. Wikipedia, The Encyclopedia, 8. február 2018. Web. 5. januára 2019.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Implementácia farbiacej techniky pre súčasnú diagnostiku Coccidia a Microsporidia. Hygienický ústav University of Republic. Montevideo. Uruguaj. K dispozícii na adrese: hygiene.edu.uy