FARBENIE KAPSÚL: ZDÔVODNENIE A TECHNIKY - BIOLÓGIE - 2026

Farbenie kapsule je diferenciálnej farbenie technika, ktorá má tú vlastnosť, že stres polysacharidového štruktúry obklopujúce určité baktérie a kvasinky zvanej kapsule. Používa sa v klinických laboratóriách na pomoc pri diagnostike určitých patológií spôsobených zapuzdrenými mikroorganizmami.

Používa sa tiež vo výučbových laboratóriách na demonštráciu tejto morfologickej štruktúry študentom zdravotníckych vied, ako sú: medicína, bioanalýza, ošetrovateľstvo alebo cytotechnológia.

Klebsiella pneumoniae je zafarbená škvrnou od kapsuly. Indická atramentová metóda so safranínom. Zdroj: А.А.В

Existuje niekoľko jednoduchých techník na preukázanie prítomnosti kapsuly v mikroorganizmoch, ktoré ju majú. Sú to: negatívne škvrny, Anthonyho škvrny a variant, ktorý kombinuje predchádzajúce dva.

Negatívne zafarbenie sa používa najmä vo vzorkách CSF, keď existuje podozrenie na prítomnosť kvasiniek Cryptococcus neoformans. Tieto kvasinky sú častou príčinou meningitídy.

Táto technika používa nigrosínový alebo indický atrament a je založená na vytvorení kontrastu medzi pozadím prípravku a nepreniknuteľnou kapsulou mikroorganizmu. Pozadie stmavne a kapsula je bezfarebná. Týmto spôsobom je táto štruktúra odhalená.

Pokiaľ ide o techniku ​​Anthony, dá sa povedať, že sa väčšinou používa vo výučbových laboratóriách na preukázanie polysacharidovej štruktúry v baktériách, ako je Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae a Neisseria meningitidis.

Použitie tejto techniky na diagnostické účely je veľmi zriedkavé, pretože existujú ďalšie bežné testy, ktoré umožňujú identifikáciu týchto mikroorganizmov.

základ

Kapsula je silná štruktúra polysacharidovej povahy. Toto chráni mikroorganizmy pred fagocytózou, a preto je ťažké preniknúť do štruktúry.

Preto sú škvrny kapsúl založené na kontraste. Farbivá zafarbia spodok prípravku, zatiaľ čo kapsula zostáva bezfarebná.

Preto je pri týchto technikách kapsula ľahko rozpoznateľná. Ak mikroorganizmus nemá kapsulu, nebude možné rozlíšiť tento typ sfarbenia, pretože všetko bude zafarbené rovnakou farbou.

Všetky techniky použité na zafarbenie kapsuly majú rovnaké odôvodnenie napriek použitiu rôznych farbív a postupov.

Techniky par

- Anthony škvrna

Anthonyho škvrna používa ako škvrnu kryštálovú fialovú farbu. Zafarbí to bakteriálne telo a pozadie fialové.

Na druhej strane sa používa 20% síran meďnatý. Slúži ako premývací roztok, to znamená, že odstraňuje prebytočný fialový kryštál z prípravku, čím sa kapsuly čistia, ale bez toho, aby došlo k strate farby bakteriálneho tela alebo pozadia.

materiály

- Dúhové mlieko.

- Šmykľavka.

- 1% fialový kryštál.

- 20% síran meďnatý.

- Optický mikroskop.

- Ponorný olej.

proces

Táto technika pozostáva z:

1. Mikroorganizmus kultivujte v dúhovom mlieku 36 hodín.
2. Na koniec podložného sklíčka umiestnite kvapku kultúry a vedľa nej umiestnite kvapku fialového pohára, premiešajte a rozotrite s koncom ďalšieho sklíčka.
3. Vysušte na vzduchu a nezohrievajte ho.
4. Opláchnite 20% roztokom síranu meďnatého, nechajte ho uschnúť na vzduchu.
5. Pozorujte pod mikroskopom s imerzným objektívom. Vyhľadajte na konci nátierky.

Je dôležité nepoužívať teplo ani na fixáciu, ani na sušenie, pretože to poškodzuje kapsulu. Neumývajte ani vodou.

interpretácia

Dúhové mlieko je vynikajúcim kultivačným médiom, pretože poskytuje potrebné živiny pre mikroorganizmy na vývoj prominentnej kapsuly.

Na druhej strane dúhové mlieko vytvorí silné a kompaktné dno, ktoré bude spolu s bakteriálnym telom zafarbené na purpurovo, ale kapsula, ktorá obklopuje mikroorganizmus, zostane bezfarebná. Preto je okolo bakteriálneho tela pozorovaný jasný halo.

Grafické znázornenie mikroskopického pozorovania náteru Klebsiella pneumoniae zafarbené Anthonyho škvrnou. Zdroj: Autor autor MSc. Marielsa Gil.

výhoda

Je to jednoduchá technika. Nevyžaduje sa oprava.

Malo by sa tiež poznamenať, že sa môžu použiť iné kultivačné médiá, ale mliečne médium je výhodné, pretože má výhodu v tom, že poskytuje výraznejšie kapsuly.

nevýhody

Je to o niečo náročnejšia technika ako negatívne zafarbenie a jej vizualizácia vyžaduje čakanie na úplné vysušenie prípravku.

-Negatívne farbenie

materiály

- Posuňte snímky.

- Kultivačné médium s mikroorganizmom.

- čínsky atrament alebo nigrosín.

- Optický mikroskop.

- fyziologický roztok.

proces

Nasaďte kvapku fyziologického roztoku na kryciu sklíčku a rozpustite malú časť mikrobiálnej kultúry. Je dôležité, aby prípravok nebol príliš hustý. Potom vložte kvapku čínskeho atramentu alebo nigrozínu a premiešajte.

Na prípravok sa potom umiestni krycia krycia fólia bez pretekania kvapaliny. Pozoruje sa pod mikroskopom najskôr zaostrením na 10-násobný objektív a následným presunom na 40-násobok.

Táto technika sa dá použiť aj na vzorkách CSF priamo. To znamená, že namiesto umiestnenia kvapky mikrobiálnej kultúry sa umiestni kvapka CSF.

výhoda

Je to jednoduchý spôsob vykonania a zároveň lacný. Nevyžaduje fixáciu alebo sušenie prípravku.

nevýhody

Nevýhodou je, že sa musí pozorovať pod mikroskopom pred vyschnutím prípravku, pretože ak k tomu dôjde, mikroorganizmy sa stiahnu, čo sťaží vizualizáciu.

Na druhej strane sa môžu vyskytnúť falošné poplachy, ak je analytik neskúsený, pretože leukocyty sa často zamieňajú s kvasinkami.

Pozorovanie kvasinkových kapsúl čínskou atramentovou alebo nigrosínovou technikou by sa malo považovať za predpokladanú diagnózu Cryptococcus neoformans, až kým sa nepreukáže s kultúrou.

Je to tak preto, že existujú aj iné kvasinky, ktoré by mohli byť príčinou meningitídy, a nie iba neoformány Cryptococcus, ako napríklad kmene rodu Candida a Rhodotorula, ako aj iné druhy kryptokokov.

interpretácia

Ak existujú mikroorganizmy v kapsulách, bude pozorované tmavé pozadie, pričom v tekutine budú plávať priehľadné telá, čo zvýrazní prítomnosť kapsuly.

Cryptococcus neoformans kapsula zafarbená čínskym atramentom. Zdroj: Fotografický kredit: Poskytovatelia obsahu: CDC / Dr. Leanor haley

- Indická atramentová technika

Túto techniku ​​je možné vykonať aj s nigrozínom. Je to kombinácia predtým vysvetlených techník. Táto technika používa kryštálovú fialovú a indickú farbu alebo nigrosín.

Bakteriálne telo zafarbí fialovú farbu z kryštálovej fialovej farby, pretože je negatívne nabité, zatiaľ čo nigrosín zafarbí spodnú časť náteru. Ak má baktéria kapsulu, bude sa javiť ako priehľadný halo okolo mikroorganizmu.

Kryštálovú fialovú farbu je možné nahradiť niektorou z týchto farieb: safranín, bázický fuchsín alebo metylénová modrá.

materiály

- Fialové sklo.

- Nigrozín alebo indický atrament.

- Posuňte snímky.

- Mikroskop.

proces

- Kultivujte mikroorganizmus v kultivačnom médiu.

- Na koniec podložného sklíčka umiestnite kvapku kultúry a vedľa nej umiestnite kvapku indického atramentu alebo kryštálu nigrosínu, premiešajte a roztiahnite s koncom ďalšieho sklíčka.

- Vysušte na vzduchu a nestarte sa na teplo.

- Zakryte roztokom fialového kryštálu na 1 minútu, premyte ho destilovanou vodou, ale veľmi jemne (jemný prúd), nechajte ho na suchom vzduchu.

- Pozorujte pod mikroskopom ponorený objektív. Vyhľadajte na konci nátierky.

interpretácia

Bude vidieť fialové bakteriálne telo a tmavé pozadie. Kapsula, ak je prítomná, bude vyzerať bezfarebne okolo baktérií.

Referencie

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Základné techniky mikrobiológie. Pozorovanie baktérií. Reduca (Biology). Mikrobiologická séria. 2010; 3 (5): 15 - 38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Základné škvrny v mikrobiologickom laboratóriu. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. K dispozícii na: medigraphic.com
3. Gil M. Negatívne zafarbenie: zdôvodnenie, technika, výhody a nevýhody. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentína. Editorial Panamericana SA
5. Tankeshwar A. Farba kapsuly: Princíp, postup a výsledky. 2019. Medical Microbiology Guide. K dispozícii v: microbeonline.com