PEPTÓNOVÁ VODA: ZDÔVODNENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Peptónovej vody je kvapalné médium obohatenie, neselektívny, ktorý sa používa najmä ako rozriedenia vzorkách potravín a iných materiálov. Toto médium je z chemického hľadiska veľmi jednoduché, obsahuje mäsový peptón, chlorid sodný a vodu.

Má určitú nutričnú hodnotu, čo umožňuje obohatiť vzorku. Ak existujú zneužívané baktérie, má toto médium schopnosť opraviť životaschopnosť. Je zvlášť užitočný pri regenerácii baktérií z čeľade Enterobacteriaceae.

Peptónová voda vo fľašiach. Zdroj: MSc. Marielsa gil

V prípade regenerácie salmonellasov sa odporúča použitie variantu peptónovej vody s obrusovaným účinkom; Slúži ako pred obohacovacie médium pre vzorku, v tomto prípade obsahuje ďalšie prvky, napríklad fosforečnan disodný a fosforečnan draselný.

Normálne sa peptónová voda pripravuje pri neutrálnom pH, existujú však aj iné varianty, v ktorých je potrebné, aby pH bolo 8,5 ± 0,2 (zásadité), pretože baktéria, ktorá sa má izolovať, je alkalická, ako je napr. Vibrio cholerae.

Ďalej môže byť toto médium použité ako základné médium pre testy fermentácie uhľohydrátov.

základ

Peptony poskytujú živiny potrebné pre bakteriálny rast, najmä dusík a aminokyseliny s krátkym reťazcom, zatiaľ čo chlorid sodný udržuje osmotickú rovnováhu.

Médium ďalej umožňuje dispergovať, homogenizovať a opravovať bakteriálne bunky, ktoré boli poškodené priemyselnými procesmi.

Ako riedidlo je ideálne a účinne nahrádza fyziologický roztok (SSF) alebo fosfátový tlmivý roztok (PBS).

Bakteriálny rast je zrejmý pozorovaním jeho zákalu.

príprava

Domáca príprava (nie komerčná)

Odvážte 1 g peptónu a 8,5 g chloridu sodného, ​​rozpustite v 1 litri destilovanej vody. PH by sa malo upraviť na 7,0. Na tento účel sa môže použiť 1N chlorid sodný.

Príprava pomocou komerčného média

Naváži sa 15 g dehydratovaného média a rozpustí sa v litri destilovanej vody. Homogenizujte zmes. V prípade potreby sa zmes varí 1 minútu, aby sa napomohlo úplnému rozpusteniu. Podľa potreby podávajte v 100 ml fľašiach alebo 10 ml skúmavkách. Autoklávujte pri 121 ° C počas 15 minút.

Chladí sa a používa sa alebo sa uchováva v chladničke. Konečné pH média je 7,2 ± 0,2.

Farba dehydratovaného média je svetlo béžová a pripravené médium je svetlo žlté.

Príprava na fermentačné testy

K predchádzajúcemu prípravku - pred sterilizáciou - sa musí sacharid pridať do konečnej koncentrácie 1% plus indikátor Andrade (kyslý fuchsín) alebo fenolová červená (0,018 g / l). Trubice by mali byť vybavené Durhamovým zvončekom na pozorovanie tvorby plynu.

Iné varianty peptónovej vody

Pufrovaná alebo pufrovaná peptónová voda

Obsahuje enzymatický hydrolyzát kazeínu, chlorid sodný, dihydrogenfosforečnan draselný a dodekahydrát hydrogenfosforečnanu sodného. Konečné pH je 7,0 ± 0,2.

Na prípravu sa naváži 20 g dehydratovaného média a rozpustí sa v 1 litri destilovanej vody. Nechajte odpočinúť približne 5 minút. Zahrievajte 1 minútu, kým sa úplne nerozpustí.

Podľa potreby nalejte do vhodných pohárov. Sterilizujte pomocou autoklávu pri 121 ° C po dobu 15 minút.

- Alkalická peptónová voda

Naváži sa 25 g dehydratovaného média a rozpustí sa v 1 litri vody. Postupujte ako je uvedené vyššie. PH sa pohybuje od 8,3 do 8,7.

použitie

Inokulum sa robí priamym umiestnením vzorky.

Používa sa na riedenie vzoriek, najmä ak existuje podozrenie, že môžu byť poškodené baktérie. Zvyčajne sú riedenia 1:10 a 1: 100.

Inkubujte 24 hodín v aerobióze pri 35 - 37 ° C.

Vzorky stolice

Pokiaľ ide o vzorky stolice na salmonelu, odporúča sa použiť ako tlmivé médium tlmenú alebo tlmenú vodu.

Postupujte takto:

Ak sa tvorí stolica, odoberte 1 g vzorky. Ak sú tekuté, vezmite 1 ml stolice a suspendujte v skúmavke s 10 ml pufrovanej peptónovej vody. V prípade rektálnych tampónov vypustite materiál obsiahnutý v tampóne do skúmavky pufrovanou peptónovou vodou.

Vo všetkých prípadoch vzorku veľmi dobre premiešajte a homogenizujte.

Inkubujte pri teplote 37 ° C počas 18 až 24 hodín. Následne sa subkultúra v obohacovacom bujóne, ako je seleničitanový cystínový bujón alebo tetrathionátový bujón pri 37 ° C počas ďalších 18 až 24 hodín. Nakoniec kultivujte v selektívnych médiách pre Salmonella, ako je napríklad agar SS, agar XLD, agar Hektoen.

Vzorky potravín

Peptónová voda sa používa ako obohacovacie médium alebo ako jednoduché riedidlo, ale ak sa hľadajú druhy Salmonella, používa sa ako pred obohacovacie médium, ako už bolo opísané.

Pri potravinách postupujte nasledovne:

V prípade pevných potravín odvážte 25 g vzorky a v prípade tekutých potravín odmerajte 25 ml. Táto časť sa umiestni do baniek obsahujúcich 225 ml peptónovej vody. Vzorku premiešajte a homogenizujte.

Ak existuje podozrenie, že mikrobiálne zaťaženie je vysoké, je možné urobiť sériové alebo desatinné riedenie na uľahčenie počítania jednotiek tvoriacich kolónie (CFU).

Počet riedení bude závisieť od typu vzorky a skúseností analytika.

Ak je naopak podozrenie, že mikrobiálna záťaž je veľmi nízka, nie je potrebné riedenie vykonávať. Následne subkultúra na selektívnych médiách.

V prípade potravín z mora, ako sú mäkkýše, ryby, okrem iného pri hľadaní Vibrio cholerae alebo iných druhov Vibria, by sa mala použiť peptónová voda upravená na pH 8,5 (zásaditá peptónová voda).

QA

Z každej pripravenej šarže by sa jedna až dve skúmavky mali inkubovať bez inokulácie počas 24 hodín v aerobióze pri 37 ° C. Na konci času by sa nemala pozorovať žiadna zákal alebo zmena farby.

Známe kontrolné kmene sa môžu tiež použiť na vyhodnotenie ich účinnosti:

Na tento účel sa môžu použiť nasledujúce bakteriálne kmene: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Vo všetkých prípadoch sa očakáva uspokojivý mikrobiálny vývoj, ktorý je pozorovaný zákalom média.

obmedzenia

- Dehydrované médium je veľmi hygroskopické, preto sa musí udržiavať mimo vlhkosti.

- Médium by sa nemalo používať, ak sa pozoruje akýkoľvek druh poškodenia.

- Dehydratované kultivačné médium by sa malo skladovať pri teplote 10 - 35 ° C

- Pripravené médium sa musí uchovávať v chlade (2-8 ° C).

Referencie

1. Techniky Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B a Velázquez O. pre mikrobiologickú analýzu potravín. 2009, 2. vydanie. Chemická fakulta, UNAM. Mexiko. Verzia pre správcov manuálov a dokumentov (AMyD) na Chemickej fakulte UNAM 1. K dispozícii na adrese: http://depa.fquim.unam.mx
2. Britannia Laboratories. Pufrovaná peptónová voda. 2015.K dispozícii na: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Peptónová voda. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories. Peptónová voda. 2015.K dispozícii na: britanialab.com
5. Merck Laboratories. Pufrovaná peptónová voda. K dispozícii na adrese: merckmillipore.com
6. Conda Pronadisa Laboratories. Alkalická peptónová voda. K dispozícii na adrese: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentína.