XLD AGAR: ZDÔVODNENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE

Agar XLD alebo xylóza lyzín desoxycholátu agarovom médiu je selektívny a diferenciálnej pevné živné pre izoláciu enteropatogénov. Taylor navrhol XL agar (xylóza, lyzín), aby zlepšil izoláciu rodu Shigella.

Zistil, že tento rod bol inhibovaný vo väčšine médií určených na izoláciu enteropatogénov. Následne sa pridal deoxycholát sodný, tiosíran sodný a citrát železito-amónny, aby sa zvýšila jeho selektivita. Tento vzorec sa ukázal byť užitočným pre izoláciu Shigella a Salmonella.

Rozdiely kolónií Shigella, Salmonella a koliformných baktérií na XLD agare. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Zdroje: A. Autor: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, PhD; Audra Marsh, s láskavým dovolením: Knižnica obrázkov verejného zdravia B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Autor: CDC / Dr. Farmár JJ, s láskavým dovolením: Knižnica obrázkov verejného zdravia

XLD agar sa skladá z kvasnicového extraktu, deoxycholátu sodného, xylózy, lyzínu, laktózy, sacharózy, tiosíranu sodného, citranu železito-amónneho, chloridu sodného, fenolovej červene a agaru. XLD Agar a SS Agar duo sa používajú vo väčšine bakteriologických laboratórií na štúdium vzoriek stolice na Shigella a Salmonella.

Iné laboratóriá uprednostňujú okrem iných dostupných možností kombináciu agaru CHROMagar Salmonella a XLD. Tieto duá sa dajú pripraviť v dvojitých Petriho miskách. Na jednu stranu umiestnia XLD agar a na druhú stranu druhú zvolenú pôdu.

základ

-Nutritívna sila

XLD agar obsahuje kvasnicový extrakt, ktorý slúži ako zdroj živín pre mikroorganizmy, ktoré rastú na tomto agare. Prítomnosť uhľohydrátov (xylóza, sacharóza a laktóza) dodáva baktériám energiu, ktorá ich môže fermentovať.

- Selektivita média

Ako inhibičná látka predstavuje deoxycholát sodný; To bráni rastu grampozitívnych baktérií, čo dáva médiu selektívny charakter.

-Diferenciálny výkon

Typické kolónie Shigella

Ako už bolo uvedené, agar XLD obsahuje xylózu; Tento uhľohydrát je fermentovaný všetkými baktériami, ktoré rastú v tomto médiu, s výnimkou rodu Shigella.

Toto je jedna z charakteristík, ktorá jej dodáva odlišný charakter, pretože kolónie Shigella sa od ostatných líšia tým, že vytvárajú červené kolónie, zatiaľ čo ostatné baktérie produkujú žlté kolónie.

Typické kolónie Salmonella

Rod Salmonella fermentuje tiež xylózu, pričom pôvodne vytvára žlté kolónie. Po vyčerpaní uhľohydrátovej xylózy však atakuje lyzín na jeho enzým lyzín dekarboxyláza. Dekarboxylácia lyzínu generuje zásady, ktoré menia farbu kolónie a okolitého média na pôvodnú červenú.

Toto správanie sa uskutočňuje iba u Salmonella, pretože koliformné formy, ktoré dekarboxylátujú lyzín, nemôžu médium alkalizovať. Je to preto, že koliformné baktérie tiež fermentujú prítomnú laktózu a sacharózu; preto je produkcia kyselín veľmi vysoká, takže v týchto baktériách zostáva žltá kolónia.

Je potrebné poznamenať, že rod Salmonella nefermentuje sacharózu ani laktózu.

Výroba H

XLD agar tiež umožňuje detekciu H ₂ S- výroby Salmonella ; Z tohto dôvodu sa spolieha na zdroj síry predstavovaný tiosíranom sodným a reakčný vývojár, ktorým je citran železito-amónny.

Druhé reaguje s H ₂ S (bezfarebný plyn) a tvorí viditeľný nerozpustné čiernej zrazeniny síranu železa. V tomto zmysle budú charakteristiky kolónií salmonely červené s čiernym stredom.

Je potrebné poznamenať, že pre H ₂ S nastať reakcia formovanie , je potrebná alkalické pH. To je dôvod, prečo ďalšie Enterobacteriaceae, že forma H ₂ S nemôžu, alebo tak zle v tomto prostredí, pretože vysokú kyslosť vyrobené fermentáciou sacharidov prítomné inhibuje alebo bráni reakciu.

- chlorid sodný, agar a fenolová červená

Nakoniec chlorid sodný udržuje osmotickú rovnováhu; agar je stužovadlo a fenolová červeň detekuje zmeny pH a mení farbu kolónií a média.

príprava

Navážte 55 g dehydratovaného média XLD a rozpustite v 1 litri vody. Zmes sa zahrieva a mieša sa, až kým nedosiahne bod varu. Neprehrievajte sa, pretože teplo poškodzuje médium a vytvára zrazeninu, ktorá mení morfológiu typických kolónií.

Toto médium sa nesmie autoklávovať. Pri rozpúšťaní sa musí nechať prejsť do vodného kúpeľa s teplotou 50 ° C. Pri chladení by sa mal podávať priamo na sterilné Petriho misky. Môžu sa naliať do jednoduchých alebo dvojitých dosiek. Nechajú stuhnúť a až do použitia sa uchovávajú v chladničke.

Pred použitím temperujte. Keďže ide o nesterilné médium, odporúča sa pripraviť ho blízko ku dňu použitia.

Konečné pH média by malo byť 7,4 ± 0,2. Farba pripraveného média je oranžovo-červená, priesvitná, bez zrazeniny.

Ak máte agar s xylózovým lyzínom (XL), môžete pridať deoxycholát sodný, tiosíran sodný a citrát železo-amónny. Týmto spôsobom sa získa vzorec agaru XLD.

aplikácia

XLD agar sa používa na regeneráciu enteropatogénov, hlavne rodu Shigella a sekundárne rodu Salmonella. Je užitočný na vyhodnotenie vzoriek stolice, vody a potravín.

Druhy vzoriek

Výkaly

Vzorky stolice sa môžu vysiať priamo na XLD agar, čo umožňuje dobrú distribúciu materiálu, aby sa získali izolované kolónie.

Aby sa zlepšila regenerácia salmonely, môže sa z média na obohatenie salmonelám vylúhovať agar XLD.

jedlo

V prípade potravín sa môžu použiť obohacovacie bujóny pre Salmonella a Shigella. Na salmonelu môžete okrem iného použiť seleničitanový cystínový vývar, svetlozelený tetrathionátový vývar.

V prípade Shigella môže byť obohatený o Shigella bujón s 0,5 u / ml novobiocínu, inkubovaný pri 42 ° ± 1 ° C počas 16-20 hodín.

voda

Pri analýze vody sa okrem iného odporúča technika membránovej filtrácie a použitie XLD agaru.

Výsadbové a identifikačné podmienky

Očkované médium sa inkubuje aeróbne pri 35 ° C počas 24 až 48 hodín.

Pozorujú sa typické kolónie každého rodu, podozrivé kolónie by sa mali podrobiť biochemickým testom na identifikáciu.

QA

Na vyhodnotenie kontroly kvality média sa môžu použiť nasledujúce bakteriálne kmene: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis 4 , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Rod Salmonella sa vyznačuje tým, že sa na tomto médiu nachádzajú červené kolónie s čiernym stredom alebo úplne čierne kolónie. Zatiaľ čo v rode Shigella musia byť kolónie červené, to znamená farba média.

V prípade Escherichia coli sa očakáva, že bude úplne alebo čiastočne inhibovaná; ak rastie, kolónie sú žlté. V prípade Proteus mirabilis sa očakáva slabý rast s ružovými kolóniami s čiernym stredom alebo bez neho. Nakoniec rod Klebsiella porastie ako žlté kolónie.

Záverečné myšlienky

XLD agar je široko používaný v bakteriologických laboratóriách pre svoju vysokú účinnosť pri regenerácii Shigella a má tiež dobrú regeneráciu rodu Salmonella.

Rall a kol. (2005) vo svojej práci s názvom „Hodnotenie troch obohacovacích bujónov a piatich pevných médií na detekciu salmonely u hydiny“ preukázali, že z 3 testovaných klasických médií (jasne zelený agar, SS agar a XLD agar) , XLD agar mal najlepšiu mieru výťažnosti.

Percento výťažnosti bolo nasledujúce: 13,8% pre jasne zelený agar, 27,6% pre SS a 34,5% pre XLD. Rambachov agar so 48% výťažkom a CHROMagar so 79,3% bol prekonaný iba chromogénnymi médiami.

Referencie

Choroby z potravín. Šigelóza. K dispozícii na adrese: anmat.gov.ar
"XLD agar." Wikipedia, slobodná encyklopédia. 9. februára 2019, 11:46 UTC. 10. apríla 2019, 19:25 wikipedia.org
Laboratóriá BBL. Agar CHROMagar Salmonella / BD XLD (biplate). 2013 Dostupné na: bd.com
Lab. Agar XLD. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen
Laboratórium Francisco Soria Melguizo. Agar XLD. K dispozícii na: http://f-soria.es/Inform
Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Hodnotenie troch obohacovacích bujónov a piatich platničiek na detekciu salmonely u hydiny. Braz. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147 - 150. K dispozícii od: scielo.br
Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentína.

XLD AGAR: ZDÔVODNENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026