VOGEL-JOHNSONOV AGAR: ODÔVODNENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Agar Vogel-Johnson je pevná strednej selektívny a diferenciálnej kultúra, špeciálne vyvinutý pre izoláciu Staphylococcus aureus. Toto médium vytvorili Vogel a Johnson v roku 1960 z modifikácie teluritového glycínového agaru formulovaného v roku 1955 Zebovitzom, Evansom a Nivenom.

Modifikácia spočívala vo zvýšení koncentrácie manitolu prítomného v médiu a inkorporácii indikátora pH. Súčasný vzorec sa skladá z tripteínu, kvasničného extraktu, manitolu, fosforečnanu draselného, ​​chloridu lítneho, glycínu, fenolovej červene, agaru, 1% roztoku teluritu draselného a vody.

Zdroj: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Malo by sa poznamenať, že existujú ďalšie médiá, ktoré sú podobne ako agar Vogel-Johnson selektívne na izoláciu S. aureus, ako je napríklad slaný manitolový agar a agar Baird Parker. V tomto zmysle by sa dalo povedať, že základom agaru Vogel-Johnson je zmes agaru so slaným manitolom a agaru Baird Parker.

V prvom prípade sa kolónie S. aureus odlíšia fermentáciou manitolu a zmenením indikátora pH na žltú. Na druhej strane, v druhom prípade sa S. aureus vyznačuje redukciou teluritu na telúr a vytvorením sivých až čiernych kolónií. Obidve vlastnosti sú pozorované na agare Vogel-Johnson.

Toto médium, rovnako ako jeho náprotivky, je užitočné na detekciu Staphylococcus aureus vo vzorkách potravín, hygienických kontrolách priemyselných výrobkov a v klinických vzorkách.

základ

Dodávka živín

Médium Vogel-Johnson obsahuje tripteín a kvasnicový extrakt; Obe látky poskytujú aminokyseliny s dlhým reťazcom, ktoré slúžia ako zdroje uhlíka a dusíka potrebné pre bakteriálny rast. Baktérie, ktoré sú schopné rásť v tomto médiu, budú z týchto látok získavať živiny.

Selektívna sila

Agar Vogel-Johnson je schopný inhibovať rast gramnegatívnych baktérií a dokonca aj niektorých grampozitívnych baktérií, čím podporuje vývoj koagulázovo pozitívnych stafylokokov. Inhibujúce látky sú telurit draselný, chlorid lítny a glycín.

Diferenčný výkon

Látky, ktoré tvoria toto diferenčné médium, sú manitol a telurit draselný. Manitol je uhľohydrát a pri fermentácii vznikajú kyseliny, ktoré spôsobujú, že sa médium mení z červenej na žltú, čo sa deje vďaka prítomnosti indikátora pH červeného fenolu.

Zatiaľ čo bezfarebný telurit, keď je redukovaný na voľné kovové telúrum, má tmavošedú až čiernu farbu.

Staphylococcus aureus fermentuje manitol a redukuje telurit na telúr. Z tohto dôvodu sú typické kolónie S. aureus v tomto médiu sivé alebo čierne obklopené žltým médiom.

Baktérie, ktoré rastú v tomto médiu a neredukujú telurit ani fermentovaný manitol, budú tvoriť priehľadné kolónie obklopené červeno sfarbeným médiom, ktoré je ešte intenzívnejšie ako pôvodná farba, vďaka alkalizácii média pomocou peptonov.

Na druhej strane, baktérie, ktoré redukujú telurit, ale nefermentujú manitol, budú rásť ako sivé alebo čierne kolónie obklopené tmavočerveným médiom.

Keby sa médium pripravilo bez pridania teluritu draselného, ​​kolónie S. aureus by sa vyvinuli ako žlté kolónie obklopené žltým médiom ako v slanom manitolovom agare.

Osmotická rovnováha a stužovadlo

Fosforečnan draselný udržuje osmotickú rovnováhu média a upravuje pH na neutralitu. 7.2. Kým agar dáva kultivačnému médiu pevnú konzistenciu.

príprava

Roztok teluritanu draselného 1% hm./obj

Tento roztok nie je obsiahnutý v dehydratovanom médiu, pretože nemôže byť sterilizovaný v autokláve. Z tohto dôvodu sa pripravuje osobitne a pridáva sa do už sterilizovaného média.

Niektoré komerčné domy predávajú hotový 1% roztok teluritu draselného. Ak sa chcete pripraviť v laboratóriu, postupujte takto:

Odvážte 1,0 g teluritu draselného a odmerajte 100 ml destilovanej vody. Rozpúšťajte telurit draselný v časti vody a potom doplňte množstvo vody až do dosiahnutia 100 ml. Roztok sterilizujte filtráciou.

Základné médium Vogel-Johnson Agar

Navážte 60 g dehydratovaného média a rozpustite v 1 litri destilovanej vody. Zmes sa zahreje do varu, aby sa uľahčilo úplné rozpustenie. Počas procesu rozpúšťania sa médium často mieša.

Sterilizuje sa v autokláve pri tlaku 15 libier a pri teplote 121 ° C počas 15 minút. Vyberte z autoklávu a nechajte ho odpočívať, až kým médium nedosiahne teplotu približne 45 až 50 ° C. Pridajte 20 ml predtým pripraveného 1% roztoku teluritu draselného.

Zmiešajte a nalejte do sterilných Petriho misiek. Nechajte stuhnúť a obráťte sa na držiaky dosiek, aby ste ich mohli až do použitia uskladniť v chladničke.

Konečné pH pripraveného média by malo byť 7,2 ± 0,2.

Pred výsevom vzorky počkajte, kým doska nedosiahne izbovú teplotu.

Farba pripraveného média je červená.

použitie

Aj keď sa môže použiť na izoláciu S. aureus vo všetkých typoch vzoriek, používa sa hlavne na mikrobiologickú analýzu farmaceutických výrobkov, kozmetiky a potravín.

Odporúča sa, aby inokulum bolo husté. Očkovanie sa môže vykonať ryhovaním pomocou platinovej rukoväte alebo povrchom špachtľou Drigalski.

Doštičky sa inkubujú pri 35 - 37 ° C počas 24 až 48 hodín aerobiózy.

QA

Nasledujúce kontrolné kmene sa môžu použiť na vykonanie kontroly kvality na médiu Vogel-Johnson:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 alebo Proteus mirabilis ATCC 43071.

Očakávaný výsledok je nasledujúci: pre kmene S. aureus uspokojivý rast s čiernymi kolóniami obklopenými žltým médiom. Pre S. epidermidis pravidelný rast s priesvitnými alebo čiernymi kolóniami obklopenými červeným médiom.

Podobne sa očakáva úplná inhibícia pre E. coli a čiastočná alebo celková inhibícia pre Proteus mirabilis; ak bude rásť, urobí to striedmo a kolónie budú čierne obklopené červenou farbou.

Referencie

1. Laboratóriá BD. VJ (Vogel a Johnson Agar). 2006. Dostupné na: bd.com
2. Britannia Laboratories. Vogel - Johnson Agar. 2015.K dispozícii na: britanialab.com
3. Britannia Laboratories. Tellurit draselný. 2015.K dispozícii na: britania.com
4. Himedia Laboratory. Vogel - Johnson Agar Medium. 2018. Dostupné na adrese: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Základňa Vogel - Johnson Agar. Manuál pre mikrobiológiu spoločnosti Merck. 12. vydanie, str. 502-503. K dispozícii na adrese: Users / Team / Downloads
6. Prispievatelia Wikipédie, „Ágar Vogel Johnson“, Wikipedia bezplatná encyklopédia, dostupná na: wikipedia.org.
7. Venezuelský štandardný koberec 1292-89. (1989). Foods. Izolácia a stanovenie počtu Staphylococcus aureus. K dispozícii na: sencamer.gob.ve