ŽIARIVO ZELENÝ AGAR: ODÔVODNENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Brilantná zelené agar je pevné kultivačné médium s vysokým stupňom selektivity. Používa sa výlučne na izoláciu kmeňov rodu Salmonella, existujú však určité výnimky, napríklad druhy typhi a paratyphi, ktoré na tomto médiu nerastú.

Hľadanie rodu Salmonella je časté vo vzorkách stolice, vody alebo potravín. V tomto zmysle môže byť toto médium veľmi užitočné. Tento agar vytvorili v roku 1925 Kristensen, Lester a Jurgens, neskôr ho upravil Kauffmann.

Žiarivo zelený agar. Fermentujúce a nefermentujúce kolónie. Zdroj: Výstava MJ Richardson / Invisible Worlds - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Creative Commons License.

Skladá sa z pluripeptonov z peptického trávenia živočíšneho tkaniva a pankreatického trávenia kazeínu, obsahuje tiež kvasnicový extrakt, chlorid sodný, laktózu, sacharózu, fenolovú červenú, jasne zelenú a agarový agar.

Vyznačuje sa tým, že je pre väčšinu baktérií skôr nehostinným prostredím, ktoré podporuje rast salmonely, avšak niektoré koliformné organizmy sú schopné v ňom existovať a slabo sa vyvíjať.

Je dôležité poznamenať, že rod Shigella nerastie na tomto médiu a ani Salmonella typhimurium ani Salmonella paratyphi. Ak teda chcete tieto mikroorganizmy izolovať, mali by sa použiť okrem iného aj iné médiá, ako napríklad XLD agar.

základ

Žiarivo zelený agar

Každá zo zložiek, ktoré tvoria médium, plní špecifickú funkciu, ktorá určuje vlastnosti a vlastnosti agaru.

Pluripeptony a kvasnicový extrakt sú zdrojom živín, z ktorých mikroorganizmy prijímajú dusík a minerály potrebné na ich vývoj. Laktóza a sacharóza sú zdrojom energie pre mikroorganizmy, ktoré ich dokážu fermentovať.

Jasne zelená je inhibičná látka, ktorá zabraňuje rastu grampozitívnych baktérií a veľkého počtu gramnegatívnych mikroorganizmov.

Chlorid sodný poskytuje médiu osmotickú stabilitu. Kým fenolová červená je indikátorom pH, pri detekcii produkcie kyseliny fermentáciou uhľohydrátov zmení farbu.

Nefermentujúce kolónie laktózy a sacharózy rastú na tomto médiu v ružovkastej alebo priehľadnej bielej farbe na červenom pozadí. Napríklad baktérie rodu Salmonella.

Kým baktérie fermentujúce laktózu alebo sacharózu schopné rásť na tomto médiu, vyvinú sa žlto zelené alebo žltozelené kolónie na zelenožltom pozadí. Napríklad Escherichia coli a Klebsiella pneumoniae.

Varianty jasne zeleného agaru (BGA)

Existujú ďalšie varianty jasne zeleného agaru; Agar novobiocínovej brilantnej zelenej glukózy (NBG) a agar novobiocínovej brilantnej zelenej glycerollaktózy (NBGL).

Agar jasne zelenej glukózy z novobiocínu

Obsahuje sójový agón tryptikázy, citrát železito-amónny, pentahydrát tiosíranu sodného, ​​fenolovú červenú, glukózu, svetlozelenú, novobiocín a destilovanú vodu.

Používa sa na izoláciu kolónií Salmonella zo vzoriek stolice.

V tomto prípade sú jasne zelená a novobiocín inhibičné látky, ktoré bránia rastu grampozitívnych baktérií a niektorých gramnegatívnych mikroorganizmov.

Tiosíran sodný je zdrojom sulfidu a citrát železitý je zdrojom železa, ktoré sú potrebné na odhalenie výroby sírovodíka tvorbou čiernej zrazeniny síranu železitého.

Glukóza je fermentovateľný uhľohydrát a indikátorom pH je fenolová červená.

Na tomto médiu sa kolónie Salmonella vyvíjajú veľké s čiernym stredom obklopeným načervenalým halogénom a za ním jasne viditeľnou oblasťou. Niektoré kmene Citrobacter freundii produkujú kolónie identické s kolóniami Salmonella.

Novobiocínový brilantný zelený glycerol-laktózový agar (NBGL)

Toto médium obsahuje sójový agar tryptikázy, citrát železito-amónny, tiosíran sodný, laktózu, glycerol, svetlozelenú, novobiocín a destilovanú vodu.

Rozdiel medzi týmto médiom a predchádzajúcim médiom spočíva v tom, že glukóza je nahradená laktózou a glycerolom a fenolová červená sa nepoužíva.

Médium sa tiež používa na izoláciu druhov Salmonella, kolónie sa vyvíjajú čierne kvôli produkcii sírovodíka.

Iba kolónie, ktoré neprodukujú kyseliny z glycerolu alebo laktóza dosiahnutie dostatočnej H ₂ S produkciu , pretože nízke pH interferuje s H ₂ S tvorby . To má za následok bezfarebné kolónie pre väčšinu druhov Proteus a Citrobacter.

príprava

- Odvážte 58 gramov komerčne získaného dehydratovaného média. Pridajte ju do litra redestilovanej vody. Premiešajte, nechajte niekoľko minút stáť a umiestnite zmes na zdroj tepla, až kým sa úplne nerozpustí.

-Autokláv pri 15 ° C počas 15 minút, neprekračujte sterilizačný čas.

- Odložte ju a podávajte za horúca v sterilných Petriho miskách. Konečné pH by malo byť 6,9 ± 0,2.

-Ztuhnite a uložte do chladničky do použitia. Pred nasadením by doštičky mali mať izbovú teplotu.

- Práškové médium je zelenej farby a pripravené má oranžovo-hnedú alebo červenkasto-zelenú farbu, v závislosti od pH a komerčnej spoločnosti. Veľmi hnedá farba naznačuje, že agar bol prehriaty.

- Po stuhnutí agaru sa neodporúča prepracovať, pretože sa médium zhoršuje.

Použitie / aplikácie

Toto médium sa okrem iného používa na vyhľadávanie kmeňov rodu Salmonella zo vzoriek stolice a mliečnych potravín.

Pretože sa jedná o dosť nehostinné prostredie, odporúča sa zasiať bohaté inokulum, ak sa použije priama vzorka. V opačnom prípade by sa vzorky pred obohatením a obohatením mali vykonať pred zasiatím do tohto média.

Pretože niektoré kmene Salmonella sú inhibované alebo rastú s ťažkosťami, je vhodné sprevádzať toto médium iným selektívnym agarom pre Salmonella.

Každá kolónia s typickou charakteristikou salmonely sa musí podrobiť biochemickým testom na jej definitívnu identifikáciu.

QA

Na testovanie dobrého výkonu jasne zeleného agarového média sa môžu na pozorovanie ich vývoja na tomto kmeni použiť kmene ATCC.

Najčastejšie kmene používané na kontrolu kvality sú: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Prvé 3 by mali dať ružovkasté alebo priehľadné biele kolónie na červenom pozadí. Salmonella s dobrým vývojom a bielkoviny s nízkym alebo pravidelným rastom.

V prípade Klebsiella a Escherichia sa očakávajú žlto-zelené kolónie so žltým pozadím a v prípade Shigella a Staphylococcus by sa mali inhibovať.

Dehydrované médium sa musí skladovať pri izbovej teplote, na suchom mieste, pretože je veľmi hygroskopické.

Referencie

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA brilantný zelený agar. 2009
2. Britannia Laboratory. Žiarivo zelený agar. 2015.
3. Laboratórium BD. BD brilantný zelený agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydanie). Argentina, Editorial Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentína. Editorial Panamericana SA