THAYEROV MARTÍNOVÝ AGAR: ZÁKLADY, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Agar Thayer Martin je vysoko výživné a pevný selektívne médium pre izoláciu Neisseria meningitidis a Neisseria gonorrhoeae; oboje známe ako patogénne alebo klinicky dôležité Neisserias.

Jednou z najdôležitejších zvláštností Thayer Martin Agar je vysoký obsah výživových doplnkov. Táto vlastnosť je nevyhnutná, pretože Neisserias sú z hľadiska výživy veľmi náročné mikroorganizmy, a preto nerastú v bežných médiách.

Thayer Martin / Agar Obchodné médium Thayer Martin. Zdrojový obrázok 1: Prevzatý autorom MSc. Marielsa Gil, obrázok 2. Baktérie Pixinio.com boli kolonizované, upravené, Thayer, Martin, agar.

Na druhej strane, keďže sa tieto mikroorganizmy bežne vyskytujú v nesterilných oblastiach, je potrebné pridať inhibítory, aby sa zabránilo rastu sprievodnej flóry bez toho, aby to ovplyvnilo vývoj rodu Neisseria.

Tento agar sa skladá z GC základného agaru, hemoglobínu, doplnkových doplnkov výživy a komplexu inhibičných látok (antibiotiká a fungicídy). Obchodné domy predávajú každý doplnok samostatne.

Vzorka, ktorá sa má vysiať v tomto médiu, bude závisieť od hľadaného mikroorganizmu. Pre Neisseria gonorrhoeae sú ideálnymi vzorkami vaginálne a uretrálne sekréty. Zatiaľ čo v prípade Neisseria meningitidis sú najčastejšie používanými vzorkami CSF, hrtanové a nazofaryngeálne exsudáty.

základ

Neisserias sú mikroorganizmy klasifikované ako nepríjemné, a preto je ich izolácia obtiažna. Preto je Thayer Martín komplexným médiom a každá jeho zložka plní funkciu, ktorá je vysvetlená nižšie:

GC základný agar

GC agar obsahuje proteózový peptón, kukuričný škrob, chlorid sodný, fosforečnan draselný, fosforečnan monodraselný a agar. Jeho zložky poskytujú základné výživné látky pre mikrobiálny vývoj, neutralizujú toxické mastné kyseliny, pomáhajú udržiavať osmotickú rovnováhu, definujú pH a poskytujú pevné prostredie médiu.

hemoglobín

Hemoglobín poskytuje faktory V a X (nikotínamid adenín dinukleotid NAD a hemín). Z tohto dôvodu druhy Haemophilus tiež rastú v tomto médiu. Hemoglobín sa môže získať komerčne v dehydratovanej forme alebo sa do média môže pridať čerstvá defibrinovaná hovädzia krv.

Obohatený doplnok

Na druhú stranu je potrebné do média Thayer-Martin pridať doplnok obohatenia, pretože živiny obsiahnuté v základnom agare nepostačujú na splnenie požiadaviek rodu Neisseria.

Najčastejšie používaný doplnok na obohatenie sa nazýva izovitalex. Obsahuje glutamín, adenín, NAD, kokarboxylázu, guanín, dusičnan železitý, kyselinu p-aminobenzoovú, vitamín B12, tiamín a glukózu. Všetky tieto zlúčeniny sú nevyhnutné pre správny vývoj patogénnych Neisserias.

inhibítory

Pretože sa jedná o vysoko výživné médium, musia sa použiť inhibítory, ktoré bránia rastu mikroorganizmov z obvyklej flóry oblasti a tým podporujú izoláciu rodu Neisseria.

Inhibičný komplex sa skladá z vankomycínu, kolistínu a nystatínu. Vankomycín inhibuje rast grampozitívnych baktérií, kolistín zabraňuje rastu gramnegatívnych baktérií, ako sú Pseudomonas a niektoré saprofytické Neisserias, a nystatín pôsobí na kvasinky, ako napríklad Candida albicans.

Thayer Martin Agar bol neskôr upravený; zmeny pozostávali z pridania trimetoprimu, zvýšenia množstva agaru a pridania extra glukózy. Tieto zmeny významne zlepšili regeneráciu druhov Neisseria gonorrhoeae.

Je potrebné poznamenať, že trimethoprim inhibuje rast rodu Proteus a jeho následnú rojovú tvorbu. V tomto zmysle sú to antibiotiká, ktoré poskytujú selektívny charakter média Thayer Martin.

príprava

Pôvodný agar Thayer Martin

-GC agar

Navážte 8,2 g dehydratovaného GC média a suspendujte v 100 ml. Miešajte a varte 1 minútu za častého miešania, aby sa úplne rozpustil. Zmes sa sterilizuje v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.

- 2% hemoglobínu

2 g dehydratovaného hemoglobínu sa suspendujú v 2 alebo 3 ml horúcej destilovanej vody, až kým nevznikne homogénna zmes. Po malých množstvách sa pridá voda na doplnenie objemu 100 ml. Pred sterilizáciou musí byť suspenzia homogénna.

Sterilizuje sa v autokláve počas 15 minút.

-Obohatenie na obohatenie

Rekonštituujte obchodnú liekovku riedidlom poskytnutým rovnakou obchodnou spoločnosťou. Dobre premiešajte. Množstvo riedidla, ktoré sa má použiť, bude uvedené v pokynoch k súprave.

-VCN inhibičný doplnok (vankomycín, kolistín, nystatín)

Injekčnú liekovku rekonštituujte riedidlom poskytnutým obchodnou spoločnosťou. Dobre premiešajte. Množstvo riedidla, ktoré sa má použiť, bude uvedené v pokynoch k súprave.

-Výrobky

Na každých 100 ml GC agaru postupujte nasledovne:

Keď GC agar vyjde z autoklávu, nechajte ho vychladnúť na teplotu približne 50 ° C a pridajte 2 ml pripraveného roztoku hemoglobínu, 2 ml obohateného doplnku (izobitalex alebo britalex) a 2 ml inhibičného doplnku. Zmiešajte a podávajte v sterilných Petriho miskách.

Nechajte stuhnúť a skladujte v chladničke až do použitia.

Farba pripraveného média je čerešňovo červená. Konečné pH média je 7,2 ± 0,2

Upravený agar Thayer Martin

Navážte 8,2 g dehydratovaného GC média a suspendujte v 100 ml. Pridajte 1 g agar-agaru a pridajte 0,3 g glukózy. Miešajte a varte 1 minútu za častého miešania, aby sa úplne rozpustil. Zmes sa sterilizuje v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.

Pripravte hemoglobín a doplnok na obohatenie krvi, ako už bolo uvedené.

Ako supresný doplnok sa používa VCNT (vankomycín, kolistín, nystatín, trimetoprim).

-Výrobky

Postupujte podľa popisu pre pôvodný agar Thayer Martin.

použitie

Thayer Martin Agar by sa mal nechať zahriať skôr, ako sa vzorky prúžia. Bežne používané vzorky sú faryngeálne výtery, nazálne výtery, vaginálne, uretrálne a / alebo rektálne výboje a CSF.

Používajte čerstvé vzorky a na agare urobte silné inokula. Vzorky sa naočkujú priamo vypúšťaním materiálu a potom sa na povrch nanesú vyčerpania.

Doštičky sa inkubujú pri teplote 35-37 ° C počas 24 až 48 hodín v mikroaerofilní nádobe (5% CO ₂ ). Na konci inkubačnej doby sa doštičky vyšetria na malé, sivé a niekedy mukoidné kolónie.

Vykonajte gramové a potvrdzovacie biochemické testy na podozrivých kolóniách.

QA

Nasledujúce mikrobiálne kmene sa môžu použiť na kontrolu kvality Thayer Martin Agar.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 a Neisseria meningitidis ATCC 13090; U obidvoch kmeňov sa očakáva uspokojivý vývoj.

Mali by sa zahrnúť aj tieto kmene: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 a Candida albicans ATCC 10231. Vo všetkých z nich sa v tomto médiu očakáva úplná alebo čiastočná inhibícia.

obmedzenia

- Musíme mať na pamäti, že baktérie, ktoré sú rezistentné na použité inhibítory, môžu rásť v médiu.

- Existujú kmene Neisseria gonorrhoeae, ktoré môžu byť citlivé na použitú koncentráciu vankomycínu. Z tohto dôvodu sa odporúča používať čokoládový agar doplnený izovitalexom, ale bez inhibítorov.

- Existujú kvasinkové kmene rezistentné na nystatín, ktoré môžu rásť v tomto médiu a interferovať s izoláciou patogénnych Neisserias, najmä gonokokov.

Referencie

1. Diagnostické laboratóriá Valtek. Thayer-Martin Agar, 2016. K dispozícii na: com
2. Britannia Laboratories. Thayer Martin Stredne upravené. 2010. K dispozícii na adrese: britanialab.com
3. Prispievatelia Wikipedia. Thayer-Martinov agar. Wikipedia, slobodná encyklopédia. 26. októbra 2017, 16:33 UTC. K dispozícii na: wikipedia.org 4. Prístup k 28. februáru 2019.
4. Britannia Laboratories. GC agar. 2010. K dispozícii na: britanialab.com.
5. Laboratóriá BBL ™ stredné obohatenie pre náročné mikroorganizmy. 1999. Dostupné na: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentína.