Bizmutu sulfitový agar je pevná strednej selektívny a diferenciálnej kultúra, špeciálne vyvinutý pre izoláciu Salmonella enterica poddruh enterica sérotyp Typhi, okrem iného druhy Salmonella. Médium je známe ako BSA agar pre jeho skratku v anglickom agare bizmutosulfitu.
Pôvodný vzorec pre siričitanový bizmut bizmutu bol vytvorený v roku 1927 Wilsonom a Blairom (Glukóza bizmutu siričitanového železa); obsahoval siričitan sodný, glukózu, bizmutový roztok, citran amónny, síran železnatý a agar-agar.
Rast 48 hodín inkubácie Salmonella sp na sulfitovom agare bizmutu. Zdroj: Pixnio.com Autor: Dr. WR Erving, USCDCP
Dnes existuje modifikácia pôvodného média pozostávajúceho z mäsového extraktu, mäsových a kazeínových peptonov, indikátora siričitanu bizmutitého, glukózy, fosforečnanu dvojsodného, síranu železnatého, jasne zeleného a agarového agaru.
Existuje veľa prostriedkov na izoláciu druhov Salmonella, ale pokiaľ ide o regeneráciu sérotypu Typhi, agar sulfitu bizmutu má oproti nim významnú výhodu, pretože vo väčšine prípadov sa získa veľmi nízka alebo žiadna regenerácia tohto mikroorganizmu. ,
Pri izolácii enteropatogénov je však potrebné použiť viac ako jeden druh média, pretože agar sírnik bizmutitý je menej účinný pre iné druhy Salmonella a pre rod Shigella, ktoré sa inhibujú alebo vyvíjajú veľmi zle. v tomto agare.
Je potrebné poznamenať, že zo všetkých druhov Salmonella je sérotyp Typhi jedným z najdôležitejších enteropatogénov u ľudí, pretože je jediným zdrojom. Tento sérovar spôsobuje tyfus, gastroenteritídu, bakterémiu a septikémiu.
Z tohto dôvodu je dôležité zahrnúť tento agar pri analýze vzoriek vody, výkalov alebo potravín, ak existuje podozrenie na jeho prítomnosť.
základ
Rovnako ako väčšina kultivačných médií obsahuje bizmut sulfitový agar živiny na podporu bakteriálneho rastu, ako sú peptony a mäsový extrakt. Podobne glukóza funguje ako zdroj energie a uhlíka.
Na tomto médiu však nebudú rásť všetky baktérie, pretože agar bizmutitý siričitý je selektívne médium. Obsahuje zlúčeniny, ktoré inhibujú rast grampozitívnych mikroorganizmov a určitých gramnegatívnych baktérií. Týmito zlúčeninami sú: indikátor siričitan bizmutitý a svetlozelený.
Fosforečnan disodný udržuje osmolaritu a pH média.
Navyše, bizmutu siričitan agar je diferenciálnej strednej vďaka prítomnosti síranu železnatého, čo ukazuje, že tvorba H 2 S. H 2 S tvorenej baktériami reaguje s síranu železnatého a tvoria jasne viditeľný nerozpustné čiernej zrazeniny.
Nakoniec agar poskytuje pevnú konzistenciu média.
príprava
Navážte 52,3 g dehydratovaného média a rozpustite v jednom litri vody. Zmes sa zahrieva do varu 1 minútu za častého miešania, až kým sa úplne nerozpustí. Neprehrievajte sa príliš veľa. Toto médium nie je autoklávovateľné, pretože extrémne teplo poškodzuje kultivačné médium.
Pred podávaním v sterilných Petriho miskách nechajte vychladnúť na 45 ° C a pretrepte. Dosky sa odporúčajú vyrábať s dobrou hrúbkou. Na tento účel sa do každej platne naleje 25 ml. Nechajte stuhnúť. Keďže ide o médium, ktoré nie je sterilizované, je vhodné navrhnúť jeho okamžité použitie.
Štúdia, ktorú vykonal D'aoust v roku 1977, však ukázala, že je lepšie zotavenie Salmonella typhimurium a Salmonella enteritidis, pretože stredný vek agaru siřičitanu bizmutitého nemá vplyv na výkonnosť serovarov Typhi a Paratyphi B.
D'aoust odporúča použitie doštičiek v deň 4 chladenia, aj keď varuje, že s pribúdajúcim vekom sa selektivita znižuje a kmene Proteus vulgaris sa vyvíjajú ľahšie.
Z tohto dôvodu je u vysoko kontaminovaných vzoriek, ako sú stolica, výhodné použiť čerstvo pripravené médium. Inak použite 4. deň po jeho príprave. Ďalší autori odporúčajú používať platne deň po ich príprave a uchovávať v chladničke.
Chladené platne musia byť pred použitím temperované. PH média by malo byť 7,5 ± 0,2. Surové médium je béžové a pripravené médium je zelenkavo sivé opalescentné.
aplikácia
Medzi vzorky, ktoré sa môžu pestovať v tomto médiu, patria vzorky trusu, pitnej alebo odpadovej vody a potravín.
Aby sa zlepšili izoláty, odporúča sa pred naočkovaním na siričitan bizmutitý bizmut uskutočniť pred obohatenie bujónom s laktózou a po obohatení bujónom s tetrathionátom alebo seleničitanom s cystínom.
Doštičky sa inkubujú pri 35 ° C ± 0,2 počas 24 až 48 hodín v aerobióze.
Charakteristiky kolónií na agarovom sulfite bizmutu
Kolónie Salmonella Typhi sú zvyčajne pozorované na tomto agare do 24 hodín s čiernym stredom a obklopené jasne zeleným halo. Zatiaľ čo v priebehu 48 hodín z dôvodu tvorby sírovodíka úplne sčerneli.
- Toto médium inhibuje väčšinu druhov rodu Shigella.
- S. Typhi a S. arizonae môžu poskytnúť veľmi podobné kolónie.
-The koliformné baktérie, ktoré produkujú H 2 S, ako je Proteus a Citrobacter vyrobené z kolónií podobnými ako u Salmonella, preto je nutné vykonávať biochemické identifikačných testov.
- na získanie izolovaných kolónií sa musí vykonať dobré pruhovanie; Je to jediný spôsob, ako pozorovať typické vlastnosti kolónií rodu Salmonella.
QA
Na kontrolu sterility sa neinokulovaná platňa inkubuje pri 37 ° C a očakáva sa, že nedôjde k žiadnemu rastu ani zmene farby.
Na kontrolu kvality známe kmene, ako napríklad:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Očakáva sa, že Escherichia coli a Shigella flexneri budú čiastočne inhibované vývojom zelenohnedých a hnedých kolónií. Keďže obidva salmonely musia mať vynikajúci vývoj s čiernymi kolóniami s kovovým leskom a nakoniec musí byť úplne potlačená Enterococcus faecalis.
Referencie
- Wilson, W. a EM McV. Blair. 1. Použitie média obsahujúceho síran siričitan bizmutitý bizmutitý na izoláciu B. typhosus a B. proteus. The Journal of Hygiene, 1927; 26 (4), 374 - 391. Zdroj: .jstor.org
- D'aoust JY. Vplyv podmienok uchovávania na agar siřičitanu bizmutitého. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122 - 124. K dispozícii na adrese: ncbi.nlm.nih.gov
- Laboratóriá IVD. Agar bizmut-siričitan podľa WILSON-BLAIR. 2009. K dispozícii na: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
- Himedia Laboratories. Agar sulfát bizmutitý. 2017. K dispozícii na adrese: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentína.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G a Ybarra M. Bakteriologická kvalita surového kozieho mlieka vyrobeného v Miravalles, Puebla. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45 - 54