TRYPTIKÁZA V SÓJOVOM AGARE: ODÔVODNENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Sójový agar tryptón alebo Trypticase Soy Agar je pevné kultivačné médium, a nutričné neselektívne. Je označený písmenami TSA pre jeho skratku v anglickom Trypticase Soy Agar. Skladá sa z tripteínu, sójového peptónu, chloridu sodného a agaru.

Vďaka svojej vysokej výživovej sile je ideálny na pestovanie stredne náročných a nenáročných mikroorganizmov. Médium bez ďalších doplnkov sa neodporúča pre primárne kultúry, ale je veľmi užitočné okrem iného na subkultiváciu čistých kmeňov a ich udržiavanie životaschopnosti.

Tryptikázy v sójovom agare v skúmavkách s bakelitovými uzávermi. Zdroj: Fotografie zhotovená autorom MSc. Marielsa Gil.

Tento agar tiež slúži ako základ na prípravu obohatených médií, ako je krvný agar, najmä ak je potrebné pozorovať hemolytické vzorce a namontovať taxóny optoquínu a bacitracínu, ktoré sa vyžadujú pri diagnostike Streptococcus pneumoniae a Streptococcus pyogenes.

Na druhej strane, v kombinácii s antibiotikami je užitočné izolovať klinicky dôležité fakultatívne a prísne anaeróbne mikroorganizmy zo vzoriek so zmiešanou flórou.

Nakoniec zloženie sójového agaru tryptikazínu a jeho vlastnosti spĺňajú požiadavky stanovené rôznymi liekopismi (európsky, japonský a severoamerický).

základ

Pre správny vývoj baktérií je nevyhnutná prítomnosť energetických zdrojov, ako sú aminokyseliny, vitamíny, purínové a pyrimidínové bázy.

V tomto zmysle tripteín a sójový peptón dodávajú tieto živiny mikroorganizmom, čo umožňuje ich plný vývoj. V prípade náročných baktérií je však potrebné tento agar doplniť defibrinovanou krvou alebo zahriatou krvou, aby sa zvýšilo jej obohatenie.

Na druhej strane, ak sa do média pridajú antibiotiká, stáva sa selektívnym médiom. Môže sa tiež pridať 0,6% kvasnicový extrakt, aby sa podporila izolácia druhov rodu Listeria, zatiaľ čo pridanie cystínového teluritu a jahňacej krvi je ideálne pre Corynebacterium diphteriae.

Nakoniec chlorid sodný poskytuje osmotickej rovnováhe médium a agar poskytuje pevnú konzistenciu.

príprava

Doštičky so sójovým agarom Trypticasein

Na prípravu sójového agaru tryptikazínu by sa malo digitálne zvážiť 40 g dehydratovaného komerčného média. Rozpustí sa v jednom litri destilovanej vody obsiahnutej v banke.

Zmes sa nechá 5 minút odpočívať a potom sa prenesie na zdroj tepla, ktorý pomôže rozpustiť médium. Mal by sa často miešať a variť 1 až 2 minúty. Následne sa médium sterilizuje v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.

Nechajte vychladnúť na 50 ° C a distribuujte do sterilných Petriho misiek. Nechajte stuhnúť, prevrátiť, usporiadať na plakóroch a uchovávať v chladničke.

Konečné pH média by malo byť 7,3 ± 0,2.

Malo by sa poznamenať, že farba dehydratovaného kultivačného média je svetlo béžová a musí sa uchovávať pri teplote 10 až 35 ° C na suchom mieste.

Pripravený agar má svetlú jantárovú farbu. Pripravené platne by sa mali pred použitím uchovávať v chladničke (pri teplote 2 - 8 ° C).

Dosky musia pred použitím dosiahnuť izbovú teplotu.

Doštičky so sójovým agarom Trypticaseinom doplnené krvou

Krvný agar sa pripravuje pridaním 5% defibrinovanej krvi v čase ochladenia sójového agaru tryptikázy na 50 ° C. Zmes sa homogenizuje otáčaním jemnými pohybmi.

Podávajte v sterilných Petriho miskách. Stredná farba by mala byť čerešňovo červená.

Doštičky so sójovým agarom Trypticaseinom doplnené zahriatou krvou

Pri príprave krvného agaru založeného na TSA postupujte rovnako ako už opísané postupy, ale pri opúšťaní autoklávu nechajte produkt v pokoji, kým teplota média nedosiahne približne 56 až 70 ° C. V tom čase sa krv uloží a mieša sa, až kým médium nezhnedne.

Podávajte v sterilných Petriho miskách. Farba média je čokoládovo hnedá.

Trypticaseínové sójové agarové kliny

Postup prípravy agaru je rovnaký ako postup opísaný pre doštičky s tým rozdielom, že namiesto toho, aby sa médium podávalo na Petriho misky, je pred sterilizáciou distribuovaný medzi 10 až 12 ml v skúmavkách s viečkom Bakelite.

Potom sa skúmavky autoklávujú pri 121 ° C počas 15 minút. Keď odchádzajú, sú naklonení pomocou podpory a môžu stuhnúť.

Pripravené kliny sa vysievajú podľa povrchovej plochy a slúžia na udržanie životaschopnosti určitých nenáročných mikroorganizmov po stanovenú dobu.

aplikácia

Tryptikazínový sójový agar sa používa v nasledujúcich prípadoch:

-Je základňa na prípravu klasického krvného agaru, ktorý sa bežne používa vo väčšine laboratórií.

- Izolácia náročných baktérií.

- Zachovanie hemolytického modelu.

- Vykonávanie diagnostických testov.

-Je základom na prípravu špeciálneho krvného agaru pre Corynebacterium diphteriae s cystínovým teluritom a jahňacou krvou.

- ako báza na prípravu jahňacieho krvného agaru plus kanamycín-vankomycín na rast anaeróbov, najmä Bacteroides sp.

- Na udržiavanie nenáročných kmeňov (Bacterioteca).

- Počet aeróbnych mikróbov pri štúdiu mikrobiálnych limitov vzoriek vody, životného prostredia, potravín a kozmetických výrobkov.

osiatych

Vzorky sa môžu vysiať priamo na povrch tryptikázového sójového agaru doplneného krvou alebo inými prísadami. Vysieva sa vyčerpaním.

Zatiaľ čo doštičky sójového agaru tryptikazínu bez prísad sa všeobecne používajú na subkultiváciu mikrobiálnych kmeňov (baktérie alebo kvasinky).

QA

Kontrola sterility

Na kontrolu sterility rôznych médií pripravených so sójovým agarom s obsahom tryptikazínu sa odporúča nasledujúce: z každej pripravenej šarže by sa 1 alebo 2 nenaočkované platne alebo skúmavky mali inkubovať pri 37 ° C počas 24 hodín, aby sa preukázala ich sterilita. Vo všetkých prípadoch musí zostať bez rastu.

Ak sa zistí kontaminácia, celá dávka sa musí zlikvidovať.

Kontrola rastu

Nasledujúce bakteriálne kmene sa môžu použiť na štúdium správneho fungovania sójového agaru trypticaseínu: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 a Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Kmene sa naočkujú a inkubujú sa aeróbne pri 37 ° C počas 24 hodín.

Vo všetkých prípadoch musí byť rast uspokojivý.

Môžu byť tiež použité huby, ako je napríklad Candida albicans Complex ATCC 10231 a Aspergillus niger ATCC 16404. Očakáva sa dobrý rast pre oba kmene.

Rastový a hemolytický vzorec sójového agaru tryptikazínu doplneného krvou

Na overenie správnej funkcie krvného agaru pripraveného s touto bázou sa môžu použiť nasledujúce kmene: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 a Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Očkujú sa a inkubujú sa pri teplote 37 ° C v mikroaerofilite počas 24 hodín.

Vo všetkých prípadoch by mal byť rast uspokojivý, berúc do úvahy skutočnosť, že u S. pyogenes by sa mala pozorovať beta-hemolýza (svetlý halo okolo kolónie) a alfa hemolýza (nazelenalý halo okolo kolónie) by sa mala pozorovať u oboch kmeňov S. pneumoniae. kolónie).

Referencie

1. Prispievatelia Wikipedia. Trypticase, som agar. Wikipedia, slobodná encyklopédia. 17. decembra 2018, 15:47 UTC. K dispozícii na adrese: https://en.wikipedia.org
2. Britannia Laboratories. Tripteínový sójový agar. 2015.K dispozícii na: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Tryptický sójový agar. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentína. Editorial Panamericana SA
5. Laboratóriá BD. Trypticase Ja som Agar. 2014.K dispozícii na: .bd.com