Agar Salmonella Shigella tiež známy ako SS agar je selektívny a diferenciálnej médium mierne, určené najmä pre izoláciu enteropatogénne baktérií rodu Salmonella a Shigella, obidve vzorky na životné prostredie, ako je klinická.
Agar SS má zložité zloženie; Skladá sa z mäsového extraktu, peptónu, laktózy, žlčových solí, citranu sodného, tiosíranu sodného, citranu železitého, agaru, neutrálnej červenej, jasne zelenej a destilovanej vody. Vzhľadom na svoju veľkú selektivitu je možné vysiať vzorky s bohatou zmiešanou flórou.
SS agar s kolóniami Salmonella sp. Zdroj: Manurx27, z Wikimedia Commons
V mikrobiologických laboratóriách sa médium Salmonella-Shigella bežne používa na skúmanie prítomnosti Salmonella a Shigella vo vzorkách hnačkových stolíc, odpadových vod, pitnej vody a potravy.
Niekedy je potrebné použiť vopred obohatený vývar (laktózový vývar) a obohatený vývar (selenitový cystínový vývar) na získanie kmeňov Salmonella.
Tieto kroky sú potrebné, keď existuje podozrenie na existenciu salmonely vo veľmi malom množstve alebo ak sa kmeň môže zneužiť postupmi typickými pre priemyselnú výrobu, najmä spracovanými potravinami. Odporúča sa tiež obohatiť vzorky stolice od pacientov, ktorí boli liečení antibiotikami.
Následne môže byť obohatený bujón naočkovaný na agar Salmonella-Shigella a ďalšie podobné médiá, ako je napríklad xylózový agar, lyzín deoxycholát (XLD) a enterický hektoénový agar (HE).
základ
Každá zložka kultivačného média Salmonella-Shigella má špecifickú funkciu a zmes ako celok jej dodáva vlastnosti, ktoré ju charakterizujú.
Výživná sila
Výťažok z mäsa a peptón (štiepený kazeínom a živočíšnym tkanivom) poskytujú potrebné živiny (dusíky, uhlík a vitamíny) na vývoj mikroorganizmov, ktoré sú schopné tolerovať zvyšok zložiek.
konzistencia
Agar-agar je zodpovedný za zabezpečenie tuhej konzistencie média.
selektívne
Toto médium je vysoko selektívne, pretože obsahuje žlčové soli, citran sodný a svetlozelenú farbu. Preto inhibuje rast všetkých grampozitívnych baktérií a najviac gramnegatívnych bacilov, vrátane niektorých koliformných organizmov.
Zatiaľ čo baktérie rodu Salmonella a niektoré kmene Shigella tieto zlúčeniny podporujú.
Hlavne je rod Salmonella veľmi odolný voči žlčovým soliam, a to natoľko, že sú schopní žiť v žlčníku niektorých nosičov, ktorí neustále vylučujú baktérie do stolice.
diferenciál
Laktóza je fermentovateľný uhľohydrát, ktorý pomáha odlíšiť kmene fermentujúce laktózu od kmeňov, ktoré nefermentujú. Túto vlastnosť dokazuje prítomnosť indikátora pH, ktorým je v tomto médiu fenolová červeň.
Kmene fermentujúce laktózu dávajú červené kolónie, zatiaľ čo kmene bez fermentácie sú bezfarebné. Táto vlastnosť je dôležitá, pretože Salmonella a Shigella nefertujú laktózu.
Na druhej strane toto médium obsahuje tiosíran sodný ako zdroj sulfidu a citrát železitý ako zdroj železa. Obe zlúčeniny sú schopné rozlíšiť baktérie schopné produkovať sírovodík. Tieto reagujú za vzniku viditeľnej nerozpustnej čiernej zrazeniny sulfidu železitého.
Táto vlastnosť sa nachádza v niektorých kmeňoch rodu Salmonella. Normálne sú ich kolónie ploché bezfarebné s čiernou bodkou v strede. Zvyšok salmonelami neprodukujú H 2 S a rozvíjať ako bezfarebné kolónie.
Na druhej strane kolónie rodu Shigella sú ploché bezfarebné bez sčernenia.
príprava
Príprava tohto média je veľmi jednoduchá.
Naváži sa 63 g dehydratovaného komerčného média a rozpustí sa v litri destilovanej vody. Roztok sa zahrieva a mieša sa. Zmes môže vrieť až niekoľko minút.
Toto médium sa nesmie autoklávovať. Po rozpustení sa podáva priamo na jednoduché alebo dvojité sterilné platne.
Keď stuhnú, sú usporiadané obrátene na doštičkách a až do použitia sa uchovávajú v chladničke (2 - 8 ° C).
Médium po príprave by malo zostať pri pH 7,2 ± 0,2 as oranžovo-červenou farbou.
Pred naočkovaním vzoriek je dôležité nechať platničky zahriať sa. Pôvodná vzorka sa môže vysiať priamo, vypustiť materiál z časti agaru a odtiaľ odtiecť.
V prípade použitia obohateného vývaru prejdite časťou seleničitého vývaru a semienka špachtľou drigalski.
Inkubujte pri teplote 37 ° C počas 24 hodín v aerobióze.
Majte na pamäti, že počet gramov, ktoré sa majú odvážiť, a konečné pH média sa môžu medzi jednotlivými komerčnými domami líšiť. Prostredná základňa vždy prináša údaje o jej príprave.
použitie
Používa sa často pri analýze kultúry stolice a pri mikrobiologickom štúdiu vzoriek odpadovej vody, pitnej vody a potravín.
Často sa pripravujú dvojité platne, na jednej strane sa umiestni Salmonella-Shigella agar a na druhej XLD agare.
obmedzenia
- Niektoré kmene Shigella nerastú v tomto médiu. Preto sa neodporúča na primárnu izoláciu tohto rodu.
- Nie každá priehľadná kolónia s čiernym stredom ukazuje na Salmonelu; Na správnu identifikáciu sa musia vykonať biochemické testy, pretože kolónie niektorých kmeňov Proteus sú nerozoznateľné od kolónií Salmonella.
- Dehydratované médium sa musí postarať o vystavenie životného prostredia, pretože je veľmi hygroskopické. Preto sa musí uchovávať v suchom a dobre uzavretom prostredí. Otvorené na veľmi krátke obdobia.
- Inokedy sa môžu žlčové soli v médiu vyzrážať a vytvárať na agare obraz podobný podložke, ale to nemá vplyv na výsledky.
- Niektoré kmene Shigella môžu pomaly fermentovať laktózu.
QA
Aby sa otestovalo správne fungovanie média, je vhodné pestovať známe alebo certifikované kontrolné kmene a pozorovať, či rast spĺňa očakávané charakteristiky.
Na tento účel sa môžu použiť kmene E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium alebo Enterococcus faecalis.
Očakávané výsledky sú:
Enterobacter a Klebsiella ------ veľké kolónie a červené alebo ružové mukoidy.
Shigella flexneri ---------- priehľadné alebo bezfarebné ploché kolónie.
Salmonella typhimurium ------ bezfarebné kolónie s čiernymi centrami.
Enterococcus faecalis -------- celková inhibícia.
Referencie
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Salmonella-Shigella. 2009. Dostupné na: f-soria.es
- Laboratórium BD. Agar BD Salmonella-Shigella. 2013. K dispozícii na: bd.com
- Britannia Laboratories. Agar Salmonella-Shigella. 2015.K dispozícii na: britanialab.com
- Valtekova diagnostika. Agar Salmonella-Shigella (SS Agar). K dispozícii na: andinamedica.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentína.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Editorial Panamericana SA Argentína.