Agar manitol soľ alebo manitol soľ je pevný stredný selektívne a diferenčné kultúry. Vytvoril ho Chapman na izoláciu patogénnych grampozitívnych kokov, najmä Staphylococcus aureus.
Je však tiež užitočné izolovať Staphylococus epidermidis, ktorý môže byť niekedy prítomný ako oportúnny patogén, a Staphylococcus saprophyticus, uznávaný močový patogén, medzi inými druhmi.
A. Fiola s pripraveným slaným manitolovým agarovým médiom. B. Platne s agarom na manitolovom agare naočkované fermentujúcimi a nefermentujúcimi bakteriálnymi kmeňmi manitolu. Zdroj: A a B: Fotografie zhotovené autorom MSc. Marielsa Gil.
Niektoré enterokoky sú schopné rásť na tomto médiu, ako aj určité grampozitívne tyčinky tvoriace spóry.
Toto médium je veľmi užitočné pri analýze klinických vzoriek, ale používa sa okrem iného aj pri mikrobiologickom štúdiu potravín a pri kontrole kvality priemyselných výrobkov, ako sú kozmetika, lieky.
Slaný manitolový agar sa skladá z extraktov a peptonov z hovädzieho mäsa, tripteínu, manitolu, chloridu sodného, fenolovej červene a agaru.
základ
Manitolový agar je selektívny vďaka svojej vysokej koncentrácii soli. Slanosť pôsobí ako inhibičná látka a zabraňuje rastu gramnegatívnych baktérií.
Je tiež rozdielny v dôsledku prítomnosti uhľohydrátového manitolu a indikátora pH fenolovej červene. Z toho baktérie schopné fermentovať manitol produkujú kyseliny, okysľujú médium, menia kolónie a médium na žlté.
Na druhej strane, kolónie, ktoré nefertujú manitol, rastú v médiu, ktoré živiny získavajú z výťažkov a melónov mäsa a tripteínu. Odtiaľ baktérie získavajú uhlík, dusík, vitamíny a minerály potrebné pre ich rast.
Kolónie v tomto prípade môžu byť slabé alebo silné ružové a médium zostáva rovnakej farby alebo sa zmení na fuchsiu.
Agar je látka, ktorá poskytuje konzistenciu média.
príprava
Aby sa pripravil liter slaného manitolového agaru, odvážilo sa 111 g dehydratovaného média z preferovanej komerčnej spoločnosti a rozpustilo sa v 1000 ml destilovanej vody pomocou banky.
Teplo sa aplikuje pri častom miešaní média, aby sa zlepšil proces rozpúšťania. Varte minútu.
Banka sa umiestni do autoklávu pri 121 ° C na 15 minút.
Na konci času vyberte liekovku z autoklávu, nechajte ju odpočívať a podávajte medzi 15 až 20 ml na sterilné Petriho misky, keď je teplota približne 50 až 55 ° C.
Je dovolené stuhnúť, prevrátiť sa na plakoch a ponechať v chladničke až do použitia. Pred naočkovaním vzorky počkajte, až doska dosiahne izbovú teplotu.
Doštičky sa naočkujú pruhovaním alebo povrchovým očkovaním špachtľou drigalski. Konečné pH pripraveného média musí byť 7,4 ± 0,2
Farba dehydratovaného média je svetlo béžová a farba pripraveného média je oranžovo červená.
aplikácia
Vďaka svojej vysokej selektivite je toto médium ideálne na siatie vzoriek so zmiešanou flórou, v ktorých sa hľadá prítomnosť Staphylococus aureus ako hlavného patogénu tohto rodu.
V tomto zmysle je jedným z najčastejších spôsobov použitia mikrobiologická analýza vzoriek hrtanu a výtokov z nosa, najmä na detekciu asymptomatických nosičov S. aureus.
Niektoré krajiny implementovali túto analýzu ako povinnú požiadavku pre ľudí, ktorí chcú pracovať ako predajcovia potravín.
Táto kontrola zabraňuje tomu, aby boli ľudia, ktorí sú nosičmi S. aureus, najatí, čím sa zabráni masívnej otrave potravinami v dôsledku konzumácie potravín kontaminovaných stafylokokovým enterotoxínom.
Môže byť tiež zahrnutý, okrem iného, do očkovania infekcií rán, krvných kultúr, CSF, bronchoalveolárneho výplachu.
Solený manitolový agar je užitočný na opätovnú izoláciu kolónií z močových kultúr z agaru CLED alebo krvného agaru, ktorého gram odhalil grampozitívne zhluky kokov.
Platí to okrem iného aj v mikrobiologickej analýze potravín, pitnej vody, pôdy.
QA
Po príprave dávky doštičiek so slaným manitolovým agarom sa odporúča vykonať kontrolu kvality. Kontrolné kmene sa vysievajú, aby sa preukázalo, či rast existuje alebo nie.
Ako pozitívna kontrola sa môžu použiť známe kmene Staphylococcus aureus. Mal by uspokojivo rásť a vytvárať žlté kolónie a médium tiež zmení farbu.
Podobne je vhodné zahrnúť známy kmeň Staphylococcus epidermidis. Mal by uspokojivo rásť a vytvárať ružové kolónie a médium zostane rovnaké alebo tmavšie až silnejšie ružové.
Ako negatívna kontrola sa používajú kmene, ktoré by na tomto médiu nemali rásť. Napríklad je možné pestovať známy kmeň Escherichia coli alebo Klebsiella pneumoniae. Očakávaným výsledkom je úplná inhibícia, to znamená, že nedochádza k rastu.
Okrem toho sa musí inkubovať neinokulovaná platňa. V ňom by nemal byť žiaden rast ani zmena farby.
Je dôležité, aby sa doska nepoužila, ak existujú, okrem iného, známky znečistenia, ako je kontaminácia, dehydratácia, zmena farby.
Záverečné myšlienky
Pri použití slaného manitolového agarového média je potrebné zvážiť niekoľko dôležitých aspektov:
- Získanie rastu žltých kolónií neznamená, že sa jedná o Staphylococcus aureus. Malo by sa pamätať na to, že niektoré kmene Enterococcus sú schopné rásť v tomto médiu a fermentovať manitol, ako aj určité grampozitívne tyčinky tvoriace spóry.
Preto je dôležité vykonať na kolónii Gram a test na katalázu.
- Na druhej strane je potrebné vziať do úvahy, že iné druhy Staphylococcus iné ako aureus sú tiež schopné kvasiť manitol. Preto je dôležité subkultivovať kolóniu do živného vývaru, ktorý sa odtiaľto vezme a vykoná koagulačný test.
Medzi druhy Staphylococcus klinicky významné pre človeka, ktorý fermentuje manitol, patria: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum.
Iní môžu dať rôznu reakciu, ktorá je niekedy pozitívna a niekedy negatívna. Niektoré sú okrem iného S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius.
- Neodporúča sa odoberať kolónie priamo z manitolového agaru, aby sa vykonal koagulačný test, pretože vysoká koncentrácia soli v médiu môže ovplyvniť výsledok.
- Nakoniec sa odporúča inkubovať doštičky naočkované soľným manitolom až 48 hodín, pretože niektoré kmene S. aureus môžu manitol pomaly fermentovať, hoci to nie je príliš časté.
Referencie
- Britannia Laboratories. Agar so slaným manitolom. 2015.K dispozícii na: britanialab.com
- "Agar so slaným manitolom". Wikipedia, slobodná encyklopédia. 31. okt. 2018, 19:08 UTC. 17. januára 2019, 20:55, k dispozícii na: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydanie). Argentina, Editorial Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentína. Editorial Panamericana SA
- Laboratóriá BD. BD manitolový soľný agar. 2013. K dispozícii na: bd.com.