AGAR MRS: NADÁCIA, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Agare MRS je selektívna pevné kultivačné médium používa na izoláciu a stanovenie kyslých mliečnych baktérií, najmä rodu Lactobacillus. Tento agar bol vytvorený v roku 1960 autormi Man, Rogosa a Sharpe s rovnakým názvom, ale kvôli svojej zložitosti sa často používa skratka MRS.

Skladá sa z proteózového peptónu, mäsového extraktu, kvasnicového extraktu, glukózy, sorbitan monooleátu, fosforečnanu draselného, ​​octanu sodného, ​​citranu amónneho, síranu horečnatého, síranu mangánu a agaru.

Man Rogosa a Sharpe Agar (MRS) naočkovaný Lactobacillus sp. Zdroj: Foto prispeli autori: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Fotografia získaná počas prieskumu s názvom: Hodnotenie baktérií mliečneho kvasenia a Bifidobaktérií s probiotickým potenciálom v materskom mlieku a detských stoliciach. ,

Toto zloženie umožňuje správny vývoj baktérií kyseliny mliečnej z klinických vzoriek, ako sú výkaly, vaginálny výtok, orálne vzorky a materské mlieko, ako aj z mliečnych a mäsových potravín.

V klinických laboratóriách sa bežne nepoužíva, pretože baktérie mliečneho kvasenia sa zriedkavo podieľajú na chorobných procesoch. V oblasti mikrobiológie potravín je však používanie agaru MRS častejšie.

Na druhej strane toto médium používajú niektoré výskumné centrá, ktorých cieľom je štúdium baktérií mliečneho kvasenia.

základ

Agar Man, Rogosa a Sharpe má pomerne zložité zloženie. Rozdelením funkcie každej z jej zložiek možno vysvetliť jej základy.

Proteínový peptón, mäsový extrakt, kvasnicový extrakt a glukóza sú živiny, ktoré poskytujú zdroj uhlíka, dusíka, vitamínov a minerálov potrebných pre bakteriálny rast. Ďalej je glukóza univerzálnym zdrojom energie používaným vo väčšine kultivačných médií.

Na druhej strane, na podporu rastu baktérií mliečneho kvasenia je nevyhnutná prítomnosť kofaktorov (katiónov) nevyhnutných pre metabolizmus Lactobacillus a príbuzných baktérií; Týmito zlúčeninami sú sodné, horečnaté a mangánové soli.

Podobne, sorbitan monooleát alebo polysorbát 80 sú dôležitým zdrojom mastných kyselín, pretože sú absorbované ako živiny.

Ďalej sorbitan monooleát a citrát amónny pôsobia tak, že inhibujú rozvoj sprievodnej flóry, najmä gramnegatívnych baktérií, čím poskytujú selektívny charakter tohto agaru.

Nakoniec je agar agarom, ktorý poskytuje pevnú konzistenciu média.

Existujú aj ďalšie varianty agaru Man Rogosa Sharpe; jeden z nich je doplnený cysteínom (MRSc), veľmi užitočným pri izolácii bifidobaktérií, okrem iných mikroorganizmov. Na druhej strane existuje médium MRS doplnené neomycínom, paromomycínom, kyselinou nalidixovou a chloridom lítnym, špeciálne na selektívne počítanie bifidobaktérií v mliečnych výrobkoch.

príprava

Navážte 68,25 gramov dehydratovaného média a rozpustite v jednom litri destilovanej vody. Nechajte pôsobiť 5 minút. Ak sa chcete úplne rozpustiť, obráťte sa na zdroj tepla, často miešajte a varte 1 až 2 minúty. Sterilizuje sa v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.

Keď opúšťate autokláv, nechajte niekoľko minút stáť a za horúca ho rozdeľujte do sterilných Petriho misiek.

Doštičky sa nechajú stuhnúť a prevrátiť, objednať do stojanov na platne a až do použitia chladiť. Pred použitím nechajte platničky zohriať na izbovú teplotu.

PH média by malo byť 6,4 ± 0,2. Niektoré komerčné domy odporúčajú pH medzi 5,5 až 5,9.

Dehydratované médium má béžovú farbu a je pripravené z tmavého jantáru.

Dehydratované médium aj pripravené platne by sa mali skladovať pri teplote 2 - 8 ° C.

aplikácia

Doštičky s agarom MRS môžu byť očkované povrchom (vyčerpanie alebo špachtle Drigalski). Dá sa vysiať aj do hĺbky. Dosky by mali byť inkubujú pri 37 ° C v microaerophilicity (4% O ₂ a 5 až 10% CO ₂ ) po dobu 24 až 72 hodín.

Výsev sa zvolí podľa sledovaného účelu (izolácia alebo počítanie).

Charakteristiky kolónií

Predpokladané kolónie Lactobacillus majú belavú farbu a na tomto agare majú mukoidný alebo krémový vzhľad. Musia sa následne identifikovať.

Izolácia baktérií mliečneho kvasenia

Na tento účel sa používa očkovanie povrchu. Vzorky určené na siatie vyžadujú predchádzajúci postup.

V prípade vzoriek materského mlieka sa odporúča odstrediť 1 ml vzorky pri 14 000 ot / min počas 10 minút, aby sa odstránila mastná vrstva. 900 µl sa odstráni a zvyšných 100 µl sa sediment suspenduje a naleje na povrch agaru MRS, ktorý sa potom rovnomerne rozdelí špachtľou Drigalski.

V prípade vzoriek stolice sa jeden (1) gram stolice odváži a homogenizuje v 9 ml 0,1% sterilnej peptónovej vody, čo zodpovedá zriedeniu 1/10. Potom sa uskutočnia sériové riedenia, až kým sa nedosiahne konečné zriedenie ^10-4 .

Nakoniec sa odoberie 100 ul riedení ^10-2 , ^10-3 a ^10-4 a každé riedenie sa naočkuje na agar MRS, rovnomerne sa rozdelí špachtľou Drigalski.

Počet baktérií mliečneho kvasenia

V tomto prípade sa výsev vykonáva hĺbkou.

V prípade vzoriek materského mlieka sa odoberie 1 ml a umiestni sa do sterilnej kónickej plastovej skúmavky. MRS agar sa pridá pri približnej teplote 40 ° C do konečného objemu 25 ml, čím sa získa homogénna zmes. Následne sa naleje rovnomerne do sterilných Petriho misiek a nechá sa stáť až do polymerizácie.

Pre vzorky stolice sa uskutočňujú riedenia, ako už bolo opísané. Vezmite 1 ml každého riedenia a vložte ho do sterilných kónických plastových skúmaviek. Roztavený agar MRS sa pridá do objemu 25 ml.

Zmes každého riedenia sa naleje rovnomerne do sterilných Petriho misiek. Nakoniec sa nechá polymerizovať.

Kolónie sa počítajú na agare Man Rogosa a Sharpe (MRS). Zdroj: Fotografia venovaná tomuto článku. Autori: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Fotografia urobená v rámci výskumu s názvom: Hodnotenie baktérií mliečneho kvasenia a bifidobaktérií s probiotickým potenciálom v materskom mlieku a detských výkaloch.

Úroveň výskumu

Každý deň sa zvyšuje záujem o štúdium baktérií mliečneho kvasenia; Vedci sa predovšetkým snažia dozvedieť sa o nových kmeňoch a ich potenciáli ako štartovacích fermentoch pre štandardizáciu pri výrobe mliečnych výrobkov, okrem iného.

V tomto zmysle Alvarado a kol. (2007) použili agar MRS na vykonanie štúdie, v ktorej izolovali, identifikovali a charakterizovali baktérie kyseliny mliečnej prítomné v remeselnom venezuelskom údenom syre Andean.

V syre našli prítomnosť baktérií rodov Lactococcus a Lactobacillus a dospeli k záveru, že zmesi izolovaných kmeňov sú vhodné ako štartovacie kmene pri výrobe syrov z pasterizovaného mlieka.

Na druhej strane Sánchez a kol. (2017) použili agar MRS na zisťovanie prítomnosti baktérií mliečneho kvasenia v zažívacom trakte prasiatok, aby ich mohli používať ako natívne probiotiká, ktoré zvyšujú produktivitu zdravých prasiatok.

S týmto médiom sa im podarilo izolovať štyri druhy: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae a Pediococcus pentosaceus.

Podobne Báez a kol. (2019) použili MRS agar na vyhodnotenie baktérií mliečneho kvasenia (LAB) a bifidobaktérií s probiotickým potenciálom v materskom mlieku a detských výkaloch.

Podarilo sa im izolovať 11 BAL a 3 Bifidobacteria sp do materského mlieka a 8 BAL a 2 Bifidobacteria sp. vo výkaloch. Všetky spĺňajú určité parametre, ktoré ich dokazujú ako baktérie s probiotickou aktivitou.

Autori dospeli k záveru, že tak materské mlieko, ako aj výkaly výlučne dojčených detí, slúžia ako prírodné zdroje probiotických baktérií.

QA

Na vyhodnotenie kvality agaru MRS kontrolné kmene, ako napríklad:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli a Bacillus cac.

Očakávané výsledky sú uspokojivým rastom pre prvých 6 baktérií, zatiaľ čo E. coli a Bacillus cereus sa musia úplne inhibovať.

Referencie

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Izolácia, identifikácia a charakterizácia baktérií mliečneho kvasenia venezuelského údeného syra andského remeselníka. Jeho použitie ako štartovacej kultúry. Prevodovkám. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301 - 308. K dispozícii na: scielo.org.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, izolácia baktérií mliečneho kvasenia z tráviaceho traktu prasiatka. Rev. vet. Peru 2017; 28 (3): 730-736. K dispozícii na: scielo.org.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Hodnotenie bakterií mliečneho kvasenia a Bifidobaktérií s probiotickým potenciálom v materskom mlieku a výkaloch dojčiat v obci Acevedo, Miranda 2017. Bakalárska práca sa kvalifikovala pre bakalárske štúdium v ​​odbore Bioanalýza. Univerzita v Carabobo, Venezuela.
4. Britannia Laboratory. Agar MRS. 2015.K dispozícii na: britanialab.com
5. Prispievatelia Wikipedia. Agar MRS. Wikipedia, slobodná encyklopédia. 10. januára 2018, 19:44 UTC. K dispozícii na: wikipedia.org Prístup k 17. februáru 2019.
6. Roy D. Media na izoláciu a stanovenie počtu bifidobaktérií v mliečnych výrobkoch. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.