LIA (LYZÍNOVÉ ŽELEZO) AGAR: ZALOŽENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Agar LIA (lyzín železa) je biochemické skúšky na identifikáciu baktérií čeľade Enterobacteriaceae. Toto médium vytvorili Edwards a Fife na základe Falkowovho vzorca.

Pôvodne bol tento test vývar obsahujúci melóny, kvasnicový extrakt, glukózu, L-lyzín, brómokrezolovú purpurovú a destilovanú vodu. Edwards a Fife pridali agar-agar, citrát železito-amónny a tiosíran sodný.

Pozitívny a negatívny test na dekarboxyláciu lyzínu. Zdroj: Foto a schéma vlastníctva autora MSc. Marielsa gil

Test v podstate spočíva v preukázaní prítomnosti enzýmu lyzín dekarboxylázy, ktorý je schopný reagovať s karboxylovou skupinou aminokyseliny L-lyzínu. K deaminácii aminokyseliny môže tiež dôjsť v dôsledku prítomnosti enzýmu lyzín deaminázy.

Okrem toho zloženie média vykazuje schopnosť niektorých bakteriálnych rodov produkovať sírovodík. Nakoniec je tiež možné pozorovať produkciu alebo nie plyn v médiu.

základ

Výťažky z peptonov a kvasiniek

Rovnako ako väčšina kultivačných médií obsahuje lyzínový železný agar zložky, ktoré poskytujú zdroj živín potrebných pre bakteriálny rast. Tieto zložky sú zastúpené peptonmi a kvasinkovým extraktom.

glukóza

Podobne tento agar obsahuje glukózu ako fermentovateľný uhľohydrát. Je známe, že všetky baktérie z čeľade Enterobacteriaceae fermentujú glukózu.

Tento krok je rozhodujúci, pretože bude zodpovedný za okyslenie média, čo je nevyhnutná podmienka pre pôsobenie enzýmu lyzín dekarboxylázy, ak je prítomný, na jeho substrát.

U niektorých bakteriálnych rodov je možné pozorovať produkciu plynu v dôsledku fermentácie glukózy.

Plyn je dokázaný, keď dôjde k premiestneniu agaru v skúmavke, pričom na jeho spodnej časti zostane prázdny priestor alebo sa fraktúra média rozdelí na dve alebo viac častí.

L-lyzín

Po dekarboxylácii lyzínu sa vytvorí diamín (kadaverín) a oxid uhličitý.

Dekarboxylácia nastáva v prítomnosti koenzým pyridoxalfosfátu. Táto reakcia je nezvratná.

Indikátor PH (brómokrezolová purpurová)

Všetky zmeny pH, ktoré sa vyskytujú v médiu rôznymi reakciami, sú detegované fialovým indikátorom pH brómkrezolu.

V tomto zmysle, keď dôjde k okysleniu, médium zožltne a keď dôjde k alkalizácii, vráti sa do pôvodnej fialovej alebo fialovej farby.

Ak dôjde k deaminácii lyzínu v dôsledku prítomnosti enzýmu lyzín deaminázy, vytvorí sa na povrchu červenkasté zafarbenie, typické pre rody Proteus, Providencia a niektoré druhy Morganella.

Je to spôsobené skutočnosťou, že počas procesu deaminácie sa tvorí kyselina alfa-keto-karbonová, ktorá reaguje s citranom amónnym v prítomnosti kyslíka, čo spôsobuje vyššie uvedenú farbu.

Citran železitý amónny a tiosíran sodný

Na druhej strane, baktérie, ktoré produkujú sírovodík bude doložená prítomnosti tiosíranu sodného (zdroj síry) a citrátom železitým amónny, ktorý je developerom H ₂ S.

Baktérie, ktoré majú enzým tiosíran reduktáza má schopnosť pôsobiť prostredie znížením tiosíranu sodného prítomný, tvorí siričitan a sírovodíka (H ₂ S).

Posledne menovaný je bezfarebný plyn, ale pri reakcii so soľou železa tvorí sulfid železného kovu, čo je nerozpustná zlúčenina (viditeľná čierna zrazenina).

Avšak schopnosť tvoriť H ₂ S sa toto médium nie je príliš spoľahlivé, pretože niektoré lysindekarboxylázového negatívne baktérie schopné produkovať H ₂ S nebude tvoriť čierne zrazeniny, ako kyslosť stredne zasahuje. Preto sa odporúča skontrolovať spolu s inými médiami, ktoré obsahujú železo.

Interpretácia testu

Dekarboxylácia lyzínu

Skúmavky by sa mali odčítať po 24 hodinách inkubácie, v opačnom prípade existuje riziko nesprávneho výkladu reakcie a nahlásenia falošných negatívov.

Je potrebné si uvedomiť, že prvou reakciou, ktorá sa objaví, bude fermentácia glukózy, preto všetky skúmavky po 10 až 12 hodinách zožltnú.

Ak je na konci inkubačnej doby (24 hodín) pozorované žlté pozadie s fialovým alebo fialovým povrchom, reakcia je negatívna. Fialová farba povrchu zodpovedá alkalizácii média pomocou peptonov.

Pozitívna reakcia je taká, kde dno a povrch skúmavky sú úplne fialové, to znamená, že sa vracia do pôvodnej farby.

Preto, kto určuje pozitivitu testu, je základ alebo pozadie média. Ak máte pochybnosti o farbe, môžete ju porovnať s inokulovanou skúmavkou LIA.

Deaminácia lyzínu

Trubica, ktorá vykazuje deamináciu lyzínu, bude mať červenkastý gaštanový povrch a žlté (kyslé) ​​pozadie alebo celú hadičku červenkastú gaštanovú.

Táto reakcia sa interpretuje ako negatívna pri dekarboxylácii lyzínu, ale pozitívna pri deaminácii lyzínu.

Táto reakcia je definovaná a interpretovaná na ráme.

Výroba sírovodíka

Pozitívna reakcia sa pozoruje objavením čiernej zrazeniny v celom médiu alebo v jeho časti. Zvyčajne medzi okrajom skosenia a základňou.

Ak sa zrazenina objaví v skúmavke, neodhalí ďalšie reakcie, ktoré sa vyskytujú v strede.

Záznam výsledkov

Pri interpretácii testu sa výsledky zaznamenávajú takto:

Prvý úkos je čítať, potom spodné alebo blok, potom produkcia H ₂ S, a konečne na výrobu plynu.

Príklad: K / A + (-). To znamená:

• K: Alkalický rám (fialová farba)
• A: Kyslé pozadie (žlté), t.j. negatívna dekarboxylačná reakcia a negatívna deaminácia.
• +: Výroba sírovodíka
• (-): Bez plynu.

príprava

Odváži sa 35 g dehydratovaného lyzínového média so železným agarom a rozpustí sa v jednom litri destilovanej vody.

Zahrievajte, až kým sa agar úplne nerozpustí, aby sa to nechalo minútu prevariť a často sa miešalo. Rozdeľte 4 ml média do 13/100 skúmaviek s vatovými viečkami.

Sterilizuje sa v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút. Vyberte z autoklávu a nechajte ho stáť pod určitým uhlom tak, aby bola hlboká základňa a krátka skosenie.

Uchovávajte v chladničke pri teplote 2-8 ° C. Pred výsevom bakteriálneho kmeňa ho nechajte zahriať.

Farba dehydratovaného média je béžová a pripravené médium je červenkasto fialové.

Konečné pH pripraveného média je 6,7 ± 0,2

Médium zožltne pri pH 5,2 alebo menej a pri pH 6,5 a vyššom je purpurové.

aplikácia

Tento test sa spolu s ďalšími biochemickými testami používa na identifikáciu bacilov z čeľade Enterobacteriaceae.

Médium sa naočkuje priamou slučkou alebo ihlou, jedna alebo dve punkcie sa urobia na spodok skúmavky a potom sa povrch média ryhuje v kľukatine.

Inkubujte 24 hodín pri 35 - 37 ° C v aerobióze. Ak je to potrebné, inkubuje sa ďalších 24 hodín.

Je predovšetkým užitočné odlíšiť laktóza-negatívne druhy Citrobacter od Salmonellas sp.

Zdroj: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Editorial Panamericana SA Argentína.

Referencie

1. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy na identifikáciu baktérií klinického významu. 3. vydanie. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentína.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentína.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Editorial Panamericana SA Argentína.
4. Britannia Laboratories. Lyzínový železný agar. 2015.K dispozícii na: britanialab.com
5. Laboratóriá BD. Slinty BBL lyzínového železa. 2007. K dispozícii na: bd.com
6. Valtek Laboratories. Stredná LIA 2009. Dostupné na: andinamedica.com