Agar Hektoen alebo Hektoen enterickej agar pevnom médiu je selektívny a diferenciálnej kultúry. Bola vytvorená v Hektoenovom inštitúte kráľom a Metzgerom na izoláciu enteropatogénnych baktérií rodov Shigella a Salmonella.
Médium sa skladá z proteózového peptónu, kvasnicového extraktu, žlčových solí, laktózy, sacharózy, salicínu, tiosíranu sodného, chloridu sodného, citrátu železa, citrátu amónneho, brómtymolovej modrej, kyslého fuchsínu a agaru. Táto formulácia umožňuje rozlíšiť rod Shigella a Salmonella od zvyšku baktérií schopných rásť v tomto médiu.
A. Virgin Hektoenov agar B. Naočkovaný Hektoenov agar. Zdroj: Flickr.com/ Pôvodným uploaderom bol Philippinjl na francúzskej Wikipédii.
Aj keď existujú ďalšie médiá s rovnakou funkciou ako agar Hektoen, má v porovnaní s inými médiami väčšiu výhodu, najmä ak chcete obnoviť druh Shigella.
Druhy oboch pohlaví spôsobujú vážne gastrointestinálne problémy u ľudí v dôsledku konzumácie kontaminovanej potravy; prenos je teda fekálny - orálny. Preto je použitie agaru Hektoen indikované hlavne v mikrobiologickej analýze vzoriek stolice a potravín.
základ
Hektoenový agar obsahuje peptony a kvasnicový extrakt ako zdroj živín a poskytuje základné prvky mikrobiálneho rozvoja.
Má však aj žlčové soli, ktoré pôsobia tak, že inhibujú rast niektorých baktérií, najmä gram-pozitívnych a niektorých gram-negatívnych. Z tohto dôvodu sa považuje za selektívne médium.
Na druhej strane Hektoenov agar je diferenciálne médium. Táto vlastnosť je daná prítomnosťou fermentovateľných uhľohydrátov, ako je laktóza, sacharóza a salicín, spolu so systémom indikátora pH, ktorý predstavuje brómtymolová modrá a kyslý fuchsín.
Všetky baktérie, ktoré sú schopné rásť na tomto médiu a ktoré nepatria do rodu Salmonella a Shigella, budú rozvíjať kolónie lososa alebo pomaranča s výnimkou rodu Proteus. Je to spôsobené fermentáciou jedného alebo viacerých prítomných uhľohydrátov, ktoré okysľujú médium, čím sa indikátor pH zmení.
Rod Shigella a Salmonella nie je schopný fermentovať žiaden z prítomných uhľohydrátov, pričom ako zdroj energie využíva iba peptony, ktoré alkalizujú médium, a preto sú jeho kolónie zeleno-modré.
Baktérie schopné tvoriť sírovodík (bezfarebný plyn) je možné v tomto médiu tiež rozlíšiť. Tiosíran sodný pôsobí ako zdroj síry, zatiaľ čo vývojárom je citrát železa. Obe zlúčeniny umožňujú tvorbu čiernej zrazeniny sulfidu železa, ktorá ukazuje reakciu.
Čierna zrazenina v strede kolónie s priehľadným halom okolo nej dáva vzhľad rybie oko. Táto vlastnosť naznačuje prítomnosť rodu Salmonella.
Nakoniec chlorid sodný udržuje osmotickú rovnováhu a agar dodáva médiu pevnú konzistenciu.
príprava
Navážte 76 g dehydratovaného média a rozpustite v litri destilovanej vody. Zmes dôkladne pretrepte a potom nechajte 10 až 15 minút stáť. Môže sa zahrievať a variť, čo umožňuje otáčavé pohyby až do úplného rozpustenia. Toto médium nie je autoklávované.
Keď médium dosiahne teplotu približne 45 ° C, naleje sa priamo do sterilných Petriho misiek objem 20 ml.
Agar sa nechá stuhnúť. V tom čase sú pripravené na použitie. Odporúča sa ich okamžite použiť. Ak to nie je možné, uchovávajú sa v chladničke až do použitia.
Doštičky by sa mali z chladničky vyberať vopred pred nasadením na izbovú teplotu.
PH média by malo byť 7,5 ± 0,2. Farba dehydratovaného média je fialová a pripravené médium je hnedasto-zelené.
použitie
Použitie agaru Hektoen sa odporúča na hľadanie baktérií rodu Shigella a Salmonella vo vzorkách stolice a potravín.
Možnosť izolácie týchto baktérií sa značne zvyšuje, ak je vzorka predtým obohatená o špeciálne bujóny, ako sú seleničitanový vývar, cystín selenitový vývar, tetrationátový vývar atď.
Inokulum musí byť silné a siatie sa vykonáva pruhovaním. Doštičky sa inkubujú pri teplote 37 ° C počas 24 až 48 hodín v aerobióze.
Odporúča sa inkubácia počas 48 hodín, pretože charakteristiky kolónií sú jasnejšie z hľadiska ich interpretácie a diferenciácie v tomto okamihu.
QA
Na vykonanie kontroly kvality na tomto médiu sa používajú certifikované bakteriálne kmene, ako napríklad: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 a Shigella sonnei ATCC 25931.
Očakávané výsledky sú nasledujúce: Salmonella typhimurium a Salmonella enteritidis by sa mali rozvíjať modrozelené kolónie s čiernym stredom alebo bez neho. Zatiaľ čo druh Shigella bude rásť ako modrozelené kolónie.
Zahrnuté môžu byť aj kmene Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 a Staphylococcus aureus ATCC 25923.
V týchto prípadoch sú pozorované nasledujúce charakteristiky: V E. coli a K. pneumoniae sa v tomto médiu vyvinú lososo-oranžové kolónie, okolo ktorých sa vyzráža rovnaká farba. Proteus bude rozvíjať modrozelené kolónie s čiernym stredom alebo bez neho.
Zatiaľ čo S. aureus a E. faecalis sa musia inhibovať, E. faecalis občas dokáže rásť ako veľmi malé žlté kolónie.
Na druhej strane, pretože toto médium nie je autoklávované, je dôležité vyhodnotiť sterilitu média. Z každej pripravenej šarže by sa preto jedna až dve nenaočkované platne mali inkubovať pri teplote 37 ° C počas 24 hodín v aerobióze.
Na platni sa samozrejme neočakáva žiadny rast.
obmedzenia
- Druhy Proteus sa môžu vyvíjať v tomto médiu a vlastnosti ich kolónií sa môžu zamieňať s druhmi Salmonella alebo Shigella. Z tohto dôvodu sa musí každá podozrivá kolónia potvrdiť biochemickými testami.
- Je nevyhnutné sprevádzať použitie tohto média s inými menej selektívnymi agarmi, pretože ak sa hľadaný mikroorganizmus nachádza v nízkych koncentráciách, nemusí sa v tomto médiu vyvíjať.
- Počas prípravy sa neprehrievajte, pretože nadmerné teplo mení zloženie média.
- Zvyčajne sa môžu objaviť kolónie Salmonella, ktoré fermentujú laktózu a ktoré môžu zostať nepovšimnuté.
Referencie
- Prispievatelia Wikipedia. Hektoenský enterický agar. Wikipedia, slobodná encyklopédia. 13. marca 2019, 23:38 UTC. K dispozícii na: .wikipedia.org / Prístup k 16. marcu 2019.
- Laboratóriá BD. Enterický agar Bek Hektoen (HE Agar). 2013. K dispozícii na: bd.com
- Britannia Laboratories. Hektoenský enterický agar. 2015.K dispozícii na: britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Hektoenov agar. K dispozícii na adrese: f-soria.es
- Difco & BBL Manual, Hektoen Enteric Agar. 2. vydanie. K dispozícii na adrese: bd.com/europe