Agar Endo alebo Endo médium je pevné médium, diferenciálneho a s určitou mierou selektivity kultúry. Pôvodný vzorec bol vyvinutý Endom v roku 1904 na odlíšenie fermentácie laktózy od nefermentujúcich baktérií. Pôvodne bol navrhnutý na izoláciu Salmonella typhi, neskôr sa však cieľ média obrátil na hľadanie koliformných organizmov.
Princíp endo agaru zostal, ale jeho zloženie prešlo v priebehu rokov nespočetnými zmenami. V súčasnej dobe je médium zložené z peptického trávenia živočíšneho tkaniva, laktózy, hydrogénfosforečnanu draselného, siričitanu sodného, bázického fuchsínu a agaru.
A: Virgin Endo Agar B: Naočkovaný endo agar, v strede agaru si môžete všimnúť kovový lesk kmeňa E. coli. Zdroj: A: Strolch1983 / B: LenkaM
Hlavné použitie média bolo spojené s izoláciou a diferenciáciou gramnegatívnych bacilov patriacich do čeľade Enterobacteriaceae a do ďalších blízkych rodín.
Dlho sa používal pri detekcii koliformných baktérií vo vzorkách vody, mlieka a mliečnych výrobkov a potravín, dnes však používanie tohto média nahradili iní používatelia s podobnými funkciami. Niektoré mikrobiologické laboratóriá však používajú tento agar na izoláciu Enterobacteriaceae zo vzoriek klinického pôvodu.
základ
Endo agar obsahuje peptony, ktoré slúžia ako zdroj aminokyselín, dusíka, uhlíka a energie, ktoré sú potrebné pre rast nenáročných mikroorganizmov.
Na druhej strane mierne selektívny charakter agaru sa dosahuje pridaním siričitanu sodného a zásaditého fuchsínu; obidve zložky čiastočne alebo úplne inhibujú rast väčšiny grampozitívnych baktérií.
Rozdielny charakter je daný prítomnosťou fermentovateľného uhľohydrátu, ktorým je v tomto prípade laktóza a bázický fuchsín, ktorý slúži aj ako indikátor pH.
Gramnegatívne baktérie, ktoré rastú na tomto agare a sú schopné fermentovať laktózu, vytvoria silné ružové kolónie; keďže je patognomonom Escherichia coli, vytvára sa tmavo červené kolónie s dúhovým zelenkavým kovovým leskom. Je to kvôli vysokej produkcii kyselín fermentáciou uhľohydrátov.
Malo by sa poznamenať, že médium okolo kolónií tiež zmení silnú ružovú farbu. Zatiaľ čo ne-laktózové fermentujúce gramnegatívne tyčinky tvoria svetlo ružovkasté kolónie podobné stredným alebo bezfarebným.
Hydrogenfosforečnan draselný vyrovnáva pH média a agar je zložka, ktorá poskytuje pevnú konzistenciu.
príprava
Endo agar
Navážte 41,5 g dehydratovaného média a rozpustite v 1 litri destilovanej vody. Zmes sa zahrieva za častého miešania až do úplného rozpustenia média. Sterilizuje sa v autokláve pri teplote 121 ° C a tlaku 15 libier počas 15 minút.
Pri vyberaní z autoklávu nechajte vychladnúť na teplotu približne 45 - 50 ° C, zmes pred pretrepaním homogenizujte. Nalejte 20 ml do sterilných Petriho misiek.
Doštičky pred uložením v chladničke nechajte stuhnúť, prevrátiť a skladovať na plakete alebo zabaliť do tmavého papiera. Je veľmi dôležité chrániť pripravené médium pred priamym svetlom. Najlepšie je pripraviť presné množstvo, ktoré budete potrebovať.
Ak sa platne skladujú v chladničke, pred použitím by sa mali nechať zahriať.
PH média by malo byť medzi 7,2 a 7,6 a farba pripraveného média je svetloružová.
Variant agaru M-Endo
Existuje aj ďalšia verzia endo agaru (m-Endo), ktorá vychádza zo vzorca McCarthy, Delaney a Grasso, ktorá obsahuje viac zlúčenín a líši sa formou prípravy.
Tento variant obsahuje: laktózu, tryptózu, enzymatický výluh kazeínu, enzymatický výluh živočíšneho tkaniva, chlorid sodný, hydrogenfosforečnan draselný, siričitan sodný, kvasnicový extrakt, monobázický fosforečnan draselný, zásaditý fuchsín, deoxycholát sodný, laurylsulfát sodík a agar.
V tomto prípade sa naváži 51 g dehydratovaného média a suspenduje sa v 1 litri destilovanej vody obsahujúcej 20 ml etanolu.
Mierne zahrievajte, kým sa médium úplne nerozpustí. Nemal by sa prehrievať a nemal by sa autoklávovať. Keď je zmes homogénna, podávajte ju v sterilných Petriho miskách a nechajte stuhnúť.
použitie
V niektorých krajinách sa stále používa na počítanie celkových a fekálnych koliformných baktérií vo vzorkách potravín a vody, najmä prítomnosť Escherichia coli ako hlavného ukazovateľa fekálnej kontaminácie.
Agendu M-Endo odporúča Americká asociácia verejného zdravia (APHA) na monitorovanie a kontrolu programov dezinfekcie a čistenia odpadových vôd, ako aj na hodnotenie kvality pitnej vody.
Najčastejšie používanou metódou je membránová filtrácia po obohatení vzorky laurylsulfátovým bujónom počas 2 až 4 hodín.
Môže sa tiež použiť ako náhrada za EMB agar v mikrobiologickej analýze potravín a vody najpravdepodobnejšou technikou čísla (MPN), konkrétne v kompletnej potvrdzovacej fáze na potvrdenie prítomnosti E. coli z kalných vývaru EC.
QA
Známe alebo certifikované kontrolné kmene sa vysejú na posúdenie kvality pripravenej šarže endo agaru.
Medzi kmene, ktoré sa môžu použiť na tento účel, patria: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 1170014CCCC 1400314CCCC ,
Kmene sa očkujú vyčerpaním a inkubujú sa pri aerobióze pri 37 ° C počas 24 hodín.
Očakávané výsledky sú:
- Pre Escherichia coli: silné červené kolónie s kovovým leskom.
- V prípade E. cloacae a K. pneumoniae by kolóniami mali byť ružové mukoidy.
- V prípade S. typhimurium, S. flexneri a P. mirabilis sú kolónie obvykle svetloružové alebo bezfarebné.
- Napokon sa očakáva, že E. faecalis bude čiastočne inhibovaná, a preto musí byť jeho rast slabý pri veľmi malých ružových kolóniách.
obmedzenia
-Endo médium má nízku selektívnu silu, preto je možné, že niektoré grampozitívne mikroorganizmy, ako napríklad Staphylococcus, Enterococcus a dokonca aj kvasinky, môžu rásť.
- V tomto médiu sa môžu rozvíjať iné bacily, ktoré nepatria do čeľade Enterobacteriaceae, ako napríklad Pseudomonas sp a Aeromonas sp. Charakteristikou týchto kmeňov sú bezfarebné nepravidelné kolónie.
- Toto pripravené médium je veľmi citlivé na svetlo, preto jeho dlhodobé vystavenie zhoršuje indikátorový systém a ireverzibilné poškodenie média.
- Zložky média sa považujú za karcinogénne, preto by sa malo zabrániť priamemu kontaktu.
- Dehydrované médium je veľmi hygroskopické a musí sa uchovávať v pôvodnom obale pri izbovej teplote, tesne uzatvorené av suchom prostredí.
Referencie
- Laboratóriá BD. Endo Agar. 2013. K dispozícii na: bd.com
- Neogen Laboratories. M. Endo Agar. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
- Endo Agar. Wikipedia, slobodná encyklopédia. 7. sep 2017, 08:27 UTC. 28 február 2019, 22:55. K dispozícii na adrese: en.wikipedia.
- MercK Laboratory. Endo agar. 2019.K dispozícii na adrese: merckmillipore.com
- Laboratóriá technických údajov. M –Endo Agar LES. 2015.K dispozícii na: liofilchem.net