CZAPEKOV AGAR: ODÔVODNENIE, PRÍPRAVA, POUŽITIE A OBMEDZENIA - BIOLÓGIE - 2026

Czapek (CZA) je selektívne pevné prostredie špeciálne pre pestovanie saprofytických baktérií a húb. Vytvoril ho botanik Friedrich Johann Franz Czapek poľského pôvodu a americký chemik Arthur Wayland Dox; Z tohto dôvodu je tento agar známy aj ako médium Czapek-Dox.

Pôvodné médium bolo kvapalné, ale neskôr sa pridal agar, aby sa z neho stalo pevné médium. Médium Czapek je zložené z dusičnanu sodného, ​​fosforečnanu draselného, ​​síranu horečnatého, chloridu draselného, ​​síranu železnatého, sacharózy, agaru a destilovanej vody.

Agap Czapek A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Zdroj: A. Medmyco / B. Foto: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

PH agaru Czapek je 7,3, ale existuje variant, do ktorého sa pridáva 10% kyselina mliečna, ktorého pH zostáva 3,5. Toto kyslé médium sa používa na kultiváciu acidofilných mikroorganizmov.

Na druhej strane, niektoré komerčné domy upravili zloženie Czapekovho agaru zmenou síranu horečnatého a fosforečnanu draselného za glycerofosfát; táto modifikácia zabraňuje tvorbe zrazeniny fosforečnanu horečnatého pozorovanej pri konvenčnej formulácii. Podobne existuje aj ďalší variant, do ktorého sa pridá kvasnicový extrakt.

A nakoniec, Czapekov agar odporúča Americká asociácia verejného zdravia APHA na štúdium Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp a Penicillium sp. Tieto druhy sa vyznačujú environmentálnymi mikroorganizmami a oportúnnymi patogénmi.

základ

Toto médium obsahuje sacharózu; tento uhľohydrát slúži ako zdroj uhlíka, zatiaľ čo dusičnan sodný je zdrojom dusíka, ale na rozdiel od iných médií je dodávaný dusík anorganický.

Z tohto dôvodu sa médium Czapek považuje za selektívne, pretože rastú iba mikroorganizmy schopné používať anorganické zlúčeniny ako jediný zdroj dusíka.

Ako regulačná látka pre osmolaritu média je bifosforečnan draselný. Síran horečnatý, chlorid draselný a síran železnatý poskytujú zásadné minerály pre rast saprofytických (voľne žijúcich) mikroorganizmov. Tento vzorec tvorí zrazeninu fosforečnanu horečnatého.

Nakoniec je agar-agar zlúčenina, ktorá poskytuje pevnú konzistenciu média a voda je rozpúšťadlom pre všetky zložky.

S modifikovaným vzorcom Czapekovho agaru nevzniká žiadna zrazenina a zlepšuje rastové vlastnosti niektorých húb.

Extrémna kyslosť Acid Czapek Agar z neho robí selektívnejšie médium, ktoré umožňuje iba rast kyslých mikroorganizmov schopných využívať anorganický dusík. Medzitým Czapek-kvasnicový agar zlepšuje výkonnosť niektorých húb.

príprava

Stredná Czapek-Dox

Odváži sa 49 g dehydratovaného kultivačného média a rozpustí sa v destilovanej vode. Zahrievajte až do varu. Zmes sa často pretrepáva, až kým sa úplne nerozpustí.

-Zapek Agar Wedges

Rozpustená zmes sa rozdelí do skúmaviek a autoklávuje sa pri 121 ° C počas 15 minút. Pri vyberaní z autoklávu homogenizujte pred položením skúmaviek a nechajte stuhnúť.

- doštičky s agarovým agénom zapeku

Rozpustená zmes sa autoklávuje pri 121 ° C počas 15 minút a nechá sa vychladnúť na 50 ° C, homogenizuje sa a naleje sa 20 ml do sterilných Petriho misiek. Nechajte stuhnúť, prevráťte ju a uložte do chladničky až do použitia.

PH by malo zostať na 7,3 ± 0,2. Farba dehydratovaného média je biela a pripravené médium je svetlo jantárové, mierne zakalené v dôsledku prítomnosti vločkovitej zrazeniny.

Czapekovo médium pri kyslom pH

Pripravte, ako už bolo opísané, ale do každého litra pripraveného média pridajte 10 ml sterilnej 10% kyseliny mliečnej. Upravené médium Czapek by malo mať pH 3,5 ± 0,2.

Upravené Czapekovo médium

Odváži sa 45,4 g dehydratovaného média a rozpustí sa v 1 litri vody. Zvyšok prípravku je rovnaký, ako je opísané vyššie. Farba dehydratovaného média je biela a pripravené médium je belavé. Konečné pH média je 6,8 ± 0,2.

Czapek-kvasinkové médium

Tiež sa nazýva agar extraktu z kvasiniek Czapek (CYA). Obsahuje prvky klasického Czapekovho agaru plus kvasnicový extrakt.

použitie

Czapekovo médium sa okrem iného používa na vyhľadávanie saprofytických mikroorganizmov vo vzorkách pôdy, zeleniny, zŕn, vzduchu, hmyzu.

Czapekov agar pri kyslom pH sa používa na rast acidofilných mikroorganizmov, zatiaľ čo modifikovaný Czapekov agar je zvlášť užitočný na tvorbu chlamydospor v druhoch komplexu Candida albicans.

Nakoniec je Czapek-kvasničný agar veľmi užitočný na izoláciu Aspergillus a Penicillium.

osiatych

-Zapekový agar

Pri hľadaní Actinomycetes v pôde postupujte nasledovne: vzorka sa spracuje s fenolizovanou vodou počas 30 minút a potom sa 1 ml suspenzie vyseje na Czapekov agar. Inkubujte pri 28 ° C po dobu 5 až 7 dní.

V prípade vzoriek zeleniny, obilia a hmyzu sa tieto vzorky umiestnia priamo na agar. Môžete tiež urobiť riedenie a naočkovať 0,1 ml na povrch agaru.

-Modifikovaný Czapekov agar

Na očkovanie sa používa priama slučka alebo ihla, impregnuje sa tampónom a agar sa naočkuje vpichom, kým sa nedotkne dna platne. Inkubujte 24 hodín pri 28 ° C a skúmajte pod mikroskopom nad a pod doskou, aby ste zistili, či sa vytvorili chlamydospory.

Inkubačná teplota a čas

Inkubačná teplota a čas sa líšia v závislosti od typu izolovaného mikroorganizmu. Doštičky sa všeobecne inkubujú jeden až dva týždne pri teplote v rozmedzí 20 až 25 ° C.

Pre niektoré kmene sú však špecifické podmienky. Napríklad väčšina druhov rodu Aspergillus rastie optimálne pri 30 ° C; avšak A. fumigatus rastie pri 50 ° C.

Pokiaľ ide o inkubačnú dobu jeden alebo dva týždne, je normálne, ale Candida albicans sa môže vyvinúť do 24 až 48 hodín pri 25 ° C.

Charakteristiky niektorých kolónií na tomto médiu

-Penicillium atrovenetum

Vyvíja sa za 12 dní inkubácie pri 27 ° C. Ich kolónie sú malé (25 mm).

Kolónie majú zamatový vzhľad s definovaným bielym okrajom a modro-zeleným odtieňom v strede, ktorý s pribúdajúcim vekom sivú. Zadná strana kolónie je oranžová, vďaka čomu je stredná farba v dôsledku tvorby pigmentu.

- Aspergillus niger

Vyvíja sa s bielymi až žltými mycéliami a čiernymi spórami.

-Candida albicans

Vytvárajú sa krémové svetlo béžové kolónie. V modifikovanom Czapekovom agare tvorí chlamydospory.

- Aspergillus parasiticus

Tmavo zelené mycélium sa vyvíja za 7 dní pri 25 ° C.

QA

Na vyhodnotenie kvality kultivačného média sa môžu vysadiť certifikované kontrolné kmene, ako napríklad: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger vyvíja biele až žlté mycélium a čierne spóry približne za 5 dní, zatiaľ čo Candida albicans bude mať uspokojivý rast v 24 hodinách inkubácie pri 25 ° C; kolónie sú krémovo sfarbené.

obmedzenia

Niektoré štúdie odhalili, že na získanie Actinomycetes je agar s najlepším výťažkom agar zo zemiakovej dextrózy, zatiaľ čo agar Czapek je na druhom mieste, ale na získanie Aspergillus a Penicillium je agar Czapek ten, ktorý poskytuje najvyššiu mieru výťažnosti.

Referencie

1. Dávila M., a kol. Antagonistické aktinomycety proti fytopatogénnym hubám poľnohospodárskeho významu. Mex. Science. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. K dispozícii na: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, Pšenice Á. Izolácia kmeňov Aspergillus niger produkujúcich ochratoxín A v skladovanej zelenej káve (Coffea arabica). Mex. Mic. 2010; 32: 63-68. K dispozícii na adrese.scielo.org.
3. Prispievatelia Wikipedia. Czapekovo médium. Wikipedia, slobodná encyklopédia. 13. januára 2019, 20:30 UTC. K dispozícii na: en.wikipedia.org
4. Conda Pronadisa Laboratories. Modifikovaný agar Czapek-Dox. K dispozícii na adrese: condalab.com
5. Kultivačné médiá Microkit. Agar Czapek-Dox. Diosponible in: Medioscultivo.com