CLED AGAR: ZDÔVODNENIE, POUŽITIE A PRÍPRAVA - BIOLÓGIE - 2026

CLED agar (cystín-laktózy elektrolytu deficitná) je pevná látka kultivačné médium rozdiel, ktorý sa používa na diagnostiku infekcií močových ciest. Zloženie kultivačného média je určené na dobrý rast močových patogénov a je ideálne na kvantifikáciu jednotiek tvoriacich kolónie (CFU).

Kultivačné médium CLED je neselektívne, pretože v ňom môžu rásť gramnegatívne a grampozitívne mikroorganizmy. To však nie je problém, pretože väčšina UTI je spôsobená iba jedným typom mikroorganizmu.

Agar CLED

V prípade polymikrobiálnych infekcií je možné získať 2 alebo 3 rôzne baktérie, ale je to veľmi zriedkavé a väčšinou ide o kontaminované vzorky.

Medzi gramnegatívne baktérie, ktoré môžu rásť v tomto médiu, sú bacily patriace do čeľade Enterobacteriaceae a ďalšie enterické bacily, pričom uropatogény najčastejšie izolované vo vzorkách moču sú tieto: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, medzi ostatnými.

Podobne medzi gram-pozitívnymi baktériami, ktoré môžu rásť v tomto médiu, môžu rásť Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp a dokonca kvasinky, ako je napríklad Candida albicans complex.

Vďaka chemickému zloženiu média však neumožňuje rast niektorých náročných genitourinárnych patogénov, ako je napríklad Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis.

Odôvodnenie agendy CLED

Kultivačné médium CLED obsahuje ako zdroj energie mäsový extrakt, pankreatický hydrolyzát kazeínu a hydrolyzát želatíny. Poskytujú živiny pre vývoj nenáročných baktérií.

Obsahuje tiež cystín, aminokyselinu, ktorá umožňuje rast koliformných baktérií, ktoré sa líšia svojou malou veľkosťou.

Podobne obsahuje laktózu ako fermentovateľný uhľohydrát, z tohto dôvodu je toto médium rozdielne; schopnosť odlíšiť fermentujúce baktérie od fermentácie bez laktózy.

Fermentujúce baktérie spôsobujú zmenu pH média produkciou kyselín, vyvíjajú sa žlté kolónie, zatiaľ čo nefermentujúce baktérie nevytvárajú zmeny v médiu, preto preberajú farbu pôvodného agaru, zelenú.

Fermentačná reakcia sa prejavuje vďaka prítomnosti indikátora pH, ktorým je v tomto médiu brómtymolová modrá.

Na druhej strane nízka koncentrácia elektrolytu v médiu inhibuje typický invazívny rast rodu Proteus, ktorý sa nazýva rojový efekt. Toto vytvára výhodu oproti iným médiám, pretože umožňuje počítanie CFU, vrátane toho, či je prítomný rod Proteus.

Nízka koncentrácia elektrolytov však inhibuje rast niektorých druhov rodu Shigella, čo je v porovnaní s inými médiami nevýhoda.

Odôvodnenie agaru CLED (Bevis)

Existuje variant alebo modifikácia tohto média, ktorú vyrobil Bevis, ktorý do pôvodnej kompozície začlenil kyslý fuchsín (Andradeho indikátor). Pôsobí v spojení s brómtymolovou modrou na odlíšenie fermentácie od nefermentujúcich baktérií.

Rozdiel medzi konvenčným a modifikovaným médiom je farba, ktorú získajú kolónie. V prípade baktérií fermentujúcich laktózu sú kolónie červenkastooranžové s ružovým alebo červeným halogénom, zatiaľ čo nefermentujúce sú modrošedé.

aplikácia

Aged CLED sa používa výhradne na očkovanie vzoriek moču. Využívanie tohto média je obzvlášť časté v európskych laboratóriách, zatiaľ čo v Amerike je menej využívané.

Odber vzoriek musí spĺňať určité parametre, aby sa získali spoľahlivé výsledky vrátane:

• Neberú antibiotiká pred odberom vzoriek.
• Moč si prednostne vezmite najskôr ráno, pretože je koncentrovanejší, keď nie je možné odobrať vzorku invazívnymi metódami.
• Pred odobratím vzorky dôkladne umyte pohlavné orgány.
• Zlikvidujte prvý prúd močenia a potom vložte nádobu.
• Zhromaždite 25 až 30 ml moču v dobre označenej sterilnej nádobe.
• Vezmite okamžite do laboratória obklopeného ľadom.
• Musí sa spracovať do 2 hodín od vydania alebo chladiť pri 4 ° C maximálne 24 hodín.

Očkovanie vzoriek moču

Vzorka moču by sa mala riediť 1:50.

Na zriedenie vložte 0,5 ml moču pacienta a zrieďte ho 24,5 ml sterilného fyziologického roztoku.

Odmerajte 0,1 ml zriedeného moču a povrchovej nátierky drigalskou špachtľou na médiu CLED. Toto je najlepšia metóda očkovania na počítanie kolónií. Z tohto dôvodu sa používa vo vzorkách moču, pretože výsledky sa musia vyjadriť v CFU / ml.

Na kvantifikáciu získaných kolónií postupujte nasledovne: spočítajte kolónie na doštičke a vynásobte ich 10 a potom 50. Takto získate množstvo CFU / ml moču.

interpretácia

Počty nad 100 000 CFU / ml - indikuje infekciu močom

Počty pod 1000 CFU / ml - žiadna infekcia

Počty medzi 1000 - 10 000 CFU / ml - Pochybné, možné znečistenie, opakované odbery vzoriek.

ID

Kolónie pestované na agare CLED by mali mať gram a v závislosti od morfotintoriálnych charakteristík mikroorganizmu sa vykonáva určitá subkultúra.

Napríklad, ak je to gram-negatívny bacil, bude vysiaty na agare MacConkey, kde je potvrdená fermentácia alebo nie laktóza. Okrem toho je na vykonanie testu oxidázy pripojený živný agar.

V prípade, že gram odhalí grampozitívne koky, môže sa subkultivovať na slanom manitolovom agare a na živnom agare. V druhom prípade sa vykonáva test na katalázu. Nakoniec, ak sú pozorované droždie, bude vysiate na agare Sabouraud.

Mnoho laboratórií sa vyhýba použitiu média CLED a na vzorkovanie moču uprednostňuje použitie krvného agaru, MacConkey a výživného agaru.

príprava

V banke s jedným litrom destilovanej vody rozpustite 36,2 g práškového agaru CLED. Po 5 minútach státia sa resuspendovaný agar zahreje za stáleho miešania do varu počas 1 minúty.

Potom sterilizujte pri teplote 121 ° C počas 15 minút v autokláve. Na konci času sa vyberie z autoklávu a nechá sa ochladiť na teplotu 45 ° C. Následne sa v každej sterilnej Petriho miske podáva 15 až 20 ml.

Postup podávania doštičiek sa musí vykonať vo vnútri laminárneho prúdiaceho krytu alebo pred Bunsenovým horákom, aby sa zabránilo kontaminácii.

Podávané doštičky sa nechajú stuhnúť, usporiadajú sa do obráteného stojanu a až do použitia sa skladujú v chladničke (2 až 8 ° C).

Konečné pH pripraveného média by malo byť 7,3 ± 0,2.

Referencie

1. Odporúčania pre mikrobiologickú diagnostiku infekcie močom. Chil. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. K dispozícii na: scielo.org.
2. Panchi J. Identifikácia mikrobiálnej látky spôsobujúcej infekcie močových ciest u pacientov podstupujúcich katetrizáciu močového mechúra. 2016. Bakalárske práce na získanie bakalárskeho titulu v odbore Klinické laboratórium. Technická univerzita v Ambato. Ekvádor.
3. Britannia Laboratories. CLED stredné. K dispozícii na adrese: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories. Návod na použitie, agar CLED. 2013 K dispozícii na adrese: es.renylab.ind.br.
5. Kultivované laboratóriá. Základná príručka mikrobiológie. K dispozícii na adrese: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Možnosť agaru CLED v kultivácii moču. Perspektívne a porovnávacie hodnotenie. Diagn Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiológia. University of Cadiz, 2. vydanie. UCA Publications Service.