SIMMONS CITRATE AGAR: ODÔVODNENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Agar Simmons citrát , že je pevný médium ako biochemické identifikácia testovaných mikroorganizmov, najmä gram - negatívne bacily. Pôvodné médium vytvoril Koser v roku 1923.

Médium Koserovho citrátu pozostávalo z média obsahujúceho fosforečnan sodný, fosforečnan amónny, fosforečnan monodraselný, síran horečnatý a citrát sodný.

A. Obchodné médium s dehydratovaným simmónovým citrátovým agarom B. Pripravený simmónovo citrátový agar. Zdroj: A. Fotografia urobená MSc. Marielsa Gil B. Roto2esdios, z Wikimedia Commons

Ako je zrejmé, jediným zdrojom uhlíka v médiu je citrát a dusík je fosforečnan amónny, vynechávajúce proteíny a uhľohydráty ako zdroj týchto prvkov, ktoré sú bežne prítomné v iných médiách.

Preto sa baktérie naočkované týmto médiom môžu množiť iba vtedy, ak sú schopné absorbovať uhlík z citrátu. Test bol pozitívny, ak v médiu bolo zakalenie, malo však tú nevýhodu, že by sa mohlo vyskytnúť nešpecifické zakalenie.

Tento problém vyriešil Simmons pridaním brómtymolovej modrej a agaru do Koserovej pôvodnej receptúry. Hoci je zásada rovnaká, vykladá sa odlišne.

základ

Niektoré baktérie majú schopnosť prežiť v neprítomnosti fermentácie alebo produkcie kyseliny mliečnej, pričom je potrebné získať energiu pomocou iných substrátov. V tomto teste je jediným ponúkaným zdrojom uhlíka citrát.

Baktérie, ktoré sú schopné prežiť za týchto podmienok, rýchlo metabolizujú citrát ako alternatívu k tradičnému spôsobu pomocou cyklu kyseliny trikarboxylovej alebo fermentačného cyklu citrátu.

Katabolizmus citranu baktériami zahrnuje enzymatický mechanizmus bez zásahu koenzýmu A. Tento enzým je známy pod názvom citrikáza (citrát oxaloacetát lyáza) alebo citrát desmolasa. Reakcia vyžaduje prítomnosť dvojmocného katiónu, ktorý je v tomto prípade dodávaný horčíkom.

Reakciou sa generuje oxaloacetát a pyruvát, ktoré potom vedú k organickým kyselinám uprostred alkalického pH vytvoreného použitím zdroja dusíka. Tieto organické kyseliny sa používajú ako zdroj uhlíka, ktorý vytvára uhličitany a hydrogenuhličitany, čím sa ďalej alkalizuje životné prostredie.

Výsevný režim

Médium Simmons citrátu by malo byť ľahko naočkované do fishtail pomocou priamej slučky alebo ihly a inkubované 24 hodín pri 35-37 ° C. Po uplynutí času sa výsledky pozorujú.

Očkovanie sa uskutočňuje iba na povrchu agaru. Nepropichujte.

interpretácia

Ak médium zostane pôvodnou farbou (zelená) a nedochádza k viditeľnému rastu, test je negatívny, ale ak médium zmodrá, znamená to prítomnosť zásaditých produktov, ktoré sa zistia pomocou indikátora pH. V tomto prípade je test pozitívny.

Citrát (+) a (-). Zdroj: MSc. Marielsa gil

Deje sa tak preto, že ak baktéria používa uhlík citrátu, je tiež schopná zachytávať dusík fosforečnanu amónneho, ktorým uvoľňuje amoniak, alkalizuje médium.

Na druhej strane, ak sa v médiu pozoruje rast baktérií, ale nedochádza k žiadnym zmenám farby, musí sa test považovať aj za pozitívny, pretože ak dôjde k rastu, znamená to, že baktérie boli schopné používať citrát ako zdroj uhlíka, hoci v súčasnosti nedochádza k žiadnym zmenám pH (niekedy to môže chvíľu trvať).

Ak sú pochybnosti o interpretácii konečnej farby, možno ju porovnať s neinokulovanou citrátovou skúmavkou.

príprava

Navážte 24,2 g dehydratovaného média na jeden liter vody. Premiešajte a nechajte asi 5 minút odpočívať. Rozpúšťanie média sa dokončí zahrievaním počas 1 alebo 2 minút, pričom sa často trepe.

Nalejte 4 ml do skúmaviek a autoklávujte pri 121 ° C po dobu 15 minút. Pri opúšťaní autoklávu nakloňte pomocou podpery tak, aby agar stuhol v tvare flauty zobáku s malým blokom alebo dnom a šikmejším.

Konečné pH citrátového média je 6,9 ​​(zelená farba). Toto médium je veľmi citlivé na zmeny pH.

Pri pH 6 alebo nižšom médium zožltne. Táto farba nie je pri teste na baktérie pozorovaná.

A pri pH 7,6 alebo vyššom, médium zmení farbu na pruskú modrú.

použitie

Citrusový agar Simmons sa používa na identifikáciu určitých mikroorganizmov, najmä bacilov patriacich do čeľade Enterobacteriaceae a iných neglukóznych fermentujúcich bacilov.

Zdroj: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Editorial Panamericana SA Argentína.

Záverečné myšlienky

Citrónové médium Simmons je veľmi chúlostivý test, pretože ak sa vyskytnú určité chyby, je možné získať falošné poplachy.

Je potrebné dbať na nasledujúce:

inokulum

Nemalo by sa vytvárať veľmi silné alebo naložené bakteriálne inokulum, pretože to môže spôsobiť, že sa v mieste siatia vytvorí medenožltá farba bez toho, aby to ovplyvnilo zvyšok média, ale môže to viesť k domnienke, že dochádza k rastu. Neznamená to pozitivitu testu.

Silné inokulum môže tiež vytvárať falošne pozitívne, pretože vopred vytvorené organické zlúčeniny v bunkových stenách umierajúcich baktérií môžu uvoľňovať dostatok uhlíka a dusíka, aby sa zmenil indikátor pH.

Preto je ideálne zasiať ihlu namiesto platinovej rukoväte, aby sa zabránilo prebytočnému materiálu.

osiatych

Na druhej strane, keď sa naočkuje batéria biochemických testov na identifikáciu príslušného mikroorganizmu, je dôležité, aby bol citrátový test prvý naočkovaný, aby sa zabránilo prenosu proteínov alebo uhľohydrátov z iného média.

Za týchto okolností je možné získať falošne pozitívny výsledok, pretože každá z týchto látok, ktorá sa zavádza omylom, bude metabolizovaná a spôsobí zmenu pH.

Ďalším spôsobom, ako sa vyhnúť prenosu látok, je dobré spáliť slučku a urobiť nové inokulum medzi jednotlivými testami.

Pri uskutočňovaní inokula je potrebné postupovať opatrne, pretože je potrebné vyhnúť sa tomu, aby sa časť agaru vytiahla z kultúry, z ktorej baktérie pochádzajú, čo bolo vysvetlené vyššie.

V tomto zmysle Matsen, Sherris a Branson odporúčajú riedenie inokula vo fyziologickom roztoku pred naočkovaním citrátového testu, aby sa zabránilo prenosu iných zdrojov uhlíka.

Farebná intenzita

Malo by sa vziať do úvahy, že intenzita vyprodukovanej farby, keď je test pozitívny, sa môže líšiť v závislosti od komerčnej budovy.

Okrem toho existujú mikroorganizmy, ktoré sú testované pozitívne po 24 hodinách, ale existujú aj ďalšie kmene, ktoré na dosiahnutie zmeny pH vyžadujú 48 hodín alebo viac.

Referencie

1. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy na identifikáciu baktérií klinického významu. 3. vydanie. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentína.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentína.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Editorial Panamericana SA Argentína.
4. Laboratóriá BD. Citáty BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015.K dispozícii na: bd.com
5. Britannia Laboratories. Simmons Citrate Agar. 2015.K dispozícii na: britanialab.com
6. Diagnostické laboratóriá Valtek. Simmons Citrate Agar. 2016.K dispozícii na: andinamedica.com.