ČOKOLÁDOVÝ AGAR: ZÁKLAD, POUŽITIE A PRÍPRAVA - BIOLÓGIE - 2026

Agar čokoláda je pevný kultivačné médium obohatené, non - selektívne a non - rozdiel. Používa sa hlavne na izoláciu mikroorganizmov náročných z hľadiska výživy, hoci v nich môže rásť akýkoľvek druh baktérií.

Z tohto dôvodu sa jeho užitočnosť zvyšuje najmä pri očkovaní vzoriek, ktoré sú normálne sterilné, ako je CSF a kĺbová tekutina. Aj keď je tiež zahrnutý do zvolených prostriedkov na výsev polymikrobiálnych vzoriek, v týchto prípadoch je potrebné pridať antibiotiká, ktoré inhibujú sprievodnú flóru.

Čokoládový agar s bakteriálnym rastom

Toto médium má charakteristickú hnedú farbu veľmi podobnú čokoláde, teda svoj názov. Prípravok je veľmi podobný prípravku na krvnom agare, iba v tomto prípade sa musí krv zahriať, aby sa červené krvinky rozložili.

Jeho príprava, podobne ako krvný agar, je veľmi chúlostivá, pretože je ľahko kontaminovateľná. Z tohto dôvodu rad laboratórií uprednostňuje získanie tohto média už pripravené komerčnými spoločnosťami, ktoré zaručujú jeho kvalitu.

základ

Toto médium sa skladá z agaru bohatého na živiny a zahrievanej krvi. Hemolýza červených krviniek poskytuje faktor X (hemin) a faktor V (NAD), ktoré sú potrebné pre rast niektorých mikroorganizmov, ako je napríklad rod Haemophilus. Je tiež veľmi užitočný pri izolácii Neisserias sp.

Rovnako ako krvný agar sa môžu rôzne základné médiá použiť ako základný agar v závislosti od potreby. Medzi použité médiá patria infúzia srdca a mozgu a sójový agar tryptikázy, aj keď najviac odporúčané sú agar Columbia, Müeller Hinton, GC agar a Thayer Martin agar.

Niektoré varianty čokoládového agaru zahŕňajú komerčne dostupný obohatený doplnok s názvom Isovitalex alebo Polivitex.

Tieto doplnky obsahujú vitamín B ₁₂ , L-glutamín, adenín, guanín hydrochlorid, kyselinu p-aminobenzoovú, nikotínamid adenín dinukleotid (NAD), tiamín pyrofosfát, dusičnan železitý, tiamín hydrochlorid, cysteín hydrochlorid, L-cystín, a glukóza.

Je dôležité poznamenať, že čokoládový agar je obohatený viac ako krvný agar, ale neumožňuje pozorovať hemolytické vzorce.

aplikácia

Zdroj: pixnio.com. Autor:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Čokoládový agar pripravený s agarom Columbia

Toto médium obsahuje pankreatický výluh kazeínu a srdca, peptický výluh mäsa, chlorid sodný, agar, kvasnicový extrakt a kukuričný škrob. Je tiež bohatý na vitamíny, minerály a esenciálne aminokyseliny.

Táto vyhrievaná krvná základňa je ideálna na izoláciu baktérií rodu Neisseria. Na druhej strane, ak sa do média dodatočne pridá doplnok Brucella, uvedený mikroorganizmus sa môže izolovať. Výsledky sa zlepšujú s použitím konskej krvi.

Čokoládový agar pripravený pomocou GC základného agaru (pre gonokoky)

Toto médium obsahuje peptony, kukuričný škrob, jednosýtne a dvojsytné tlmivé roztoky, chlorid sodný a agar.

Väčšina komerčne pripravených čokoládových agarových prezentácií prichádza s touto bázou a neobsahujú zahrievanú krv, ale skôr syntetickú zmes hemínu a chemický doplnok rastových faktorov, vitamíny, minerály, aminokyseliny, faktor V a glukózu.

Čokoládový agar pripravený s agarom Müeller Hinton

Používa sa na testovanie antimikrobiálnej citlivosti náročných mikroorganizmov, ako je Streptococcus pneumoniae, s použitím 5% zahrievanej ovčej krvi.

Používa sa tiež na primárnu izoláciu Neisserias a Haemophilus, ale v konkrétnom prípade izolácie Haemophilus sa uprednostňuje použitie konskej krvi, pretože je bohatým zdrojom faktorov X a V.

Na druhú stranu, ak vzorka, ktorá sa má vysiať, pochádza z nesterilnej oblasti, odporúča sa pridanie antibiotík, aby sa inhibovala normálna flóra oblasti.

Príklad pre vzorky dýchacích ciest, u ktorých existuje podozrenie na prítomnosť baktérií rodu Haemophilus, sa bacitracín používa na inhibíciu rastu Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus a saprophytic Neisserias.

V prípade vzoriek kanála genitálií, pri ktorých existuje podozrenie na Haemophilus ducreyi, sa úspešne použil čokoládový agar pripravený nasledujúcim spôsobom: Müeller - Hintonov agar s 5% čokolády konskej krvi, 1% obohatenia Isovitalex a 3 ug / ml vankomycínu.

Čokoládový agar pripravený s agarom Thayer Martin

Toto médium je špeciálne na izoláciu Neisseria gonorrhoeae. Musí obsahovať antibiotiká, ktoré inhibujú sprievodnú flóru. Používa sa jahňacia krv.

príprava

Mali by ste vidieť indikácie pre prípravu základného agaru, ktorý sa má použiť. Nachádzajú sa na zadnej strane nádoby dehydratovaného média. Všeobecne opisujú, koľko musíte zvážiť, aby ste pripravili liter kultivačného média.

Presné potrebné množstvo sa môže pripraviť v laboratóriu, môže byť viac alebo menej ako liter.

výpočty

Na výpočet toho, koľko vážiť, aby sa dosiahol požadovaný objem, sa používa pravidlo tri. Príklad:

Ak na 1 liter je potrebné vážiť 40 g a laboratórium vyžaduje 800 ml, hovorí sa:

1000 ml ----------- 40 g

800 ml -----------– X

Vzorec bude nasledujúci:

X = 32 g (množstvo, ktoré sa má odvážiť 800 ml).

Odvážte a rozpustite

Potrebné množstvo sa odváži a vloží do banky s vodou.

Zahrejte sa na mierny ohrev a jemne miešajte otáčavými pohybmi, až kým sa dehydratované médium úplne nerozpustí, nechajte ho vrieť 1 minútu.

sterilizuje

Banka sa umiestni do autoklávu na sterilizáciu média pri 121 ° C na 20 minút.

Krvný agregát

Pri opúšťaní autoklávu sa nechá stáť, kým teplota média nie je približne medzi 56 až 70 ° C, aby sa umiestnila krv, a mieša sa, až kým médium nezhnedne.

Ak pridávate doplnky, je čas to urobiť. Následne premiešajte a podávajte 20 ml do každej sterilnej Petriho misky.

Celý postup by sa mal vykonávať v laminárnom digestore alebo okolo Bunsenovho horáka.

Nechajte stáť, kým neztuhnú, a uložte obrátene do chladničky.

Ďalší spôsob, ako pripraviť čokoládový agar bez použitia krvi

Základné médium sa pripraví ako je opísané vyššie, komerčne získaný dehydratovaný hemoglobín sa rozpustí a sterilizuje v autokláve.

Oba roztoky sa nechajú ochladiť na 50 ° C, spoja sa a pridá sa doplnok. Miešajte za aseptických podmienok a potom podávajte v sterilných Petriho miskách.

QA

Je dôležité, aby bola krv umiestnená pri uvedenej teplote, pretože je ideálna na lýzu červených krviniek a súčasne udržiava faktor V, ktorý je citlivý na teplotu.

Na povrchu agaru by nemali zostať žiadne bubliny. Z každej šarže 100 platní by sa mala jedna alebo dve platne inkubovať v peci pri 37 ° C počas 24 hodín, aby sa overila ich sterilita.

Na dosiahnutie najlepších výsledkov by sa mal čokoládový agar použiť krátko po príprave.

Kontrolné bakteriálne kmene by sa mali uchovávať v laboratóriu, aby sa vyhodnotila účinnosť čerstvého média pre rast hlavných náročných mikroorganizmov klinického významu.

Referencie

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiológia. University of Cadiz, 2. vydanie. UCA Publications Service.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentína. Editorial Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydanie). Argentina, Editorial Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Realizovateľnosť použitia základného kultivačného média pre agar GC-Biocen Agar v mikrobiologickom laboratóriu. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237 - 238. K dispozícii na: scielo.sld.
5. Prispievatelia Wikipedia. Čokoládový agar. Wikipedia, slobodná encyklopédia. 17. decembra 2018, 19:54 UTC. K dispozícii na: en.wikipedia.org.