Agar cetrimid alebo cetrimid je selektívna pevné kultivačné médium určený pre izoláciu Pseudomonas aeruginosa. Je založená na ukážke výroby charakteristických pigmentov tohto druhu a bola vyrobená z modifikácie techarového agaru, ktorú vytvorili King, Ward a Raney.
Pôvodný vzorec obsahoval soli chloridu horečnatého, síranu draselného, pankreatické štiepenie želatíny a agar-agar. Modifikácia vzorca spočívala v pridaní cetrimidu (cetyltrimetylamóniumbromidu) a glycerolu.
Agar cetrimidu naočkovaný Pseudomonas aeruginosa Zdroj: BiotechMichael, z Wikimedia Commons
Cetrimidový agar je užitočný na mikrobiologické štúdie vzoriek, u ktorých existuje podozrenie na prítomnosť Pseudomonas aeruginosa. Je potrebné poznamenať, že táto baktéria je mimoriadne dôležitá, pretože aj keď je súčasťou normálnej mikrobioty prostredia, často sa správa ako oportúnny patogén.
Z tohto dôvodu je jedným z najbežnejších problémov spôsobených týmto zárodkom nozokomiálne infekcie, to znamená tie, ktoré sa vyskytujú v nemocničnom prostredí a napádajú pacientov, ktorí majú oslabený imunitný systém.
Na druhej strane z dôvodu afinity, ktorú má tento mikroorganizmus s vlhkosťou, sú najzraniteľnejšími cieľovými cieľmi kontaminácie: pomôcky na dýchanie, lieky, rozprašovače, vodné zdroje, klimatizácia, dezinfekčné prostriedky, mydlové roztoky, injekčné roztoky, otvorené rany , medzi inými katétre, močové trubice.
V tomto zmysle je cetrimidový agar užitočný na uskutočňovanie mikrobiologických kontrol a kultúr vyššie uvedených prvkov.
základ
Cetrimidový agar je založený na schopnosti média podporovať rast P. aeruginosa, stimulovať produkciu jeho pigmentov a následne inhibovať rast iných mikroorganizmov.
Tieto vlastnosti sú dôsledkom funkcie každej z jeho zložiek. Prítomný želatínový peptón slúži ako zdroj dusíka, vitamínov a minerálov. Glycerol alebo glycerín funguje ako zdroj uhlíka.
Cetrimid (cetyltrimetylamóniumbromid) je látka, ktorá inhibuje rast baktérií iných ako P. aeruginosa, vrátane iných druhov patriacich do toho istého rodu.
K inhibícii dochádza preto, že cetramid pôsobí ako katiónový detergent, ktorý dokáže destabilizovať plazmatickú membránu väčšiny baktérií, s výnimkou P. aeruginosa a niektorých ďalších, ktoré dokážu prežiť.
Na druhej strane obsahuje chlorid horečnatý a síran draselný. Tieto zlúčeniny stimulujú fenotypovú expresiu súvisiacu so schopnosťou Pseudomonas aeruginosa produkovať rôzne pigmenty, vrátane: pyocyanínu, pyoverdínu, pyorrubínu, pyomelanínu a fluoresceínu. Nakoniec obsahuje agar-agar, ktorý mu dodáva pevnú konzistenciu.
interpretácia
Interpretácia rastu získaného v tomto agare sa uskutočňuje nasledovne:
Pozorovanie okrúhlych, hladkých kolónií s pravidelnými okrajmi, s produkciou modro-zelenkastých, zelených, hnedých alebo červenkastých pigmentov plus emisie ovocného zápachu (aminoacetofenón) je predpokladaným výsledkom prítomnosti tejto baktérie v uvedenej vzorke.
Na druhej strane pozorovanie jasne zeleno-žltého pigmentu na kolóniách svedčí o tom, že P. aeruginosa je, keď je doska vystavená ultrafialovému svetlu.
Fluorescencia kolónií P. aeruginosa na agare cetrimidu pod ultrafialovým svetlom.
Je potrebné poznamenať, že každá pozorovaná farba je spôsobená tvorbou špecifického pigmentu. Modrozelený pigment zodpovedá produkcii pyocyanínu, zelenej až pyoverdínu, červenkastej až pyorubínu, hnedej až pyomelanínu a svetložltej zeleno-fluorescenčnej fluorescencie pod UV svetlom na fluoresceín.
príprava
Odváži sa 43 g dehydratovaného média a rozpustí sa v destilovanej vode. Pridajte 10 ml glycerolu. Zložte zmes na zdroj tepla. Nechajte niekoľko minút variť, kým sa úplne nerozpustí.
Autoklávujte pri 121 ° C počas 15 minút. Nechajte stáť a podávajte v sterilných Petriho miskách, keď je teplota okolo 50 ° C.
Nechajte stuhnúť, prevrátiť, objednať na plakoch a skladujte v chladničke až do použitia. Doštičky s agarom cetrimidu by sa mali vybrať z chladničky pred vysiatím a nechať ohriať na izbovú teplotu.
Konečné pH média by malo byť 7,2 ± 0,2.
Farba dehydratovaného média je béžová a prípravok je nepriehľadný biely.
aplikácia
Všetky druhy vzoriek, u ktorých existuje podozrenie na prítomnosť Pseudomonas aeruginosa, sa môžu vysiať na agar cetrimidu. Preto je užitočný vo všetkých oblastiach mikrobiológie (životné prostredie, priemysel, klinika, voda a potraviny).
Je veľmi dôležité analyzovať nemocničné prostredie, a teda byť schopný uplatňovať nápravné opatrenia, pretože tento mikroorganizmus sa dostáva k pacientom prostredníctvom kontaminovaného zariadenia, liekov, roztokov a dodávok, ktoré pacient používa.
Týmto spôsobom môže mikroorganizmus infikovať dolné dýchacie cesty, močové cesty a rany pacientov s potlačenou imunitou.
Počty kolónií P. aeruginosa sa môžu robiť aj v mikrobiálnych limitných testoch.
osiatych
Cetrimidový agar sa môže použiť ako primárna kultúra. Doska sa naočkuje na jednu zo svojich hrán a odtiaľ sa vyčerpaním rozloží na zvyšok doštičky. Kvapalné vzorky sa môžu očkovať povrchom špachtľou drigalski.
Doštičky sa inkubujú aeróbne pri 37 ° C počas 24 hodín inkubácie.
obmedzenia
- Malé percento kmeňov Pseudomonas aeruginosas neprodukuje pyocyanín, takže je možné interpretovať falošne negatívny výsledok.
- V tomto médiu je inhibovaných niekoľko druhov klinického významu Pseudomonas.
- Napriek dodržaniu charakteristík opísaných pre Pseudomonas aeruginosa, musia byť potvrdené ďalšími identifikačnými testami. Test, ktorý by nemal chýbať, je test oxidázy, musí dať pozitívny výsledok.
- Niektoré Enterobacteriaceae môžu rásť v tomto médiu a vytvárať žltý pigment, ale líši sa od Pseudomonas aeruginosa v tom, že keď je doska vystavená ultrafialovému svetlu, neexistuje fluorescencia.
- Serratia marcescens dokáže vyvinúť a vyrobiť ružový pigment.
- Ak sú doštičky naočkované cetrimidovým agarom vystavené určitý čas pri izbovej teplote, kmene P. aeruginosa môžu stratiť fluorescenciu pozorovanú pri ultrafialovom svetle, táto vlastnosť sa však získa, ak sa inkubujú znova pri 37 ° C.
QA
Na analýzu dobrého výkonu cetrimidového agaru sa môžu použiť kontrolné kmene, ako napríklad: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 a Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Očakávané výsledky sú:
- Dobrý rast pre P. aeruginosa, s modro-zeleným pigmentom a pozitívnym fluoresceínom.
- S. maltophilia a S. aureus budú čiastočne až úplne inhibované.
- Očakáva sa, že Escherichia coli bude úplne inhibovaná.
Referencie
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Fenotypová a sérologická charakterizácia klinických izolátov Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Conda Pronadisa Laboratories. Cetrimidový agarový základ. 2014. K dispozícii na adrese: condalab.com
- Britannia Laboratories. Agar cetrimidu. 2015.K dispozícii na: britanialab.com
- Laboratóriá BD. Agar Bse pseudoselu (agar cetrimidu). 2013. K dispozícii na: bd.com
- Laboratórium Francisco Soria Melguizo, agar CA Cetrimide. 2009. Dostupné na: http://f-soria.es