ŽLUČOVÝ ESKULÍNOVÝ AGAR: ODÔVODNENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Žlč Eskulín agar je selektívny a diferenciálnej médium pevné kultúre. Používa sa ako diagnostický test na stanovenie schopnosti určitého mikroorganizmu rásť v médiu obsahujúcom žlč a tiež na štiepenie glukozidového eskulínu na eskuletín a glukózu.

Tento diagnostický test sa používa na rozlíšenie druhov rodu Streptococcus patriacich do skupiny D (pozitívny na žlčový eskulín), od iných skupín Streptococcus, ktoré reagujú negatívne na tento test.

Doštička na agare so žlčovým eskulínom, naočkovaná kmeňom Enterococcus (test pozitívny). Zdroj: Nebol poskytnutý žiadny strojom čitateľný autor. Philippinjl prevzatý (na základe nárokov na autorské práva).

Malo by sa poznamenať, že niektoré streptokoky skupiny viridanov môžu hydrolyzovať eskulín, ale nie sú schopné rásť v prítomnosti žlče pri koncentrácii 40%, preto je v tomto médiu reakcia na túto skupinu negatívna.

Na druhej strane je žlčové eskulínové médium tiež užitočné na diagnostiku druhov Listeria monocytogenes alebo Aerococcus sp, pretože tieto mikroorganizmy sú pozitívne na žlčový eskulín.

Ezulínový žlčový agar sa skladá z peptónu, mäsového extraktu, šťaveľovej žlče, eskulínu, citrátu železa, agaru a destilovanej vody. Niektoré komerčné domy zahŕňajú azid sodný v zložení média.

Médium sa môže pripraviť v laboratóriu, ak máte všetky zlúčeniny oddelene alebo sa môže pripraviť z komerčného dehydratovaného média.

základ

Žlčové eskulínové médium obsahuje peptony a mäsový extrakt, obe zlúčeniny poskytujú potrebné živiny pre rast mikroorganizmov.

Obsahuje tiež eskulín; Táto zlúčenina je glukozid vytvorený spojením jednoduchého monosacharidu (glukózy) so zlúčeninou nazývanou 6,7-dihydroxycoumarín alebo eskuletín (aglukón), ktorá je spojená acetálovou alebo glukozidickou väzbou.

Test je založený na preukázaní, či sú baktérie schopné hydrolyzovať eskulín. Ak k tomu dôjde, eskalulín sa rozloží na eskuletín a glukózu. Esculetina reaguje so železom prítomným v médiu a vytvára tmavohnedú, takmer čiernu zlúčeninu.

To znamená, že citrát železitý pôsobí ako vývojový pracovník reakcie. Táto vlastnosť robí z agaru žlčového eskalínu rozdielne médium.

Žlčka je inhibítorom, ktorý bráni rastu niektorých mikroorganizmov, preto musí byť baktéria pred štiepením eskulínu schopná rásť v prítomnosti žlče. Preto sa toto médium považuje za selektívne.

Baktérie, ktoré sa v tomto prostredí môžu vyvíjať, sú hlavne tie, ktoré žijú v črevnom prostredí.

V tomto zmysle niektoré komerčné spoločnosti pridávajú do média azid sodný, aby ďalej inhibovali rast enterálnych gramnegatívnych bacilov, čím sa zvyšuje selektivita média pre rast Streptococcus.

Nakoniec agar dáva médiu pevnú konzistenciu a voda je rozpúšťadlom zlúčenín.

príprava

Domáca príprava žlčového eskulínového agaru

Vážiť:

5 g melónov

3 g mäsového extraktu

40 g hovädzej žlče

1 g esculínu

0,5 g citranu železitého

15 g agaru

1000 ml destilovanej vody

V prípade pridania azidu sodného sa odváži 0,25 g / liter a pridá sa k zmesi.

Zložky rozpustite v litri destilovanej vody, zahrievajte, kým sa zlúčeniny úplne nerozpustia. Rozdeľte 5 ml do skúmaviek so skrutkovacím uzáverom s rozmermi 16 x 125 mm. Autokláv pri 15 ° C a tlaku 15 libier počas 15 minút.

Vyberte z autoklávu a skúmavky nakloňte na držiak tak, aby agar stuhol v širokom zobáku s drážkou.

Skladujte v chladničke až do použitia. Pred výsevom nechajte izbovú teplotu.

Môžu sa pripraviť aj doštičky so žlčovým eskulínom; v tomto prípade je celá zmes autoklávovaná v banke a následne distribuovaná do sterilných Petriho misiek. Nechajte ich stuhnúť a uložiť do chladničky.

PH média musí byť 6,6 ± 0,2.

Príprava agaru žlčového eskulínu z komerčného média

Odvážte množstvo určené v príbalovom letáku. To sa môže líšiť od jedného obchodného domu k druhému. Následne postupujte rovnako ako vyššie uvedený postup.

PH média by malo byť 6,6 ± 0,2. Farba dehydratovaného média je svetlo béžová a pripravené médium je tmavožlté.

Komerčné žlčové eskulínové médium. Zdroj: Fotografia zhotovená autorom MSc. Marielsa Gil.

aplikácia

Žlčové eskulínové médium sa používa hlavne na rozlíšenie streptokoka skupiny D (žlčový eskulín pozitívny) od zvyšku streptokokových skupín (žlčový eskulín negatívny).

Kombináciou testu rastu bujónu s hypersaltou a testu so žlčovým eskulínom je možné identifikovať špeciálnu skupinu streptokokov skupiny D s názvom Enterococcus.

Táto špeciálna skupina Streptococcus patrí do skupiny D vyššie uvedeného rodu a sú schopné hydrolyzovať eskulín v prítomnosti žlče, rovnako ako zvyšok členov skupiny D, ale sú tiež schopné sa vyvíjať v hypersaltedovom médiu (BHI s chloridom 6,5% sodíka), vlastnosť, ktorá robí rozdiel.

Preto sa streptokoky, ktoré hydrolyzujú žlč eskulínu, ale nerastú v nadzemnom bujóne, nazývajú streptokoky skupiny D, ktoré nie sú enterokokmi.

osiatych

Inokulujte médium najlepšie z čistého 24 hodinového vývaru Todd-Hewitt.

Pridajte 2 kvapky na povrch média pomocou Pasteurovej pipety a rozotrite do média pomocou platinovej slučky.

Inkubujte pri teplote 35 ° C počas 48 hodín, zatiaľ čo je dodržaná doba inkubácie, je možné sledovať, či nedošlo k pozitívnej reakcii. Pokiaľ reakcia zostane na konci času negatívna, môže sa inkubovať až 72 hodín.

interpretácia

Pozitívna reakcia : objavenie sa tmavohnedej, takmer čiernej farby v zobáku s drážkou (v prípade skúmavky) alebo sčernenie agaru okolo kolónií (v prípade skúšky s platničkami).

Negatívna reakcia : nenastane žiadne sčernenie média alebo sa objaví čierny vzhľad v menej ako polovici skúmavky po 72 hodinách inkubácie. Na druhej strane, bakteriálny rast v médiu bez výskytu čiernej farby by sa mal považovať za negatívny test.

QA

Na vyhodnotenie kvality média musí byť kmeň pozitívny na Enterococcus faecalis ATCC 29212 k dispozícii ako pozitívna kontrola a kmeň Streptococcus, ktorý nepatrí do skupiny D, ako negatívna kontrola.

obmedzenia

-Médiá, ktoré neobsahujú azid sodný, umožňujú rast enterálnych gramnegatívnych bacilov. Niektoré z nich môžu upokojiť stred.

- Niektoré komerčné domy dodávajú nízku koncentráciu žlče (10%), a preto sa niektoré streptokoky, ktoré nepatria do skupiny D, môžu vyvíjať v médiu a hydrolyzovať eskulín, čo môže spôsobiť chyby pri interpretácii.

Referencie

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Editorial Panamericana SA Argentína.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentína.
3. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy na identifikáciu baktérií klinického významu. 3. vydanie. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentína.
4. Lab. Britannia. Eskulínová žlč s azidovým agarom. 2015.K dispozícii na: britanialab.com
5. "Žlčový agar." Wikipedia, slobodná encyklopédia. 22. augusta 2017, 17:30 UTC. 22. apríla 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratórne preparáty Bd Esculin Agar. 2015.K dispozícii na: bd.com
7. Neogen Laboratories. Žlučový eskulínový agar. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com