Agar Biggy je pevná strednej selektívne a diferenčné kultúry. Bol navrhnutý tak, aby izoloval a pomohol pri identifikácii hlavných druhov Candida. Názov BIGGY pochádza z skratky anglického bizmutu glukózy a glycínu.
Pôvodný vzorec bol vytvorený Nickersonom, a preto je toto médium známe aj ako Nickersonov agar. V súčasnosti sa skladá z kvasnicového extraktu, glycínu, dextrózy, citranu amónneho, citrátu bizmutu, siričitanu sodného a agaru.
Grafické znázornenie veľkého agaru. Zdroj: Flickr.com
BIGGY agar je určený na diferenciáciu druhov komplexov C. albicans, C. tropicalis, C. krusei a C. kefyr, ale rastú aj iné druhy, ako sú Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum kandidum. a Saccharomyces cerevisiae.
Má dobrú citlivosť a špecifickosť, v porovnaní s inými médiami s podobnou funkciou je však na druhom mieste a prekonal ho CHROMagar. Z tohto dôvodu mnohé laboratóriá uprednostňujú laboratóriá, aj keď sú oveľa drahšie.
Malo by byť zrejmé, že použitie agaru BIGGY, ako aj iných podobných prostriedkov, pomáha pri rýchlej predpokladanej identifikácii, nikdy však nie je potvrdzujúce. Preto musia byť k dispozícii ďalšie metódy identifikácie; napríklad identifikačné systémy Vitek 32 a API 20.
základ
Agar BiGGY sa považuje za čiastočne selektívne médium na izoláciu kvasiniek, najmä rodu Candida, hoci môžu rásť aj iné rody.
Je to tiež rozdielne médium, pretože v závislosti od druhu sa budú pozorovať rôzne vlastnosti, pokiaľ ide o vzhľad, farbu, tvar a veľkosť. Považuje sa za chromogénne médium v dôsledku vývoja rôznych farieb v kolóniách.
Farba kvasinkových kolónií je spôsobená prítomnosťou siričitanu bizmutitého v agare. Nickerson si uvedomil, že kvasinky rodu Candida vykonávajú extracelulárnu redukciu siričitanu bizmutitého a transformujú ho na sulfid bizmutitý (nerozpustná čierna látka). Výsledkom sú svetlo hnedé až čierne kolónie.
Tento agar obsahuje kvasnicový extrakt a dextrózu, ktorá poskytuje zdroj základných živín a energie pre vývoj kvasníc. Glycín je stimulátor rastu kvasiniek, zatiaľ čo inhibuje rast určitých baktérií.
V tom istom zmysle pôsobia ako inhibítory bakteriálneho rastu citran amónny a bizmutitý, ako aj siričitan sodný. Agar je látka, ktorá poskytuje stredne tuhú konzistenciu.
príprava
Odváži sa 45 g dehydratovaného kultivačného média a rozpustí sa v litri destilovanej vody. Zmes sa pretrepáva a zahrieva sa 1 minútu do varu až do úplného rozpustenia. Toto kultivačné médium nie je autoklávovateľné.
Po ochladení na približne 45 ° C vo vodnom kúpeli nalejte 20 ml na sterilné Petriho misky.
Farba dehydratovaného média je žltkasto sivá a pripravená je žltkastobiely gél, v ktorom je možné pozorovať mierne flokulačné zrazeniny.
PH by malo byť 6,8 ± 0,2.
Pripravené médium by sa malo uchovávať v chladničke (4 ° C) a chrániť pred svetlom. Keďže ide o médium, ktoré nie je možné autoklávovať, malo by sa použiť čo najskôr. Jeho použitie sa odporúča pred 3 dňami po jeho príprave.
použitie
Doštičky sa inkubujú pri teplote miestnosti (25 ° C) 24, 48 a 72 hodín a inkubačná doba sa môže predĺžiť až na 5 dní.
Každý druh Candida si vyvíja určité vlastnosti, vďaka ktorým sa navzájom odlišujú. Výrobcovia média opisujú pre každý druh tieto vlastnosti:
- Komplex albumín albánskych: na tomto agare sa vyvíja ako hladké, okrúhle, hnedé alebo čierne kolónie s miernym myceliálnym okrajom. S výnimkou toho, že tmavá farba sa do stredu nerozptyľuje.
- Candida tropicalis: svetlé, malé, tmavohnedé kolónie s čiernym stredom a miernym okrajom mycélia. Po inkubácii 72 hodín sa tmavá farba rozptyľuje smerom do stredu, čo je pre tento druh typické.
- Kandida krusei vyvíja veľké, ploché, drsne vyzerajúce kolónie s hnedou až čiernou farbou.
-Candida parakrusei: stredne veľké kolónie, väčšinou drsné, ploché. Farba sa môže líšiť od svetlej tmavočervenohnedej po svetlo červenohnedú. Hranica kolónií má rozsiahle žltkasté mycélium.
--Andida stellatoidea: vytvára stredné, ploché kolónie, tmavohnedé, takmer čierne. Myceliálny vývoj je veľmi vzácny.
Štúdia, ktorú vykonali Yücesoy a Marol v roku 2003, ukázala, že médium CHROMagar má lepšiu citlivosť a špecifickosť pre diferenciáciu a identifikáciu rôznych druhov Candida ako agar BIGGY.
QA
Na kontrolu sterility sa neinokulované platne inkubujú pri 25 ° C, v tme 24 až 48 hodín, očakáva sa, že nedochádza k žiadnemu rastu ani k zmene farby.
Kmeňmi ATCC odporúčanými na kontrolu kvality média sú:
Komplex ATCC 60193 Candida albicans, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. Vo všetkých z nich sa očakáva rast, ako je opísané vyššie.
Môžu sa použiť aj nasledujúce kmene:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 a Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. V prvých dvoch sa očakáva úplná inhibícia, ale v prípade čiastočného rastu budú kolónie krémovo sfarbené.
V prípade S. aureus sa očakáva, že bude úplne inhibovaný, ale ak čiastočne rastie, jeho kolónie sú biele.
obmedzenia
Niektoré baktérie sú schopné rásť v tomto médiu a môžu dokonca stmavnúť, čo simuluje kolóniu Candida, ale keď je kolónia rozmazaná a pozorovaná pod mikroskopom, ľahko sa odstráni.
Tabuľka: Charakteristika kolónií niektorých kvasiniek na agare BIGGY podľa práce Yücesoya M. a Marol S.
Zdroj: Yücesoy M, Marol S. Výkonnosť CHROMAGAR candida a BIGGY agaru na identifikáciu druhov kvasiniek. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7
Referencie
- Yücesoy M, Marol S. Výkonnosť CHROMAGAR candida a BIGGY agaru na identifikáciu druhov kvasiniek. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Technický list BIGGY Agar. K dispozícii na: mcdlab.net/
- Lab Neogen. BIGGY agar. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
- Conda Pronadisa Laboratories. VEĽKÝ agar. K dispozícii na adrese: condalab.com
- Laboratóriá BD. Agar BD BiGGY (bizmut glukózový glycínový kvasnicový agar). 2011. K dispozícii na: bd.com