BHI AGAR: ZALOŽENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Agar BHI alebo Brain Heart Infusion agar médium je nutričné pevné kultúre. V španielčine sa to nazýva agar infúzie srdca. Je to neselektívne kultivačné médium, čo znamená, že sa môžu vyvíjať všetky druhy grampozitívnych a gramnegatívnych baktérií, ako aj niektoré kvasinkové a vláknité huby.

Skladá sa z infúzie teľacieho mozgu a srdca, peptického hydrolyzátu zo živočíšnych tkanív, pankreatického hydrolyzátu kazeínu, chloridu sodného, ​​glukózy, fosforečnanu sodného a agaru.

Dosky BHI. Zdroj: Fotografia zhotovená autorom MSc. Marielsa Gil.

Je potrebné poznamenať, že agar BHI je jedným z najčastejšie používaných kultivačných médií v bakteriologických laboratóriách. Môže sa používať bez doplnkov ako primárna kultúra, subkultúra kolónií získaných z iných selektívnych médií alebo na udržiavanie kmeňov v laboratóriu.

Na druhej strane je to ideálne médium na použitie ako základ pri príprave obohatených médií, ako je krvný agar a čokoládový agar. Obidve sú ideálne na izoláciu náročných mikroorganizmov z hľadiska výživy. Malo by sa však poznamenať, že keďže obsahuje glukózu, nie je vhodný na pozorovanie hemolytických schém.

Podobne sa agar BHI môže použiť na prípravu špeciálnych médií na izoláciu ťažko rastúcich patogénnych mikroorganizmov v bežných médiách, medzi ktoré patria: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae a Histoplasma capsulatum.

S antibiotickou prísadou sa agar BHI stáva selektívnym médiom na izoláciu húb.

základ

Je to výživné kultivačné médium, ktoré izoluje stredne náročné mikroorganizmy a jeho obohatenie sa môže zvýšiť pridaním krvi a iných výživových doplnkov.

Je to neselektívne kultivačné médium, a preto umožňuje rast najviac grampozitívnych a gramnegatívnych baktérií, ako aj niektorých húb. Môže sa však stať selektívnym pridaním antibiotík.

Médium obsahuje infúziu teľacieho mozgu a srdca, peptický hydrolyzát živočíšnych tkanív a pankreatický hydrolyzát kazeínu; Všetky tieto zlúčeniny pôsobia ako zdroje vitamínov, aminokyselín, dusíka a uhlíka.

Glukóza je uhľohydrát, ktorý mikroorganizmom po fermentácii dodáva energiu. Medzitým chlorid sodný a fosforečnan disodný udržiavajú osmotickú rovnováhu a poskytujú pH takmer neutrálne. Nakoniec agar poskytne stredne tuhú konzistenciu.

príprava

Naváži sa 52 gramov dehydratovaného média a rozpustí sa v jednom litri destilovanej vody. Zmes sa privedie na zdroj tepla do varu a často sa počas procesu rozpúšťania mieša.

BHI agarové platne alebo kliny sa môžu pripraviť bez prísad.

kliny

Na prípravu klinov podávajte preparát, kým sa polovica každej skúmavky nenaplní, prikryte a sterilizujte v autokláve pri 121 ° C po dobu 15 minút, keď opúšťate, položte na základňu, kým neztuhne. Neskôr skladujte v chladničke až do použitia.

BHI kliny pre bakterioteku. Zdroj: Fotografia zhotovená autorom MSc. Marielsa Gil.

taniere

Rozpustená zmes sa autoklávuje pri 121 ° C počas 15 minút, nechá sa vychladnúť na 50 ° C a 20 ml média sa podáva do sterilných Petriho misiek. Nechajú stuhnúť, prevrátia sa a uchovávajú sa v chladničke až do použitia. Pred nasadením doštičiek nechajte zohriať na izbovú teplotu.

PH média musí zostať na 7,4 ± 0,2.

Surové médium je béžovej farby a pripravené médium je svetlo jantárovej farby.

Príprava krvného agaru

Po sterilizácii média ochladte na teplotu približne 45 až 50 ° C, potom pridajte krv (50 ml), jemne premiešajte, aby sa homogenizovala, a asepticky podávajte 20 ml v každej Petriho miske. Ak sa na doske vytvoria bubliny, mal by sa cez bubliny rýchlo pretlačiť ľahší plameň, aby sa odstránili.

Podobne je možné pripraviť špeciálne médiá pridaním zodpovedajúcich prísad, keď zmes dosiahne teplotu 45 až 50 ° C.

Médium zostáva čerešňové červené.

aplikácia

Použitie bez doplnkov

BHI agar bez aditív je užitočný ako primárna kultúra a na siatie čistých kmeňov mikroorganizmov s nízkym alebo stredne náročným účinkom na ich následnú identifikáciu.

Keďže ide o svetlo sfarbené médium, je ideálne na pozorovanie pigmentov a keďže neobsahuje rušivé látky, je možné na ňom vykonať niektoré biochemické testy, ako je oxidáza a kataláza, alebo z tohto kolónie možno vykonať ďalšie biochemické testy. agar.

Podobne sa kliny BHI agaru bežne používajú na udržiavanie kmeňov v laboratóriu po určitú dobu (bakterioteca).

Doštičky alebo kliny očkované povrchom bakteriálnymi kmeňmi sa inkubujú pri 37 ° C počas 24 až 48 hodín. Medzitým bude teplota a doba inkubácie v hubách závisieť od typu požadovanej huby.

Ako základný agar na prípravu ďalších médií

S touto bázou sa môžu pripraviť obohatené a selektívne médiá.

obohatený

Jeho hlavnou funkciou je slúžiť ako základ na prípravu krvného agaru na rutinné použitie v mikrobiologických laboratóriách. Najmä báza BHI vedie k izolácii Streptococcus sp. Nevýhodou však je, že nie je vhodný na pozorovanie hemolytických schém, pretože obsahuje glukózu.

Používa sa tiež na prípravu králičieho alebo koňského krvného agaru na izoláciu Haemophilus sp. Pre dosiahnutie najlepších výsledkov je možné pridať doplnok na obohatenie (IsoVitaleX).

Ak vzorky pochádzajú z respiračného traktu, je možné do agaru pridať bacitracín, aby sa inhibovala sprievodná flóra a zvýšila sa pravdepodobnosť regenerácie kmeňov Haemophilus sp.

Alternatívne je možné pripraviť krvný agar (jahňacie alebo ľudské) s cystín telluritom na izoláciu Corynebacterium diphtheriae. Podobne je užitočné pripraviť králičie krvný agar s prídavkom cystínu a glukózy na izoláciu Francisella tularensis.

Očkovanie krvného agare sa vykonáva pomocou odsávania a sú inkubované pri 35-37 ° C počas 24-48 hodín v microaerophilicity (5-10% CO ₂ ).

selektívne

Toto médium s prídavkom antibiotík môže nahradiť agar Sabouraud na izoláciu húb.

Kombinácia agaru BHI s chloramfenikolom - gentamicínom alebo penicilínom -, streptomycínom a koňskou krvou je ideálna na izoláciu Histoplasma capsulatum.

V závislosti od izolovaného mikroorganizmu sa odporúča inkubácia pri aerobióze pri 35 - 37 ° C alebo pri izbovej teplote. Niekedy je nevyhnutná inkubácia v oboch teplotných rozsahoch, pričom sa používajú 2 platne.

Niektoré huby, ako napríklad Trichophyton mentagrophytes, sa musia inkubovať pri izbovej teplote až 7 dní.

QA

Z každej pripravenej šarže sa odporúča inkubovať 1 platňu alebo klin klinom pri 37 ° C počas 24 hodín a overiť, že nedochádza k rastu; Je to obzvlášť dôležité pri príprave krvného agaru, pretože je ľahko kontaminovaným médiom.

Na druhej strane, kvalita média sa môže hodnotiť naočkovaním známych alebo certifikovaných štandardných kmeňov a sledovaním ich vývoja.

V tomto zmysle je možné na vyhodnotenie BHI agaru bez prísad použiť kmene Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 alebo Candida albicans ATCC 10231. Inkubujú sa pri aeróbii pri 37 ° C počas 24 až 48 hodín. Vo všetkých prípadoch sa očakáva uspokojivý rast.

Kmene Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 alebo Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 sa môžu naočkovať na vyhodnotenie misiek s krvným agarom.

Bakteriálne kmene sa inkubujú pri teplote 37 ° C v mikroaerofilite počas 24 hodín, zatiaľ čo huba sa inkubuje pri teplote miestnosti vo vlhkej komore až 7 dní. Vo všetkých prípadoch sa očakáva uspokojivý rast.

Referencie

1. Britannia Laboratories. Agar s infúziou srdca. 2015. K dispozícii na adrese: britanialab.com.
2. Laboratóriá BD. Agar s infúziou srdca (BHI). 2013. K dispozícii na: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, agar s infúziou srdca. 2009.
4. Neogen Laboratory. Agar s infúziou srdca. K dispozícii na adrese: foodsafety.neogen.com
5. Gil M. Krvný agar: založenie, použitie a príprava. 2018. Dostupné na adrese: lifeder.com.
6. Prispievatelia Wikipedia. Infúzia srdca v mozgu. Wikipedia, slobodná encyklopédia. 19. september 2018, 03:58 UTC. K dispozícii na: wikipedia.org. Prístup k 2. marcu 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentína.