PONORNÝ OLEJ: ZLOŽENIE, VLASTNOSTI, POUŽITIA - BIOLÓGIE - 2024

Imerzný olej je viskózna číra kvapalina s indexom lomu vysoko. Z tohto dôvodu sa bežne používa pri mikroskopických pozorovaniach, pretože poskytuje schopnosť koncentrovať svetlo, keď prechádza objektívom mikroskopu 100X, čím zvyšuje jeho rozlišovaciu schopnosť.

K tomu dochádza v dôsledku vytvárania viskózneho filmu medzi objektívom a náterom, čo bráni rozptylu svetelných lúčov, keď sa dostanú do vzduchu, čím sa koncentrujú svetelné lúče smerom k vzorke.

Kvapkadlo s olejovou imerziou a mikroskop zameraný na objektív 100X pomocou olejovej imerzie. Zdroj: Pixabay.com

Ponorný olej sa používa iba s objektívom 100X. Preto sa cieľ 100X nazýva aj cieľ ponorenia. Zvyšok sa označuje ako suché ciele. Túto šošovku nemožno použiť bez imerzného oleja, pretože bez nej by vizualizácia nebola uspokojivá.

Hlavnou funkciou imerzného oleja je poskytnúť jasnejší, ostrejší a definovanejší obraz, ktorý umožňuje pozorovanie detailov, ktoré by pri iných šošovkách nebolo možné.

Prvým olejom použitým na tento účel bol anízový olej používaný spolu s prvou ponornou šošovkou vytvorenou spoločnosťou Giovanni Battista Amici. Toto len zabránilo chromatickej aberácii, ale nezvýšilo numerickú apertúru systému šošoviek.

Potom sa použil cédrový olej, ale jeho použitie malo veľa nevýhod. Medzi nimi bola vysoká kyslosť, ktorá krátkodobo poškodila ciele.

Následne sa používali ďalšie látky, ako napríklad voda a glycerín, až kým sa nevytvorili syntetické imerzné oleje, ktoré sa postupne čistili, až kým nedosiahli súčasný imerzný olej, ktorý je komplexnou zlúčeninou organických látok.

Zloženie imerzného oleja

Imerzný olej je tvorený zmesou organických zlúčenín, ako sú: terfenyl, hydrogenovaný terfenyl, prírodné uhľovodíky a polybutény.

Vlastnosti ponorného oleja

Imerzný olej je svetlo žltá kvapalina, mierne viskózny vzhľadu, s charakteristickou vôňou a s hustotou medzi 0,92 až 0,99 g / cm ³ .

Ponorný olej nie je rozpustný vo vode a má bod varu 340 ° C. Index lomu a (n 20 ° C / D) je v rozsahu 1,482 - 1,516. Medzitým je index blesku 110 ° C a viskozita je v rozsahu od 100 do 120 mPa.s.

Tento produkt sa musí zlikvidovať správne, pretože je ekotoxický. Inými slovami, je škodlivý pre životné prostredie, najmä ovplyvňuje vodné živočíchy. Na druhej strane to dráždi pokožku a sliznicu. Pri požití je nefrotoxický a kardiotoxický.

Ponorný olej je stabilný pri teplote 15 až 25 ° C, čo je teplota, pri ktorej sa musí skladovať.

Základy ponorenia oleja

Pri použití šošoviek s väčším zväčšením by sa mala zvýšiť intenzita svetla. Mnoho svetelných lúčov sa však stratí, pretože sú rozptýlené po dosiahnutí vzduchu (priestor medzi krycím sklíčkom a šošovkou) a dokonca aj niektoré lúče sa úplne odrážajú.

Ponorný olej má index lomu podobný skla. Preto, keď sa olej dostane do kontaktu medzi šošovkou 100X a krycím sklíčkom, svetelné lúče sa koncentrujú.

Koncentrované lúče prechádzajú vzorkou a zaostrujú obraz, to znamená zväčšujú numerickú apertúru objektívu a korigujú chromatické a sférické aberácie.

Použitie alebo aplikácie

Použitie imerzného oleja je nevyhnutné najmä vtedy, keď je potrebné pozorovať obraz širším spôsobom, pričom sa použije objektív s najvyšším zväčšením (objektív 100x), aby sa zistili podrobnosti, ktoré sú nevyhnutné na stanovenie diagnózy.

Preto sa široko používa v mikroskopických štúdiách v rôznych oblastiach, ako sú: histológia, cytologia, hematológia a bakteriológia. Napríklad je užitočný na štúdium charakteristík buniek a tkanív pacienta.

Používa sa tiež na analýzu krvných náterov, kde chceme podrobne opísať charakteristiky hemoparazitov vo vnútri a zvonku erytrocytov, ako aj v gramových prípravkoch na definovanie morfotintoriálnych charakteristík mikroorganizmov.

Zvyčajne sa používa v pevných prípravkoch, pretože sa neodporúča v čerstvých prípravkoch. Je to tak preto, že povrchové napätie oleja spôsobuje posun krycieho sklzu, čo spôsobuje, že sa vzorka počas pozorovania posúva a bráni analýze.

Na druhej strane je imerzný olej užitočný nielen v konvenčnej svetelnej mikroskopii: používa sa tiež v mikroskopoch s úplnou internou reflexnou fluorescenciou (TIRFM) a v aplikáciách konfokálnej fluorescencie.

Kroky na pozorovanie prípravku pomocou imerzného oleja

Aby sa sklíčko mohlo zobraziť pod mikroskopom, malo by sa najprv zaostriť na objektív s najnižším zväčšením, zvyčajne 10x, s nízkou intenzitou svetla.

Potom prejde na objektív 40X a svetelná dráha je mierne zvýšená. Pri tomto zväčšení možno vykonať niektoré analýzy, ale na zobrazenie štrukturálnych detailov je potrebné 100-násobné zväčšenie.

Pred presunutím na objektív 100X sa na kryciu sklíčko umiestni kvapka imerzného oleja priamo na miesto, ktoré chcete pozorovať, a potom sa veža mikroskopu presunie, aby sa v preparáte našiel objektív 100x.

Intenzita svetla sa reguluje (zvyšuje) (pohybom kondenzátora a otváraním membrány). Ak mikroskop používa parafokálne objektívy, malo by sa dokonale zaostriť niekoľko malých pohybov mikrometrovej skrutky (smerom dopredu alebo dozadu).

Ak sa pokúsite zaostriť prípravok priamo pomocou ponornej šošovky, môžete mať ťažkosti s nájdením zaostrenia. Nejde o nemožnú akciu, ale problém sa výrazne zvyšuje.

Starostlivosť

Na použitie imerzného oleja je potrebné zohľadniť určité podmienky.

Ak sa pripraví farebný prípravok, ako napríklad náter zafarbený Giemsou alebo gramom, počkajte, až náter úplne zaschne, a až potom ponorte olej. Inak bude olej spolu s vodou tvoriť micely, ktoré neumožnia vidieť prípravok.

Na druhej strane, po pozorovaní šarže prípravkov, to znamená na konci pracovného dňa, by sa objektív 100X mal dôkladne vyčistiť pomocou šošovkového papiera s etanolom. Ak je šošovka znečistená, olej na nej zaschne a potom bude veľmi ťažké ju odstrániť, čo poškodí zorné pole.

Rovnako je potrebné vziať do úvahy, že olej je horľavý a musí sa udržiavať mimo zdrojov tepla (zapaľovače). Je dôležité vyhnúť sa zahrievaniu nad 65 ° C.

Nakoniec je olej toxickým produktom. Preto by sa malo zabrániť priamemu kontaktu s pokožkou a sliznicami, kde môže spôsobiť mierne podráždenie. Aby sa predišlo nehodám, odporúča sa pri manipulácii s nimi používať rukavice a ochranné okuliare.

V prípade kontaktu s olejom je potrebné oblasť umyť veľkým množstvom vody. Ak by olej vnikol do očí, mal by sa umyť rovnakým spôsobom, pričom by oči mali zostať otvorené. V prípade náhodného požitia je dôležité, aby ste prehltli teplú vodu a navodili zvracanie, okrem návštevy najbližšieho lekára.

Referencie

1. "Celkový interný odrazový fluorescenčný mikroskop." Wikipedia, slobodná encyklopédia. 30. decembra 2018, 22:46 UTC. 14. mája 2019, 01:54
2. IVD. Mikroskopia Ponorenie oleja. K dispozícii na adrese: Users / Team / Downloads.
3. Environmentálna biológia a mikrobiológia. Činnosť optického mikroskopu. K dispozícii na adrese: eumed.net/libros.
4. Sánchez Lera Rita María, Oliva García Ninfa Rosa. História mikroskopu a jeho vplyv na mikrobiológiu. Rev Hum Med, 2015; 15 (2): 355 - 372. K dispozícii v: scielo.
5. Herrero J. Prax č. 1: Základy a použitie spoločného zloženého optického mikroskopu. Universitat d´Alacant K dispozícii na adrese: rua.ua.es/dspace
6. Scharlau - MSDS. Ponorný olej, pre mikroskopiu. 2001. Dostupné na: insumos-labcentral.