MACCONKEY AGAR: ZDÔVODNENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2024

Agar MacConkey je pevné médium, ktoré umožňuje výlučnej izoláciu gramnegatívnych baktérií. Z tohto dôvodu je to selektívne médium a tiež umožňuje rozlíšiť medzi fermentáciou laktózy a nefermentujúcim bacilom, čo z neho robí diferencované médium. Je to jedno z najpoužívanejších kultivačných médií v mikrobiologickom laboratóriu.

Toto médium sa používa hlavne na izoláciu gramnegatívnych bacilov patriacich do čeľade Enterobacteriaceae, vrátane oportúnnych a enteropatogénnych druhov.

Agón MacConkey očkovaný dvoma druhmi baktérií. Ľavé kolónie na fermentáciu laktózy, kolónie na fermentáciu laktózy na pravej strane.

Môže sa tiež použiť na izoláciu iných enterických bacilov, ktoré žijú v gastrointestinálnom trakte, ale nepatria k Enterobacteriaceae, ako sú napríklad Aeromonas sp, Plesiomonas sp.

Nakoniec môže izolovať ďalšie, okrem glukózy fermentujúce gramnegatívne bacily, ktoré sa nachádzajú v životnom prostredí, vode alebo pôde, ale niekedy to môžu byť aj oportunné patogény, ako sú Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaligenes sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia.

základ

MacConkey agar

Základ tohto média možno vysvetliť opisom jeho zložiek, pretože každý z nich má účel, ktorý určuje jeho vlastnosť.

Žlčové soli a kryštalická fialová

V tomto zmysle má agar MacConkey zložité zloženie. V prvom rade obsahuje žlčové soli a kryštalickú fialovú.

Tieto prvky sú zodpovedné za inhibíciu rastu grampozitívnych baktérií a niektorých náročných gramnegatívnych bacilov. Na druhej strane uprednostňuje rozvoj gramnegatívnych bacilov, ktoré nie sú týmito látkami ovplyvnené. Preto je to selektívne médium.

Uvádza sa, že je mierne selektívny v porovnaní s inými médiami, ktoré tiež inhibujú rast grampozitívnych baktérií a tiež väčšiny gramnegatívnych baktérií.

Peptony, polypektóny a laktóza

Obsahuje látky, ktoré poskytujú potrebné živiny mikroorganizmom, ktoré sa vyvíjajú v tomto prostredí, ako sú napríklad peptony, polypektóny a laktóza.

Laktóza je kľúčovým bodom pre to, aby bolo médium diferencované, pretože u mikroorganizmov, ktoré majú schopnosť fermentovať laktózu, sa vytvoria silné ružové kolónie.

Niektoré baktérie môžu fermentovať laktózu pomaly alebo slabo, vyvíjajú sa svetloružové kolónie a zostávajú pozitívne na laktózu.

Tí, ktorí nefertujú laktózu, používajú ako zdroj energie peptony, produkujú amoniak, alkalizujú médium. Z tohto dôvodu sú kolónie, ktoré pochádzajú, bezfarebné alebo priehľadné.

Indikátor PH

Zmena farby sa dosiahne pomocou inej základnej zlúčeniny, ktorú má agar MacConkey. Táto zlúčenina je indikátorom pH, ktorý je v tomto prípade neutrálne červený.

Fermentáciou laktózy vzniká produkcia zmiešaných kyselín. Okyslia médium na pH pod 6,8.

To spôsobí, že sa indikátor pH zmení na tmavo ružový odtieň. Intenzita farby sa môže meniť v závislosti od konečného pH.

Destilovaná voda, chlorid sodný a agar

Na druhej strane obsahuje destilovanú vodu a chlorid sodný, ktoré dávajú médiu hydratáciu a osmotickú rovnováhu. Nakoniec médium obsahuje agar, ktorý je základom, ktorý poskytuje konzistenciu pevného média.

Pripravené agarové médium MacConkey by malo mať konečné pH upravené na 7,1 ± 0,2.

príprava

Na jeden liter agaru MacConkey sa musí navážiť 50 g dehydratovaného média, potom sa vloží do banky a rozpustí sa v jednom litri destilovanej vody. Po 10 minútach státia sa zahrieva, stále sa mieša až do varu po dobu 1 minúty.

Banka sa potom umiestni do autoklávu a sterilizuje sa pri 121 ° C na 20 minút. Na konci času sa vyberie z autoklávu a nechá sa vychladnúť, až kým nedosiahne teplotu 45 ° C, aby sa neskôr podával v sterilných Petriho miskách vo vnútri laminárneho prúdiaceho krytu alebo pred Bunsenovým horákom.

Nechajte stuhnúť a skladovať v držiaku s prevrátenou platňou a až do použitia chladiť v chladničke pri teplote 2 - 8 ° C.

Na získanie agaru MacConkey, ktorý inhibuje efekt Swarning produkovaný rodom Proteus, sa používa agar MacConkey s nízkym obsahom solí.

Použitie konvenčného agaru MacConkey

MacConkey Agar je súčasťou všetkých kultivačných médií usporiadaných na siatie klinických vzoriek získaných v laboratóriu. Je tiež užitočný v mikrobiológii potravín a mikrobiológii životného prostredia.

Rôznorodosť gramnegatívnych tyčiniek, ktoré rastú v tomto médiu, vyjadruje fenotypové vlastnosti, ktoré pomáhajú urobiť predpokladanú diagnózu daného druhu. Napríklad veľkosť, farba, konzistencia a vôňa kolónií sú niektoré z charakteristík, ktoré môžu viesť.

V tomto médiu druhy Escherichia coli, Klebsiella sp a Enterobacter sp produkujú silné ružové kolónie obklopené zónou vyzrážanej žlče.

Zatiaľ čo baktérie ako Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp a Hafnia sp sa môžu objaviť po 24 hodinách bezfarebné alebo svetloružové za 24 až 48 hodín.

Podobne rod Proteus, Edwadsiella, Salmonella a Shigella produkujú bezfarebné alebo priehľadné kolónie.

Ďalšie varianty agaru MacConkey

Existujú aj ďalšie varianty agaru MacConkey, ktoré majú konkrétne účely. Uvádzajú sa nižšie:

Agar MacConkey so sorbitolom

Toto médium bolo určené na rozlíšenie enteropatogénneho kmeňa (enterohemoragická Escherichia coli O157: H7) od zvyšku kmeňov Escherichia coli.

Toto médium vymieňa sacharózu laktózu za sorbitol. Enterohemoragické kmene E. coli O157: H7 sa líšia od ostatných, pretože nefertujú sorbitol, a preto sa získajú priehľadné kolónie, zatiaľ čo ostatné kmene E. coli fermentujú sorbitol a kolónie sú silne ružové.

MacConkey agar bez kryštálovej violeti ani soli

Tento agar sa výrazne líši od klasického agaru MacConkey, pretože nemá fialový kryštál a grampozitívne baktérie môžu rásť.

Na druhej strane neprítomnosť soli inhibuje výskyt rojenia na agare produkovanom niektorými enterickými bacilmi, ako sú baktérie rodu Proteus, a tak uľahčuje izoláciu všetkých prítomných baktérií vrátane grampozitívnych baktérií.

MacConkey agar s cefoperazónom

Tento variant MacConkey Agar bol navrhnutý na pôvodnú izoláciu Laribacter hongkongensis a neskôr sa zistilo, že je užitočný na izoláciu Arcobacter butzleri. Obidve sú mierne zakrivené gramnegatívne tyčinky rezistentné na cefoperazón.

Tieto baktérie boli nedávno spojené s príčinou gastroenteritídy a získanej hnačky u ázijských a európskych jedincov, ktorí sa objavili ako dva silné vznikajúce patogény.

Antibiotikum umožňuje inhibovať sprievodnú flóru gastrointestinálneho traktu, čo podporuje vývoj týchto baktérií a bráni ich bez povšimnutia, pretože rast trvá 72 hodín.

Agar MacConkey pripravený s morskou vodou pri 10% obj

Tento variant je užitočný na hodnotenie bakteriálnych sanitárnych ukazovateľov fekálnej kontaminácie vrátane celkových koliformných baktérií a fekálnych koliformných baktérií v rekreačných slaných vodách (pláže a zálivy).

Cortez a kol. V roku 2013 preukázali, že takto pripravené médium výrazne zvyšuje regeneráciu týchto mikroorganizmov v soľnom prostredí v porovnaní s použitím agaru MacConkey pripraveného destilovanou vodou.

Je to spôsobené skutočnosťou, že modifikované médium stimuluje rast baktérií, ktoré sú fyziologicky v stave latencie „životaschopné, ale nekultivovateľné“, a preto nie sú obnoviteľné v konvenčných médiách.

Referencie

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT, a kol. Použitie agaru cefoperazónu MacConkey na selektívnu izoláciu Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
2. MacConkey agar. Wikipedia, slobodná encyklopédia. 4. apríla 2018, 18:16 UTC. 29. decembra 2018, 15:22 en.wikipedia.org
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentína. Editorial Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydanie). Argentina, Editorial Panamericana SA
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Vplyv kultivačných médií pripravených s morskou vodou na zdravotné ukazovatele v morských vodách kúpeľov v Chichiriviche, štát Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiológia. University of Cadiz, 2. vydanie. UCA Publications Service.