- základ
- Vlastnosti dopravného prostriedku
- príprava
- Polotuhé Stuartovo médium s redoxným indikátorom
- Domáca príprava
- prísady
- Príprava s komerčným médiom
- Tekuté modifikované médium Stuart (domáce)
- aplikácia
- Identifikácia vzorky v dopravnom prostriedku
- QA
- obmedzenia
- Referencie
Médium Stuart je polotuhý agaru alebo bujónu bez živín, použitý pre transport biologických vzoriek. Jeho účelom je udržať kmene prítomné vo vzorke životaschopné určitý čas, ale bez zvyšovania mikrobiálnej populácie.
Vytvorili ho Moffet, Young a Stuart v roku 1948 a neskôr ho upravili Toshach a Patsula. Skladá sa z glycerofosfátu sodného, tioglykolátu sodného, chloridu vápenatého a agaru. Posledne menované je prítomné v polotuhom médiu a nie je prítomné v kvapaline. Niektoré laboratóriá k tomu pridávajú metylénovú modrú.
Kultiveta s transportom Stuart. Zdroj: Autor: CDC / Dr. Gilda Jones, s láskavým dovolením: Knižnica obrázkov verejného zdravia
Spravidla sa používajú, keď nie je možné okamžite vysiať vzorku. V tomto prípade sa vzorka umiestni do transportného média, zatiaľ čo sa prenesie do laboratória, ktoré spracuje kultúru.
Týmto spôsobom je zaručené, že prítomné mikroorganizmy zostanú nažive až do ich naočkovania zodpovedajúcim kultivačným médiom.
Pôvodne bolo jeho použitie určené na prepravu vzoriek močovej trubice alebo vagíny, pri ktorých bolo podozrenie na prítomnosť Neisseria gonorrhoeae. Neskôr si uvedomili, že jeho užitočnosť môže byť širšia.
Médium Stuart sa ukázalo ako veľmi účinné okrem iného pri ochrane labilných a náročných mikroorganizmov, ako sú Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Corynebacterium diphteriae, Bordetella pertusis. Okrem iných nepríjemných mikroorganizmov, ako sú Enterobaktérie.
Médium Stuart v zásade zabraňuje vysúšaniu vzorky, udržuje osmotickú rovnováhu a udržuje mikroorganizmy v ideálnom pH. Na druhej strane, toto médium strategicky neobsahuje živiny, čím bráni množeniu mikroorganizmov.
Na trhu existujú špeciálne zariadenia na prepravu vzoriek, ktoré obsahujú tento alebo iný dopravný prostriedok nazývaný kultúra. Môžu byť tiež pripravené v laboratóriu.
základ
Účelom Stuartovho spôsobu dopravy je udržať vzorky tak blízko ich pôvodného stavu, až kým sa nespracujú.
Glycerofosforečnan sodný a chlorid vápenatý je tlmivý systém, ktorý funguje tak, že udržuje pH a osmolaritu.
Medzitým pôsobí tioglykolát sodný ako redukčné činidlo a v prípade, že obsahuje agar, dáva mu polotuhú konzistenciu na oneskorenie okysličovania média. Nakoniec je metylénová modrá indikátorom oxidácie, to znamená, že detekuje prítomnosť kyslíka.
Polotuhé médium s redoxným indikátorom je ideálne na prepravu vzoriek, pri ktorých existuje podozrenie na prítomnosť anaeróbnych baktérií.
Vlastnosti dopravného prostriedku
Médium Stuart, rovnako ako všetky dopravné prostriedky, spĺňa určité vlastnosti vrátane:
- Zachováva životaschopné mikrobiálne kmene bez množenia.
- Neobsahuje živiny; Jeho zlúčeniny sú zamerané na udržanie hydratácie vzorky za primeraných podmienok pH a osmolarity.
-Inhibuje autolyzát niektorých jemných mikroorganizmov, ako je napríklad pneumokok.
-Používa sa dočasne, nemalo by sa predĺžiť príliš dlho.
príprava
Polotuhé Stuartovo médium s redoxným indikátorom
Domáca príprava
prísady
Glycerofosfát sodný 10 g
Tioglykolát sodný 1,0 g
Chlorid vápenatý 0,1 g
Metylénová modrá 0,002 g
Agar-agar 3 g
Destilovaná voda 1 l
Miešajte zložky a zahrievajte, kým sa úplne nerozpustia. Nalejte do skúmaviek alebo špeciálnych tampónov. Zavedú sa do autoklávu a sterilizujú sa pri 121 ° C počas 15 minút. Skúmavky nechajte vychladnúť vo zvislej polohe (v tvare bloku). Uchovávajte pri izbovej teplote.
Príprava s komerčným médiom
Navážte 14,1 g média v 1 litri destilovanej vody. Za trepania často, až kým sa úplne nerozpustí, môže sa variť. Zvyšok postupu je už opísaný.
Dehydrované médium je krémovo sfarbené a pripravené by malo byť na svojom povrchu modré. Je to kvôli prítomnosti metylénovej modrej.
PH média sa musí upraviť na 7,4 ± 0,2
Tekuté modifikované médium Stuart (domáce)
prísady
Glycerofosfát sodný 10 g
Tioglykolát sodný 1 g
Dihydrát chloridu vápenatého 0,1 g
Destilovaná voda 1000 ml
Má rovnaké prísady ako polotuhá látka, ale nemá agar ani metylénovú modrú. V tomto prípade sa zložky zmiešajú bez zahrievania a 0,5 ml sa rozdelí do skúmaviek 16 x 125 mm so skrutkovacími uzávermi.
Sterilizuje sa v autokláve pri 121 ° C počas 10 minút. Na odber vzoriek by sa mali použiť dakronové tampóny, ak je vzorka určená na PCR alebo hodváb, ak je určená na kultiváciu.
Skúmavky sa skladujú pri izbovej teplote.
aplikácia
Komerčne existujú špeciálne zariadenia na prepravu vzoriek nazývané kultúra; Toto zariadenie je predĺžená, tenká trubica, ktorá má tampón vo vnútri a na konci je segment, ktorý obsahuje polotuhé alebo tekuté Stuartovo médium.
Zariadenie sa otvorí a vzorka sa odoberie tampónom. Potom sa zavedie späť do skúmavky, kým sa špička tampónu nezasunie do polotuhého transportného média; Niektoré z nich prinesú polyuretánovú špongiu napustenú tekutým Stuartovým médiom, s ktorým sa vzorka uchová, keď sa udržiava vlhká.
V prípade podozrenia na prítomnosť jemných mikroorganizmov by sa na odobratie vzorky mali použiť bavlnené tampóny s aktívnym uhlím.
Vzorky, ktoré je možné odobrať pomocou tampónov alebo tampónov a ktoré sa môžu preniesť do tohto média, sú hrtanové výpotky, rektálne výtery a rôzne sekréty vrátane vaginálnych, uretrálnych, rán, očných, ušných a abscesov.
Počas prenosu vzorky v transportnom médiu do laboratória sa treba vyhnúť vystaveniu média extrémnym podmienkam prostredia (príliš chladným alebo príliš horúcim). Malo by sa tiež zabrániť náhlym zmenám atmosférického tlaku.
Čas, v ktorom je médium schopné udržať životaschopnosť mikroorganizmu, bude závisieť od príslušného kmeňa. Napríklad pre mikroorganizmy rodu Neisserias a Haemophilus môžu zostať životaschopné až 24 hodín, ale kmene ako Salmonella alebo Shigella môžu trvať dni a dokonca týždne.
Ak sa odhaduje, že spracovanie vzorky môže trvať dlhšie ako 4 dni, je vhodnejšie vzorku zmraziť pri -70 ° C.
Identifikácia vzorky v dopravnom prostriedku
Pripravené dopravné prostriedky alebo komerčná kultivar musia mať štítok, na ktorom budú umiestnené tieto informácie:
Meno a priezvisko pacienta: zabraňuje zámene vzoriek.
Identifikačné číslo: je vhodné udržiavať objednávku v práci.
Zdroj odberu vzoriek: pomáha bakteriológovi pri výbere vhodného kultivačného média.
Ošetrujúci lekár: Niekedy je potrebné uskutočniť prípadné konzultácie.
Dátum a čas odberu vzorky: na prijatie alebo zamietnutie vzorky je nevyhnutné podľa času, ktorý uplynul medzi odberom vzorky a prijatím do laboratória.
Ďalšie informácie, ktoré by boli veľmi užitočné priložiť, sú:
Predpokladaná diagnóza: riadi pridávanie špeciálnych kultivačných médií podľa podozrenia na diagnózu.
Antibiotická liečba: je užitočné pripojiť sa k antibiogramu.
Všetky tieto informácie sú nevyhnutné na zabezpečenie správneho spracovania vzoriek.
QA
Na vyhodnotenie účinnosti Stuartovho média môžu byť známe kmene inokulované a udržiavané pri 25 ° C, ako napríklad: Bordetella pertussis ATCC 9340, Haemophilus influenzae ATCC 19418, Neisseria gonorrhoeae ATCC 19904, Neisseria meningitidis ATCC 13090, Streptococcus pneumoniae ATCC 6301.
Vo všetkých prípadoch sa očakáva regenerácia príslušného mikroorganizmu, ktorý sa uchováva 24 hodín.
Na druhej strane sa môžu použiť ďalšie kmene, ako napríklad: Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Streptococcus pyogenes ATCC 12344, Enterococcus faecalis ATCC 33186, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 a Escherichia coli ATCC 11775.
Vo všetkých prípadoch sa očakáva výrazné zotavenie až 96 hodín.
obmedzenia
Niektoré štúdie zabezpečujú, že glycerofosfát prítomný v Stuartovom médiu môže byť metabolizovaný niektorými koliformami, okrem iných gramnegatívnych baktérií, a preto sa môže množiť v tomto médiu.
Toto riziko sa zvyšuje, čím dlhšie je spracovanie vzorky oneskorené. Podobne to ovplyvňuje vystavenie Stuartovho média vysokým teplotám počas prepravy.
Referencie
- „Transportné médium (mikrobiológia).“ Wikipedia, slobodná encyklopédia. 13. apríla 2018, 10:36 UTC. 1. apríla 2019. K dispozícii na: es.wikipedia.org
- Microkit Laboratories: Culture Media. Stuart Transport. K dispozícii na: K dispozícii na: Medioscultivo.com
- LabLisan. Stuartov dopravný prostriedok. K dispozícii na adrese: lablinsan.cl
- Scientific MDM. Výhody mikrobiologického transportného média Stuart. K dispozícii na: mdmcientifica.com
- Metrix Laboratories. Stuart. 2017. K dispozícii na adrese: metrixlab.mx
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentína.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Editorial Panamericana SA Argentína.