STREDNÁ SIM: ZALOŽENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2025

SIM médium je polotuhé a rozdiel agar, špeciálne navrhnutý tak, aby pomoc identifikovať niektoré baktérie, najmä Enterobacteriaceae. Skladá sa z tripteínu, peptónu, síranu železa, síranu amónneho, tiosíranu sodného a agaru.

Toto médium umožňuje vykonávanie troch dôležitých testov: produkciu sírovodíka (H ₂ S), tvorbu indolu a motility, a preto je skratka SIM. Kvôli svojej veľkej užitočnosti nemôže chýbať v bakteriologickom laboratóriu.

A. Komerčné médium SIM B. Test SIM H2S (-), Indol (-) a motilita (+) a SIM H2S (+), indol (-), test motility (+). Zdroj: A. Fotka od autora MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza

Na rozdiel od iných médií musí byť polotuhá, aby bolo možné zistiť pohybovú kapacitu niektorých baktérií. V tomto zmysle tento test funguje veľmi dobre na Enterobacteriaceae, ale nie na nefermentujúcich gramnegatívnych tyčinkách, kde sú preferované iné metódy, ako je napríklad visiaci kvapka.

Médium SIM umožňuje rozlíšiť určité špecifické vlastnosti, ktoré charakterizujú niektoré baktérie vo vzťahu k iným. Napríklad Escherichia coli sa vyznačuje tým, že je H ₂ S (-), indolu (+) a motility (+), zatiaľ čo Proteus mirabilis je H ₂ S (+), indol (-), motilita (+).

základ

Je to kultivačné médium, ktoré sa považuje za odlišné, pretože jeho použitie rozlišuje medzi mikroorganizmami, ktoré sú schopné produkovať sírovodík, od tých, ktoré ho nemajú; Zdôrazňuje tiež tie, ktoré tvoria indol od tryptofánu od tých, ktoré ho nemajú, a nakoniec odlišuje pohyblivé baktérie od imobilných.

Zdroj energie

Ako každé kultivačné médium, má prvky, ktoré poskytujú potrebné živiny, aby sa mohli vyvíjať nenáročné mikroorganizmy. Tieto prvky sú zastúpené peptonmi a tripteínom.

Vývoj mikroorganizmu v médiu je nevyhnutný na to, aby bolo možné pozorovať prítomnosť alebo neprítomnosť charakteristík, ktoré toto médium hodnotí.

Výroba sírovodíka

Písmeno S v SIM skratka sa vzťahuje k produkcii sírovodíku (H ₂ S). Baktérie schopné tvoriť sírovodík absorbujú síru z tiosíranu sodného.

Akonáhle je H ₂ je vytvorená S -colourless plynom, reaguje s prítomnosťou soli železa v médiu, ktoré tvoria železný sulfid, jasne viditeľné (čierne zrazeniny). Baktérie, ktoré sa tvoria H ₂ S, opustí médium pôvodnej farby (béžový).

Prítomnosť čiernej zrazeniny môže brániť interpretácii pohyblivosti. Avšak, väčšina H ₂ S- produkujúce Enterobacteriaceae, je známe, že pozitívne pohyblivé, ako je Salmonella, Proteus a Citrobacter. Ďalej čierna zrazenina, ktorá pokrýva takmer celé médium, naznačuje pozitívnu motilitu.

Tvorba indolu

Druhé písmeno skratky SIM je „I“, čo predstavuje vznik indolu.

V tomto zmysle tripteín plní okrem toho, že je zdrojom živín, ďalšiu základnú funkciu. Tento peptón je bohatý na aminokyselinu nazývanú tryptofán, a preto môže vykazovať baktérie, ktoré produkujú tryptofanázu.

Tento enzým je zodpovedný za štiepenie aminokyseliny tryptofánu s následnou tvorbou indolu (bezfarebná látka), kyseliny pyrohroznovej a amónneho.

Preto je na preukázanie tejto reakcie potrebné pridať odhaľujúcu látku (Ehrlichovo činidlo alebo Kovacovo činidlo). Buď reaguje s indolom a vytvára na povrchu agaru látku v tvare červeného fuchsie. Ak sa objaví prsteň fuchsie, indolový test sa interpretuje ako pozitívny.

Baktérie, ktoré tento enzým neobsahujú, nebudú tvoriť kruh a sú interpretované ako negatívny indolový test.

Je dôležité si uvedomiť, že indolový test by sa mal interpretovať ako posledný, pretože po pridaní činidla sa médium zakalí, čo sťažuje vizualizáciu pohyblivosti.

pohyblivosť

Napokon písmeno „M“ slova SIM znamená motilitu. Aby sa vyhodnotila pohyblivosť, je toto médium strategicky polotuhé, pretože táto vlastnosť je nevyhnutná na to, aby bolo možné pozorovať, či dochádza alebo nie je bakteriálny pohyb. Baktérie, ktoré majú bičíky, sú tie, ktoré dávajú tento pozitívny test.

Pozitívny test bude zrejmý, keď sa zistí zákal, a to ako v počiatočnom inokulu, tak okolo neho. Zatiaľ čo nemotilné baktérie sa vyvíjajú iba na ceste počiatočného inokula.

príprava

Stredná SIM

Navážte 30 g dehydratovaného média a rozpustite v litri destilovanej vody. Zmes sa nechá stáť 5 minút a potom sa zahrieva do varu, často sa mieša až do úplného rozpustenia.

Zmes sa rozdelí do skúmaviek s vatovými viečkami a v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút. Vyberte stojan na skúmavky z autoklávu a nechajte ho stuhnúť vo zvislej polohe tak, aby médium malo tvar bloku.

Z dôvodu zachovania sa uchováva v chladničke až do použitia. Pripravené médium musí mať konečnú hodnotu pH 7,3 ± 0,2.

V čase naočkovania musí byť médium pri izbovej teplote. Stredná farba je béžová.

Kovacovo činidlo

Odmerajte 150 ml amylu alebo izoamylu alebo butylalkoholu. (Použite jednu z troch uvedených možností).

Rozpustite 10 g p-dimetylaminobenzaldehydu. Potom sa pomaly pridá 50 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej.

Hotové činidlo je bezfarebné alebo svetlo žlté. Mal by sa uchovávať v jantárovej fľaši a uchovávať v chladničke. Nepoužívajte, ak má tmavohnedú farbu; to znamená, že je poškodený. Toto činidlo je výhodné, pokiaľ ide o Enterobacteriaceae.

Erlichovo činidlo

Odváži sa 2 g p-dimetylaminobenzaldehydu a rozpustí sa v 190 ml absolútneho etylalkoholu a pomaly sa mieša so 40 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej. Rovnakým spôsobom skladujte Kovacove činidlo. Ehrlichovo činidlo sa používa najčastejšie na nefermentujúce a anaeróbne baktérie.

aplikácia

Médium SIM sa veľmi používa v bakteriologických laboratóriách. Jeho výhodou je, že pri identifikácii Enterobacteriaceae je možné v jednej skúmavke pozorovať tri základné vlastnosti.

osiatych

Správnym spôsobom zasiatia tohto média je použitie ihly, ktorou sa odoberie časť čistej kolónie, ktorá sa má študovať, a vertikálne sa vloží do stredu média. Mal by sa vykonať jeden výpad. Punkcia by nemala dosiahnuť dno tuby, správne je pokryť iba dve tretiny hĺbky.

Opakovanie inokula sa neodporúča, pretože to môže viesť k nesprávnym interpretáciám pozitívnej motility. Naočkované médium sa inkubuje aeróbne pri 37 ° C počas 24 hodín.

Akonáhle je čas k záveru, sleduje sa, či bol alebo nebol výroba H ₂ S a motility ich čítať. Nakoniec sa odhalí indol pridaním 3 až 4 kvapiek Ehrlichovho alebo Kovacovho činidla, jemne premiešajte a interpretujte.

Zdroj: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Editorial Panamericana SA Argentína.

QA

Ako kontrola sterility sa jedna alebo dve skúmavky inkubujú bez inokulácie v peci pri 37 ° C počas 24 hodín. Očakáva sa, že po tejto dobe nedôjde k žiadnemu rastu ani zmene farby.

Ako kontrola kvality sa môžu použiť známe certifikované kmene, ako napríklad: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Očakávané výsledky sú: Escherichia coli H ₂ S negatívne, indolu a pozitívne motility, Enterobacter aerogenes iba pozitívne motility, Salmonella typhimurium, H ₂ S a pozitívne motilitu, s negatívnym indolu. Proteus vulgaris je pozitívny, zatiaľ čo Klebsiella pneumoniae a Shigella sú negatívne.

obmedzenia

- Niektoré kmene Morganella morganii, okrem iných kmeňov, môžu v tomto médiu produkovať hnedastý pigment v dôsledku produkcie melanínu, nemalo by sa to zamieňať so zrazeninou sulfidu železnatého. V neskúsených odborníkmi táto situácia môže generovať falošne pozitívne výsledky v interpretácii H ₂ S testom .

- Striktné aeróbne baktérie budú rásť iba na povrchu skúmavky, čo sťažuje interpretáciu pohyblivosti.

Referencie

1. Laboratóriá BD. BBL SIM Medium. 2008. K dispozícii na: bd.com
2. Neogen Laboratories. SIM médium. K dispozícii na: foodafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM médium. 2009. Dostupné na: http://f-soria.es
4. Laboratórium Brizuela-Lab. Stredná SIM. K dispozícii na: .brizuela-lab.com
5. Britannia Laboratories. Stredná SIM. 2015.K dispozícii na: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Editorial Panamericana SA Argentína.