MEDIO MIO: ZALOŽENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

MIO médium je biochemické testy použité pre pomoc pri identifikácii druhov baktérií, ktoré patria do čeľade Enterobacteriaceae. Je celkom výživný a skladá sa z glukózy, kvasnicového extraktu, peptónu, tripteínu, hydrochloridu L-ornitínu, purpurovej brómokrezolu a agaru.

Význam jeho skratky (MIO) popisuje každý z parametrov, ktoré možno pozorovať na tomto médiu; pohyblivosť, indol a ornitín. Motilita je schopnosť mikroorganizmu sa pohybovať v dôsledku prítomnosti bičíkov. Na zachovanie tejto vlastnosti musí byť konzistencia média polotuhá, takže prípravok obsahuje menej agaru.

Náčrt interpretácie výsledkov v médiu MIO. Zdroj: Pripravil autor MSc. Marielsa gil

Produkcia indolu ukazuje prítomnosť enzýmu tryptofanázy, ktorá pôsobí na aminokyselinu tryptofán, čo vyžaduje použitie odhaľovacieho činidla na zviditeľnenie produkcie indolu.

Nakoniec ornitín určuje, či je baktéria schopná dekarboxylovať aminokyselinu, to znamená, či má enzým orinitín dekarboxylázu.

základ

Peptón, kvasnicový extrakt a tripteín

Tieto prvky prispievajú k výživovej sile tohto média. Slúžia ako zdroj živín a esenciálnych aminokyselín pre bakteriálny vývoj.

Tripteín je okrem toho zdrojom tryptofánu, ktorý vykazuje prítomnosť enzýmu tryptofanázy, ktorá degraduje tryptofán redukčnou deamináciou, uvoľňovaním indolu, kyseliny pyrohroznovej, amoniaku a energie.

Indol je bezfarebný, preto sa jeho prítomnosť odhalí pridaním piatich kvapiek Ehrlichovho alebo Kovacsovho činidla, obidve s p-dimetylaminobenzaldehydom.

Aldehydová skupina tejto zlúčeniny reaguje s indolom a vytvára na povrchu agaru kruhový fuchsiový červený produkt.

Akákoľvek stopa farby by sa mala považovať za pozitívny test. Dôkaz by sa mal okamžite prečítať, pretože v priebehu času sa farba zhoršuje.

Okrem toho by sa tento test mal odhaliť po zaznamenaní výsledkov motility a dekarboxylácie ornitínu.

interpretácia

Pozitívny test: tvorba červeného kruhu fuchsie pri pridávaní kvapiek Kovacsovho činidla.

Negatívny test: žiadna tvorba kruhu.

pohyblivosť

Schopnosť baktérií pohybovať sa bude zrejmá, ak sa pozoruje zakalené médium alebo sa okolo počiatočnej inokulácie rozširuje silná rastová línia.

Negatívny test pohyblivosti sa preukáže pozorovaním tenkej línie rastu a všetko okolo neho bude bez rastu.

Je dôležité, aby sa motilita odčítala skôr, ako sa odhalí indol, pretože pridanie činidla zakalí celé médium.

U mobilných, ale pomaly rastúcich baktérií je ťažké preukázať ich motilitu s týmto médiom. V takom prípade sa odporúča použiť iné testy alebo metódy, ako je stredná motilita alebo metóda nevybavená kvapkami.

glukóza

Glukóza je fermentovateľný uhľohydrát, ktorý okrem dodávania energie okysľuje aj prostredie, čo je nevyhnutná podmienka na to, aby došlo k dekarboxylácii aminokyseliny ornitínu.

Kvašovanie glukózy musí vždy prebiehať počínajúc princípom, že všetky baktérie patriace do rodiny Enterobacteriaceae fermentujú glukózu.

L-ornitin

V prípade, že baktérie produkujú enzým ornitín dekarboxylázu, môže to pôsobiť po okyslení média fermentáciou glukózy.

Enzým ornitín dekarboxyláza pôsobí na karboxylovú skupinu aminokyseliny za vzniku amínu nazývaného putresín, ktorý médium opäť alkalizuje.

Tento test by sa mal odčítať po 24 hodinách inkubácie, pretože ak sa pokúsite čítať skôr, ako môžete nesprávne interpretovať test s nesprávnym negatívnym výsledkom.

Je potrebné si uvedomiť, že prvou reakciou, ktorá sa vyskytuje, je fermentácia glukózy, takže médium v ​​počiatočnej fáze (prvých 10 až 12 hodín) zožltne. Ak následne dôjde k dekarboxylácii ornitínu, médium zmení farbu na fialovú.

Je dôležité interpretovať test dekarboxylácie ornitínu pred odhalením indolu, pretože pridanie Kovacsovho činidla mení farbu média.

interpretácia

Negatívny test: stredne sfarbené žlté alebo so žltým pozadím.

Pozitívny test: stredne úplne fialový.

Indikátor PH

V tomto prípade sa používa brómokrezolová purpurová; zodpovedný za odhalenie, keď dôjde k zmene pH v médiu. Po okyslení indikátor zožltne a po alkalizácii zafarbí na purpurovo.

Výsevná a vývojová technika

Na rozsievanie média MIO sa používa priama slučka alebo ihla a spolu s ňou sa odoberie časť skúmanej kolónie.

Uprostred MIO sa v priamej línii urobí hlboká punkcia. Neodporúča sa vykonávať dvojitú punkciu, pretože môže spôsobiť nesprávny obraz pohyblivosti, ak sa punkcie nevykonávajú na rovnakom mieste.

Inkubujte 24 až 48 hodín pri 37 ° C v aerobióze. Pozrite sa na výsledky v tomto poradí: pohyblivosť, dekarboxylácia ornitínu a nakoniec odhalte indol.

Odporúča sa asepticky odstrániť 2 ml média, preniesť ho do sterilnej skúmavky a vykonať tam test indolu, takže ak je negatívny, zvyšok pôvodnej skúmavky sa môže inkubovať ďalších 24 hodín, aby sa indol opäť odhalil.

Vývoj indolu sa uskutočňuje nasledujúcim spôsobom: Do média MIO sa pridá 3 až 5 kvapiek Kovacsovho činidla a zmes sa intenzívne mieša. Pozoruje sa, či sa objaví prsteň červenej fuchsie.

príprava

MIO médium

Navážte 31 g média MIO a rozpustite v jednom litri destilovanej vody.

Zahrievajte, kým sa zmes nevarí jednu minútu, často trepaním, až kým sa agar úplne nerozpustí. Rozdeľte 4 ml média do 13/100 skúmaviek s vatovými viečkami.

Sterilizuje sa v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút. Vyberte z autoklávu a nechajte stáť rovno v stojane tak, aby sa vytvoril polotuhý blok.

Uchovávajte v chladničke pri teplote 2-8 ° C. Pred výsevom bakteriálneho kmeňa ho nechajte zahriať.

Farba dehydratovaného média je béžová a farba pripraveného média mierne opalizujúca fialová.

Konečné pH pripraveného média je 6,5 ± 0,2

Médium sa pri kyslom pH zmení na žlté a pri alkalickom pH je fialové.

Činidlo Kovacs (vývojár Indole Test)

Toto činidlo sa pripraví takto:

Odmeria sa 150 ml amylu, izoamylu alebo butylalkoholu (ktorýkoľvek z týchto troch). V nej sa rozpustí 10 g p-dimetylaminobenzaldehydu. Potom sa pomaly pridá 50 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej.

Pripravené činidlo je bezfarebné alebo svetlo žlté. Mal by sa uchovávať v jantárovej fľaši a uchovávať v chladničke. Tmavohnedá farba vykazuje jej zhoršenie.

Ehrlichovo činidlo môže byť tiež nahradené Kovacsovým činidlom. Ten, ktorý je citlivejší, je výhodnejší na odhalenie indolu v baktériách, ktoré ho produkujú v nepatrných množstvách, napríklad v niektorých nefermentujúcich gramnegatívnych tyčinkách a určitých anaeróboch.

použitie

Toto médium je test, ktorý dopĺňa batériu biochemických testov na identifikáciu baktérií patriacich do čeľade Enterobacteriaceae.

Údaje o dekarboxylácii ornitínu slúžia na rozlíšenie Shigella sonnei, ktoré sú pozitívne, od Shigella boydii, Shigella flexneri a S. dysenterieae, ktoré sú negatívne.

Rozlišuje tiež rod Klebsiella, ktorý je negatívny, od rodu Enterobacter, kde je väčšina jeho druhov pozitívna.

Zdroj: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Editorial Panamericana SA Argentína.

QA

Zakaždým, keď sa pripraví dávka MIO média, je možné vykonať kontrolný test. Z tohto dôvodu sa na pozorovanie chovania média používajú známe alebo certifikované kmene.

Kmeňmi, ktoré sa môžu použiť, sú Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes a Proteus mirabilis.

Očakávané výsledky sú E. coli a M. morganii. Dan M: +, I: + a O: +.

Klebsiella pneumoniae je negatívna (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis a Enterobacter aerogenes dávajú M: + I: - a O: +.

Referencie

1. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy na identifikáciu baktérií klinického významu. 3. vydanie. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentína.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentína.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. Editorial Panamericana SA Argentína.
4. Britannia Laboratories. MIO Medio 2015. Dostupné na: britanialab.com
5. Laboratóriá BD. BBL motility indol ornitín (MIO) médium. 2007. K dispozícii na: bd.com
6. Valtek Laboratories. Stredná MIO motilita, indol, ornitín. 2010. Dostupné na: andinamedica.com