KRVNÁ KULTÚRA: NA ČO SLÚŽI, ODÔVODNENIE, POSTUP, VÝSLEDKY - BIOLÓGIE - 2025

Kultivácia krvi je bakteriologické vyšetrenie, ktorá sa snaží detekovať prítomnosť mikroorganizmov v krvi. Krv je svojou povahou sterilnou tekutinou, a preto sa musí uchovávať vo fyziologických podmienkach, takže prítomnosť baktérií alebo húb v krvi je vždy patologická.

Ak sa v krvi nachádzajú baktérie alebo huby, ale množenie neprekročí odstránenie mikroorganizmov imunitným systémom, nazýva sa to bakterémia (pre baktérie) alebo fungémia (pre huby); Ak sa však počet mikroorganizmov nekontrolovateľne zvyšuje, nazýva sa septikémia.

Fľaše na kultiváciu krvi (žltá: detská aerobióza, zelená: aerobióza dospelých a červená: anaerobióza dospelých). Zdroj: fotografia zhotovená autorom MSc Marielsa Gil.

Bakterémia, fungémia a septikémia ohrozujú život pacienta, a preto sa musia okamžite liečiť. Preto, ak existuje podozrenie na infekciu v krvi, lekári požiadajú o štúdiu krvnej kultúry.

Táto bakteriologická analýza umožňuje zistiť, či existuje alebo nie je infekcia v krvi a ktorý mikroorganizmus je prítomný. Okrem toho, ak je pozitívny, vykoná sa test citlivosti, aby sa zistilo, ktoré antibiotikum alebo fungicíd by sa mohlo použiť pri liečbe.

Ak je na druhej strane krvná kultúra negatívna po 24 hodinách inkubácie, nemala by sa zlikvidovať, kým nie je negatívna po dobu 240 hodín. To zaisťuje, že neexistujú žiadne pomaly rastúce mikroorganizmy.

Aby bola krvná kultúra spoľahlivá, musia sa pri odbere vzorky prijať extrémne aseptické opatrenia a aby sa zvýšila spoľahlivosť a citlivosť testu, mali by sa odobrať najmenej dve vzorky počas alebo blízko vrcholu horúčky.

Načo to je?

Krv je sterilná tekutina a keď sa v nej nachádzajú mikroorganizmy, je to 100% patologické. Táto situácia predstavuje veľmi chúlostivý klinický obraz, ktorý ohrozuje život pacienta.

Krvná kultúra je dôležitý bakteriologický test, ktorý zisťuje prítomnosť mikroorganizmov v krvnom riečisku.

Mikroorganizmy sa môžu dostať do krvi rôznymi cestami, medzi ktoré môžu patriť extravaskulárne infekcie, ako sú napríklad pneumónia, intraabdominálne infekcie, pyelonefritída, závažné infekcie kože, mäkkých tkanív alebo artritídy.

Alebo to môže byť aj intravenózne, napríklad kontaminácia intravenóznych alebo arteriálnych katétrov, endokarditída, intravenózna drogová závislosť, podávanie kontaminovaných liekov alebo roztokov atď.

Na zaistenie prežitia pacienta je nevyhnutné včasné zistenie a liečba pôvodcu sepsy.

V tomto zmysle by mal lekár uviesť realizáciu krvnej kultúry, keď pozoruje príznaky a príznaky, ktoré spôsobujú podozrenie na septikémiu, ako napríklad: horúčka (vyššia ako 38 ° C) bez zjavného infekčného zamerania alebo naopak hypotermia (<de 36 ° C).

Ďalšími znakmi môžu byť: zimnica, zvýšením počtu bielych krviniek (> 10,000 buniek / mm ³ ), alebo významné zníženie v polymorfonukleárnych buniek (<1000 PMN / mm ³ ). Rovnako ako multiorgánové poškodenie alebo strata vitality, okrem iných varovných signálov.

Bakterémia môže byť konštantná, prechodná alebo prerušovaná. Toto je dôležité pri odbere vzorky, pretože je potrebné ju odobrať, keď existuje väčšia pravdepodobnosť zistenia cirkulácie mikroorganizmu.

Preto sa odporúča odobrať najmenej 2 vzorky na rôznych miestach. Ideálne je, že vzorka sa odoberá v horúčkových vrcholoch alebo v prípade, že pacient má triašku, extrémnu hypotermiu, potenie alebo tachykardiu.

Aby však bola krvná kultúra skutočne užitočným nástrojom, musí sa vzorka odobrať s mimoriadnou starostlivosťou. Nesprávna manipulácia alebo zlá asepsia pri odoberaní vzorky môžu spôsobiť neplatnosť testu, čo vedie k falošne pozitívnym výsledkom.

základ

Štúdia spočíva v aseptickom odobratí dvoch alebo troch vzoriek krvi a umiestnení do špeciálnych fliaš.

Špeciálne zariadenia na kultiváciu vzoriek krvi sa nazývajú fľaše na kultiváciu krvi. Sú rozdelené do:

Podľa veku pacienta

-Pediatrické použitie

-Pre dospelých.

Podľa typu mikroorganizmu

- Banky na aeróbne mikroorganizmy (aeróbne baktérie, fakultatívne baktérie a huby).

- Fľaše na kultiváciu krvi pre anaeróbne mikroorganizmy (prísne anaeróbne baktérie).

Niektoré obsahujú kvapalné kultivačné médium a iné obsahujú pevné a kvapalné kultivačné médium súčasne. Existujú tiež s časticami aktívneho uhlia.

proces

Odporúčania na odber vzoriek

- Vzorka, ktorú majú odobrať vysoko kvalifikovaní a vyškolení pracovníci v oblasti mikrobiológie.

- Asepsa alebo dôkladné vyčistenie miesta odberu vzoriek je nepochybne najdôležitejším krokom.

- Rovnako ako pri všetkých odberoch vzoriek musí zdravotnícky personál v priebehu procesu v plnej miere dodržiavať opatrenia biologickej bezpečnosti (okrem iného použitie rukavíc, plášťov, okuliarov).

- Dbajte na to, aby boli k dispozícii všetky potrebné pomôcky na odber vzoriek.

- Injekčné liekovky označte celým menom pacienta, dátumom, číslom lekárskeho záznamu, časom odobratia vzorky a laboratórnym poradovým číslom.

- Ideálne je odobrať vzorku skôr, ako pacient začne antimikrobiálnu liečbu. Uvádza sa to iba v prípade podozrenia na nefunkčnosť prebiehajúcej liečby. V takom prípade by sa vzorka mala odobrať pred zmenou liečiva pomocou fliaš na krvné kultúry s inhibítormi antibiotík (častice aktívneho uhlia).

- Musia sa odobrať najmenej 2 vzorky na rôznych anatomických miestach, ako je napríklad pravá a ľavá ruka. Pri podozrení na endokarditídu sa odporúčajú 3 vzorky. V každej vzorke budú dve fľaše (jedna pre aerobiózu a jedna pre anaerobiózu).

Množstvo vzorky

Množstvo vzorky sa líši v závislosti od veku pacienta, ale pomer 1: 5 až 1:10 by sa mal vždy udržiavať vzhľadom na riedenie vývaru krvi / kultúry.

U novorodencov je odporúčané množstvo vzorky 1 ml krvi na injekčnú liekovku. Používa sa detská fľaša.

V prípade detí od jedného mesiaca do jedného roka sa môže zvýšiť na 1,5 ml krvi na fľašu. Používa sa detská fľaša.

U detí starších ako 2 roky je vhodné množstvo vzorky 2,5 ml krvi na injekčnú liekovku. Používa sa detská fľaša.

Od dospievania sa môže zvýšiť na objem krvi medzi 5 - 10 ml v jednej fľaši. Používa sa fľaša pre dospelých.

Nakoniec v štádiu dospelého je potrebné množstvo 8 až 10 ml na fľašu. Používa sa fľaša pre dospelých.

Vzorkovanie

- Vzorka krvi môže byť žilová alebo arteriálna. Arteriálna krv sa však odoberá iba vtedy, keď nie je možné odber žíl.

- Neodporúča sa odoberať vzorku z centrálneho venózneho katétra, pokiaľ:

1. Nie je možné odobrať vzorku periférne (žilové alebo arteriálne).
2. Pacienti s rizikom krvácania.
3. Ak má lekár podozrenie na bakterémiu kvôli kontaminácii centrálneho venózneho katétra.
4. Keď sa horúčka znova objaví po horúčkovitom ukončení 4 až 5 dní, bez ohľadu na to, či je pacient na antimikrobiálnej liečbe.

Asepsa pred odberom vzoriek

- Vyberte anatomické miesta na odber vzoriek. Spravidla sa vyberajú žily najlepšieho kalibru (bazilická alebo cefalická žila).

- Podľa Centers for Disease Control (CDC) v Atlante (USA) by si mal operátor okrem odberu rukavíc aj pred odobratím vzoriek umyť ruky 2% chlórhexidínom alebo 10% povidón jódom.

-Palujte a vyhľadajte žilu, ktorá sa má použiť.

- Očistite oblasť vpichu rotačným spôsobom a pohyby od stredu smerom von pomocou mydlového chlórhexidínu alebo antiseptického mydla. Opláchnite sterilným soľným roztokom.

Následne naneste antiseptikum a nechajte ho pôsobiť. Príklad chlorhexidín-glukonát 0,5% po dobu 1 minúty alebo povidón jód 10% po dobu 2 minút. Pokiaľ ide o posledný uvedený prípad, najprv sa opýtajte, či je pacient alergický na jód. Ak ste alergický, môžete nahradiť 70% alkoholu.

Extrakcia vzorky

- Turniket umiestnite tak, aby sa zhoršil prietok krvi a pučala žila.

- Nedotýkajte sa miesta vpichu prstom. Ak je to nevyhnutne potrebné, prst sa má umyť rovnakým spôsobom ako oblasť vpichu.

-Vložte injekčnú ihlu alebo pokožku hlavy do žily a extrahujte potrebné množstvo krvi.

- Na ihlu nedávajte bavlnu ani gázu, ak nie je sterilná.

-Odstraňujte bezpečnostnú pečať z fliaš veľmi opatrne a bez toho, aby ste sa dotkli uzáveru. Niektorí autori odporúčajú vykonať dezinfekciu viečka pred naočkovaním vzorky.

- Rozdeľte príslušné množstvo krvi do injekčných liekoviek. Ak sa vzorka odoberie pomocou injektora, potrebné množstvo sa najskôr naleje do anaeróbnej banky a potom do aeróbnej banky. Ak sa odber vykonáva pomocou vlasovej pokožky (motýľa), naleje sa opačným spôsobom.

- Fľašu na kultiváciu krvi jemne premiešajte prevrátením.

- Vymeňte rukavice a zopakujte predchádzajúce kroky pre druhý odber vzorky.

- Ak je druhá vzorka odobratá z iného miesta, môže sa to urobiť okamžite, ale ak je z toho istého miesta, musíte počkať 30 až 90 minút medzi jednou vzorkou a druhou.

- Vzorka sa musí odobrať do laboratória čo najskôr, ak to nie je možné, musí sa ponechať pri izbovej teplote až 18 hodín.

Kultúra

Raz v laboratóriu sa banky inkubujú pri teplote 37 ° C v podmienkach každej banky, to znamená v aerobióze a anaerobióze.

Pri manuálnej metóde by malo byť zvonenie zahájené po 24 hodinách inkubácie a potom zvoniť medzi dňami. Krúžky sa vykonávajú nasledovne: najskôr sa dezinfikuje uzáver fľaše a vloží sa ihla sterilného injektora. Kvapalina sa extrahuje z banky a vyseje sa na krvný a čokoládový agar.

Ak dôjde k rastu, vykoná sa gram, subkultúry v špecifických médiách, biochemické testy a antibiogram.

Pri automatizovaných metódach zariadenie Bact / Alert vydá poplach, keď zistí, že liekovka je pozitívna. Rovnakým spôsobom by sa mal poklepať aj na krvný a čokoládový agar.

Ďalšou metódou, ktorá získava pôdu, je analýza banky po 6 hodinách inkubácie pomocou hmotnostnej spektrometrie. Táto metóda pomohla zvýšiť citlivosť a rýchlosť diagnostiky.

výsledok

Pokiaľ je fľaša na krvné kultúry negatívna, ošetrujúcemu lekárovi sa môžu podať predbežné priebežné správy. Správa naznačuje, že je negatívna v hodinách, keď bola inkubovaná. Napríklad, ak bude negatívny až do štvrtého dňa, bude hlásený nasledovne:

Predbežný výsledok: negatívna kultúra po 96 hodinách inkubácie.

Poznámka: Štúdia pokračuje 240 hodín.

Ak je krvná kultúra pozitívna, ošetrujúci lekár je o tom okamžite informovaný a pošle sa správa s najmenej gramom kolónie. Príklad:

Predbežný výsledok: v pozitívnej kultúre po 48 hodinách inkubácie boli pozorované gramnegatívne bacily a negatívna oxidáza. Prebieha identifikácia a testovanie citlivosti.

Táto informácia vedie ošetrujúceho lekára k začatiu empirickej terapie smerom k možnému mikroorganizmu, zatiaľ čo čaká na konečný výsledok laboratória.

Po ukončení bakteriologickej štúdie, to znamená, že bol identifikovaný mikroorganizmus a je k dispozícii antibiogram, by sa záverečná správa mala zaslať čo najskôr.

Osobitná pozornosť by sa mala venovať, ak je cieľovým mikroorganizmom Neisseria gonorrhoeae alebo Neisseria meningitidis, pretože tieto baktérie sú inhibované v prítomnosti vysokých koncentrácií polyanethosulfonátu sodného (SPS).

Preto by táto zlúčenina nemala prekročiť 0,025% vo fľašiach na kultiváciu krvi.

Na druhej strane, ak sa vzorka krvnej kultúry odoberie prvýkrát do skúmaviek Vacutainer, tieto skúmavky majú koncentrácie SPS toxické pre meningokoky a gonokoky, takže krv sa musí do 1 hodiny preniesť do systému na kultiváciu vývaru.

Ako zistiť, či je krvná kultúra pozitívna alebo kontaminovaná

Krvná kultúra sa považuje za kontaminovanú, ak rastie iba z jednej injekčnej liekovky s krvnou kultúrou z celkového počtu odobraných. A podozrenie na kontamináciu sa zvyšuje, ak je izolovaný mikroorganizmus zvyčajnou kožnou mikrobiotou: príklad: negatívny Staphylococcus coagulase, Propionibacterium spp.

U pacientov s oslabeným imunitným systémom by sa však nemal zanedbávať žiadny mikroorganizmus, ale v tomto prípade by sa mal mikroorganizmus objaviť vo viacerých vzorkách.

Na druhej strane, ak je citlivosť rovnakého mikroorganizmu izolovaného v dvoch rôznych vzorkách na antibiotiká rovnaká, infekcia je reálna.

Ďalšou charakteristikou je bakteriálna záťaž, pretože kontaminované krvné kultúry rastú neskoro, zatiaľ čo skutočné infekcie u neliečených pacientov sú spravidla pozitívne po 14 hodinách inkubácie, keď mikroorganizmus nie je obťažujúci.

Na druhej strane u pacientov liečených antimikrobiálnymi látkami môže tento mikroorganizmus trvať dlhšie, pretože záťaž je veľmi nízka.

Výskyt viac ako jedného mikroorganizmu môže naznačovať kontamináciu, ale ak sa rovnaký výsledok opakuje na viacerých záberoch z rôznych miest, potom je skutočný.

Referencie

1. "Krvná kultúra." Wikipedia, slobodná encyklopédia. 3. júla 2019, 17:28 UTC. 14 júl 2019, 19:05 en.wikipedia.org
2. Hervé B. Nové technológie v mikrobiologickej diagnostike: automatizácia a niektoré aplikácie v mikrobiálnej identifikácii a štúdii citlivosti. Med. Clin. Počíta. 2015; 26 (6) 753 - 763. K dispozícii na adrese: reader.elsevier.com
3. Villarroel P. Kapitola 20: Sepsa a riziko kardiovaskulárnych chorôb. Kardiovaskulárne zdravie. str. 187-194. K dispozícii na: fbbva.es
4. Sánchez R, Rincón B, Cortés C, Fernández E, Peña S, Heras EM Krvné kultúry: Čo ste povedali a čo robíte? chorý glob. 2012; 11 (26): 146-163. K dispozícii na: scielo.isc
5. Pardinas-Llergo M, Alarcón-Sotelo A, Ramírez-Angulo C, Rodríguez-Weber F, Díaz-Greene E. Pravdepodobnosť úspechu získania pozitívnej krvnej kultúry. Med. Interna Mex. 2017; 33 (1): 28-40. K dispozícii na: scielo.org