VÝŽIVNÝ AGAR: ODÔVODNENIE, PRÍPRAVA A POUŽITIE - BIOLÓGIE - 2026

Živný agar je neselektívny médium a žiadny rozdiel pevné kultúre. V tomto médiu rastú všetky druhy baktérií, ktoré nie sú náročné na výživu.

Je to jednoduché médium a napriek svojmu názvu obsahuje nižšiu nutričnú hodnotu v porovnaní s inými podobnými médiami, ako je agar s infúziou srdca alebo tryptický sójový agar.

Kolónie sa počítajú na živný agar

Jeho užitočnosť v laboratóriu je veľmi rôznorodá. Používa sa okrem iného na subkultiváciu druhov, udržiavanie kmeňov, počítanie kolónií, ako základ na prípravu krvného agaru.

Podobne sa dá vďaka svojej svetlo béžovej farbe výnimočne rozlíšiť výroba pigmentov vytvorených niektorými bakteriálnymi kmeňmi, ako je napríklad zelenkavý pigment Pseudomonas aeruginosa, tehlový červený pigment produkovaný Serratia marcescens pri izbovej teplote, zlatožltý pigment Staphylococcus. aureus, medzi ostatnými.

Okrem toho je to jedno z najlacnejších rastúcich médií na trhu.

základ

Ako už bolo uvedené vyššie, je to veľmi jednoduché médium, ktoré sa pri interpretácii spolieha na poskytnutie živín pre bakteriálny rast bez obmedzenia a bez komplexných reakcií.

Pretože médium je priesvitné, je ideálne na počítanie kolónií metódou očkovania do hĺbky.

zloženie

Skladá sa hlavne z mäsového extraktu alebo kvasnicového extraktu, peptonov alebo želatínového pankreasu, agaru, chloridu sodného a destilovanej vody.

Mäsový alebo kvasnicový extrakt a melóny predstavujú základné zdroje uhlíka a minerálov (dusík, fosfor a síra), ktoré budú baktérie používať ako zdroj energie a rastové faktory.

Podobne agar-agar je základom všetkých tuhých kultivačných médií, ktorý nahradzuje želatínu, ktorá bola prvou zlúčeninou bázy, ktorú použil Robert Koch, aby poskytol pevné prostredie jeho médiu.

Agar je polysacharid zložený z galaktózy, galaktomananu, agarózy a agaropektínu. Nastaví sa na 40 ° C a topí sa takmer pri 100 ° C.

Chlorid sodný poskytuje médiu osmolaritu potrebnú pre vývoj baktérií.

Nakoniec voda slúži na hydratáciu a rozpustenie lyofilizovaných zlúčenín. Mala by sa použiť destilovaná voda upravená na neutrálne pH. Voda z vodovodu by sa nemala používať, pretože obsahuje vápnik a horčík, ktoré môžu reagovať s fosfátmi v médiu a tvoria nerozpustné soli.

príprava

Na jeden liter živného agaru sa musí odvážiť 31 g dehydratovaného média. Vložte ju do banky a rozpustite v litri destilovanej vody. Po 5 minútach státia zohrejte na zdroj tepla a miešajte nepretržite až do varu po dobu 1 alebo 2 minút.

Príprava kultivačného média.

Banka sa potom umiestni do autoklávu a sterilizuje sa pri 121 ° C na 20 minút.

Sterilizácia v autokláve

Na konci času sa vyberie z autoklávu a podáva sa v sterilných Petriho miskách s použitím digestora s laminárnym prúdením alebo Bunsenovho horáka.

Ak sú Petriho misky jednorazové (plastové), musí sa médium distribuovať, keď má agar teplotu približne 50 ° C, aby sa zabránilo ich deformácii nadmerným teplom.

Nechajte stuhnúť a skladovať na obrátenom držiaku doštičiek a až do použitia uchovávať v chladničke pri 2-8 ° C.

Doštičky sa musia pred nasadením temperovať. Platne s výživovým agarom by sa nemali používať, ak sú kontaminované alebo dehydrované.

PH pripraveného média sa musí upraviť na 7,3 ± 0,2.

aplikácia

Je to najjednoduchšie kultivačné médium používané v mikrobiologickom laboratóriu. Jeho zloženie je vynikajúce pre rast nenáročných baktérií.

Jeho hlavné použitia sú vysvetlené nižšie:

Ako základ na prípravu krvného agaru

Toto médium sa niekedy používa ako základ na prípravu krvného agaru, nie je to však najbežnejšie používaná báza.

Stimulujte sporuláciu spórotvorných baktérií

Toto kultivačné médium je zvlášť užitočné na stimuláciu sporulácie baktérií tvoriacich spóry, ako je napríklad Bacillus sp.

Za týmto účelom sa kmeň z rodu Bacillus vyseje a inkubuje sa počas 24 hodín pri aerobióze pri 37 ° C. Akonáhle kolónie rastú, doska sa vystaví teplotnému stresu, to znamená, že sa teplota v peci zvýši na 44 ° C a nechá sa pôsobiť ďalších 24 hodín alebo sa umiestni do chladničky na dobu 24 hodín.

Na konci času sa vytvoria škvrny kultúry a zafarbia sa Gramovým farbením alebo farbením spór Shaeffer-Fulton. V nich sa budú pozorovať bacily s endosporami (spory vo vnútri bacilov) a exospory (spory mimo bacilov).

Údržba kmeňa

Niektoré výskumné alebo univerzitné podporné laboratóriá pre výučbu vyžadujú udržanie životaschopných baktérií klinického významu tak dlho, ako je to možné, aby sa banka baktérií (bakterioteca) použila na výskumnú prácu alebo na prípravu vyučovacích postupov, ak Študenti sa naučia manipulovať a identifikovať tieto mikroorganizmy.

Na tento účel sa môže použiť živný agar, ako aj infúzny agar mozgu a srdca. Agar sa pripraví, naleje do skúmaviek s viečkom z bakelitu a nakloní sa na základni tak, aby agar stuhol a vytvoril blok na dne a skosenie na povrchu (zobák z flauty).

Každá skúmavka je označená názvom baktérie, ktorá sa má naočkovať, a dátumom. Každá z baktérií sa naočkuje na skosenie a inkubuje sa 24 hodín.Akonáhle kolónie rastú, skúmavky sa skladujú pri teplote miestnosti.

Bakterioteca sa musí obnovovať od 1 do 3 mesiacov, aby sa predišlo kontaminácii a dehydratácii média, ako aj smrti baktérií.

Týmto spôsobom je možné udržiavať iba nelúpavé baktérie.

Počet kolónií

Aj keď existujú špecializované prostriedky na počítanie kolónií, ako je napríklad agar so štandardným počtom, na tento účel sa môže použiť živný agar, buď očkovaním povrchu špachtľou drigalski alebo hĺbkou. Z tohto dôvodu je veľmi užitočný pri mikrobiologickej analýze potravín a vody.

Vykonávanie diagnostických testov

Pretože je to médium, ktoré neobsahuje krv alebo iné prísady, je ideálne robiť kolónie pestované na tomto médiu na vykonanie katalázového testu.

Podobne je vzhľadom na svoju svetlú farbu indikované, aby sa testy oxidázy uskutočňovali priamo na oblasti očkovaného agaru bez rušenia.

Regenerácia mezofilných aeróbov z rekreačných slaných vôd (pláže)

Živný agar pripravený z 10% morskej vody je užitočný na hodnotenie mezofilných aeróbov v plážových vodách.

Týmto spôsobom je možné oceniť skutočnú úroveň kontaminácie vôd týmito mikroorganizmami, pretože pri použití tohto typu vzoriek sa výsledky pri použití konvenčných kultivačných médií prekrývajú.

Toto bolo demonštrované Cortezom a kol. v roku 2013 vo výskumnej práci.

Dá sa to vysvetliť náhlymi zmenami, ktorým prechádzajú baktérie pri prechode z hypersaltačného prostredia do prostredia s nízkym obsahom solí, preto mikroorganizmy vstúpia do stavu letargie, v ktorej sú životaschopné, ale nie kultivovateľné.

Referencie

1. "Výživný agar." Wikipedia, slobodná encyklopédia. 13. sep 2016, 20:33 UTC. 29. decembra 2018, 21:04 en.wikipedia.org
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey a Scott Mikrobiologická diagnostika. 12 ed. Argentína. Editorial Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. (5. vydanie). Argentina, Editorial Panamericana SA
4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Vplyv kultivačných médií pripravených s morskou vodou na zdravotné ukazovatele v morských vodách kúpeľov v Chichiriviche, štát Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M a Cardoso M. Mikrobiologická kvalita vody na inseminačné dávky, pre ošípané. Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktická klinická mikrobiológia. University of Cadiz, 2. vydanie. UCA Publications Service.