Rose Bengal je laboratórny test založený na reakcii antigén-protilátka na diagnostiku brucelózy. Táto technika umožňuje detekciu špecifických protilátok proti baktérii Brucella abortus vo vzorkách ľudského séra. Výsledok sa môže uviesť kvalitatívne alebo semikvantitatívne.
Kvalitatívna forma vyjadruje, či je pacient pozitívny alebo negatívny pre test, to znamená, či existujú protilátky alebo nie. Medzitým sa semikvantitatívna správa uvádza v IU / ml a označuje približné množstvo prítomných protilátok. Malo by sa poznamenať, že protilátky sa budú vyrábať iba vtedy, ak je pacient v kontakte s mikroorganizmom.
Rose Bengálska reakcia na aglutinačnej platni. Zdroj: prevzaté z videa https://youtu.be/igAVQ-GiyGY
Vďaka svojej veľkej jednoduchosti, vysokej citlivosti a špecifickosti je to jedna zo séroaglutinačných techník, ktoré sa v medicíne najviac používajú ako počiatočný test na diagnostiku tohto ochorenia.
Niektorí vedci porovnali účinnosť testu Rose Bengal s inými technikami, ako je seroaglutinácia (febrilné antigény) a zistili, že hoci existuje dobrá korelácia, videli izolované prípady, v ktorých bol test febrilného antigénu negatívny a Rose de Pozitívne svetlice.
Získaný rozdiel bol spôsobený skutočnosťou, že títo pacienti mali podtriedu IgG protilátok proti Brucella abortus s lepšou väzobnou kapacitou pri kyslom pH, takže mohli reagovať s činidlom Rose Bengal, ale nie s horúčkovitými antigénmi.
V tomto zmysle navrhli, aby sa činidlá febrilného antigénového postupu modifikovali na kyslé pH, aby mohli detekovať tento typ prípadu.
základ
Činidlo Rose Bengal pozostáva z antigénnej suspenzie. Skladá sa z kmeňa S99 Brucella abortus zriedeného v kyslom laktátovom tlmivom roztoku (pH 3,6), plus fenolu a farbiva Rose Bengal.
Preto vo vzorke, ktorá sa požaduje, sú anti-Brucellové protilátky, ak sú prítomné, budú reagovať s antigénom činidla a bude pozorovaná makroskopicky viditeľná aglutinačná reakcia. Test deteguje protilátky IgM alebo IgG.
To znamená, že môže detegovať ochorenie v jeho akútnom štádiu, kde prevažujú protilátky IgM, alebo v jeho chronickom štádiu, v ktorom prevažujú protilátky IgG.
Toto predstavuje výhodu, pretože zvyšuje citlivosť testu, ale zároveň je to nevýhoda, pretože nediskriminuje medzi jedným stupňom a druhým, pretože reakcia s protilátkami IgM a IgG je identická.
Skúška sa musí vždy vykonať spolu s negatívnou kontrolou a pozitívnou kontrolou. Negatívna kontrola obsahuje živočíšne sérum bez protilátok a pozitívna kontrola obsahuje sérum živočíšneho pôvodu s 50 IU / ml anti-Brucella protilátok.
použitie
Brucelóza je závažné ochorenie, ktoré má tendenciu byť chronické a nebezpečné, a preto je veľmi dôležité, aby bola diagnostikovaná včas. Je to zoonóza a ľudia sa môžu nakaziť priamym kontaktom s kontaminovaným materiálom, pričom najzraniteľnejšími ľuďmi sú veterinári a správcovia zvierat.
K infekcii môže dôjsť aj konzumáciou infikovaného surového mäsa, medzi inými formami infekcie.
Toto ochorenie útočí lokálne alebo systémovo. Systémová forma je najzávažnejšia, pretože môžu byť postihnuté rôzne orgány vrátane endoteliálneho systému retikula (pečeň, slezina, kostná dreň), kože (celulitída a lymfadenopatia), dýchacích ciest (zápal pľúc), muskuloskeletálneho systému (artritída, sakroiliitída a spondylitída).
Test Rose Bengal je veľmi užitočná technika na vykonanie úvodného skríningu, pretože je veľmi lacný, ľahko použiteľný a má veľkú špecifickosť a citlivosť.
Prípady falošných negatív a falošne pozitívnych výsledkov sú veľmi zriedkavé a môžu sa vyskytnúť u ľudí s veľmi nízkym titrom protilátok (<25 IU / ml) alebo extrémne vysokých (> 1 000 IU / ml).
proces
materiály
-Vyberte bengálsku súpravu
-Alutinačný tanier na bielom pozadí
-50 ul pipeta
-Rotátor (voliteľné)
-Vortex
Technika (kvalitatívna metóda)
Komerčné súpravy Rose Bengal sú dodávané s reagenciami pripravenými na použitie.
- Reagencie pred začatím práce rozotrite.
- Aglutinačné doštičky majú nakreslené krúžky, každý pre inú vzorku. Použite 3 kruhy, prvý pre negatívnu kontrolu, druhý pre vzorku a tretí pre pozitívnu kontrolu.
- Vložte kvapku alebo 50 µl kontrol a vzorky do príslušného kruhu.
- Zmiešajte reagenciu Rose Bengal pomocou víru. Položte kvapku vedľa predtým umiestnených.
- Zmiešajte s drevenými špáradlami (použite jednu pre každú vzorku alebo kontrolu). Urobte kruhové pohyby a roztiahnite sa tak, aby ste pokryli celý kruh.
Zdroj: obrázky získané z videa: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Upravené rozloženie obrázka.
- Vložte platňu na automatický rotátor pri rýchlosti 80 až 100 ot./min. Alebo ručne otáčajte 4 minúty. Na konci tejto doby si prečítajte dôkaz.
- Overte, či boli kontroly poskytnuté podľa očakávania. Porovnajte reakciu testovanej vzorky s kontrolami. Ak je pozorovaná aglutinácia, uveďte ju ako pozitívnu a ako negatívnu, ak nedochádza k aglutinácii.
Pozitívny test ukazuje, že pacient má množstvo rovnajúce sa alebo vyššie ako 25 IU / ml anti-Brucellových protilátok.
Interpretácia pozitívnej (s aglutináciou) a negatívnej (bez aglutinácie) reakcie. Zdroj: Citrulline. Upravený obrázok.
Technika (semikvantitatívna)
Ak je pri kvalitatívnej reakcii vzorka silne pozitívna, môže byť semikvantifikovaná. Na tento účel sa sériové dvojnásobné riedenia vzorky pripravia fyziologickým roztokom. Vyššie opísaný postup sa uskutočňuje s každým riedením.
Interpretuje sa aj makroskopickým pozorovaním aglutinácie. Výsledkom bude titer najvyššieho riedenia, pri ktorom bol pozorovaný pozitívny výsledok.
Na výpočet približnej hodnoty protilátok proti Brucelle sa používa tento vzorec:
25 IU / ml x reakčný titer = IU / ml
Napríklad, ak je pacient v semikvantitatívnych testoch pozitívny pri riedení ½, ¼ a 1/8 a začína byť negatívny od riedenia 1/16, znamená to, že pacient má titer 8 ,
Použitie vzorca:
25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml
QA
- Súpravy majú dátum exspirácie a musí sa rešpektovať. Nemal by sa používať, ak platnosť činidla uplynula.
- Počas používania sa uistite, že činidlo neobsahuje pevné častice, pretože to je známka zhoršenia kvality.
-Keepujte medzi 2 a 8 ° C
- Ak nemrznete, tento úkon nenapraviteľne poškodí činidlo.
-Vždy vykonajte test spolu s negatívnymi a pozitívnymi kontrolami.
- Technika toleruje vzorky séra s určitým stupňom lipémie a hemolýzy, neodporúča sa však používať nadmerne lipemické a hemolyzované séra, pričom obe podmienky menia výsledky testu.
- Reagencie pred začiatkom analýzy vždy zohrejte na izbovú teplotu.
- Nevykladajte reakcie, ktoré trvajú dlhšie ako odporúčaný čas, pretože to vytvára správu o falošne pozitívnych výsledkoch, pretože po určitom čase sa zrazenina činidla zráža a simuluje pozitívnu reakciu.
- Technika je 100% citlivá a má špecifickosť 98%.
- Po semikvantifikácii 1 000 IU / ml je možné pozorovať prozónový efekt (falošne negatívny kvôli prebytku protilátky v porovnaní s množstvom antigénov).
Referencie
- Rubio M, Barrio B a Díaz R. Hodnota testov Rosa de Bengala, Coombs a counter-imunoelektroforéza na diagnostikovanie prípadov brucelózy u ľudí, u ktorých je negatívna sérová aglutinácia. Oddelenie mikrobiológie. Klinická mikrobiologická služba. Univerzitná klinika. Univerzita v Navarre. 406-407. K dispozícii na: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
- "Brucelóza." Wikipedia, slobodná encyklopédia. 6. decembra 2019, 14:37 UTC. 18. decembra 2019, 18:09 en.wikipedia.org.
- Monlab Laboratories. Monlab Bengal Rose - test. 2016.K dispozícii na: monlab.es/
- Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. Peru. Med. Exp. Verejné zdravie 1997; 14 (1): 63-66. K dispozícii na: scielo.org
- Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Klinické, sérologické a polymerázové reťazové reakcie rodiny s brucelózou. Chil. Infectol. 2014; 31 (4): 425 - 433. K dispozícii na: scielo.conicyt.