KRÍŽOVÉ TESTY: NA ČO SLÚŽIA, TECHNIKA, ZDÔVODNENIE, FÁZY - LIEK

Krížová skúška rad laboratórne štúdie sa vykonávajú za účelom zistenia, či krvné produkty od darcu (prevažne celej krvi a balené guľové) sú kompatibilné s krvou príjemcu.

Je to ďalší doplnkový test kompatibility ABO a faktora Rh. Dôvodom krížového párovania je to, že niekedy môžu mať dve osoby (darca-príjemca) rovnakú skupinu ABO a Rh, ale ich krv je stále nekompatibilná.

Zdroj: unsplash.com

Takáto nekompatibilita je spôsobená prítomnosťou protilátok proti sérii proteínov červených krviniek známych ako menšie antigény. Tieto antigény nie sú rutinne testované, pretože sú určené pre krvné skupiny (ABO) a Rh faktor.

Dôvodom je skutočnosť, že menšie antigény sú omnoho menej časté a majú variabilnú expresiu u každého jednotlivca, preto je prakticky nemožné ich zoskupiť do kategórií, ako je to v prípade skupiny a faktora Rh.

Namiesto toho sa červené krvinky darcu zmiešajú so sérom pacienta (test veľkej zhody) a červené krvinky pacienta so sérom darcu (test menšej zhody) na detekciu prítomnosti reakcií antigén-protilátka.

Ak existujú protilátky proti minoritným antigénom, buď v sére pacienta alebo darcu, test sa považuje za pozitívny, takže vo väčšine prípadov nie je možné transfúziu konkrétnej jednotky krvi.

Skupina ABO

Na úplné pochopenie toho, o ktorých krížových reakciách ide, musíte najskôr poznať základy krvných skupín.

V tomto zmysle je najdôležitejšie vedieť, že krv možno rozdeliť do štyroch skupín: A, B, AB a O.

Každá z týchto skupín exprimuje na povrchu červených krviniek konkrétny proteín (antigén), ktorý je protilátkami potenciálneho receptora inej skupiny identifikovaný ako cudzí prvok.

Najvýraznejšou vecou pri reakciách antigén-protilátka pri porovnávaní krvi je, že na existenciu protilátok nie je potrebná žiadna predchádzajúca expozícia antigénu. Toto je známe ako prírodné protilátky.

Prírodné protilátky

Všeobecne, aby protilátky existovali v tele jednotlivca, je nevyhnutné, aby boli biele krvinky jednotlivca predtým vystavené antigénu.

To znamená, že pri prvom kontakte medzi cudzím antigénom a organizmom neexistujú žiadne protilátky, pretože sa generujú neskôr, po počiatočnom kontakte. Preto nie je možné, aby imunitný systém mal protilátky proti napríklad konkrétnemu vírusu, ak mu nebol v minulosti vystavený.

Jedinou výnimkou z vyššie uvedeného sú anti-AB antigény. V týchto prípadoch má osoba protilátky proti antigénu, ktoré jej červené krvinky nemajú, aj keď nikdy neboli v kontakte s červenými krvinkami inej osoby. Toto je známe ako prírodné protilátky.

Antigény a protilátky súvisiace s krvnými skupinami

Krvné skupiny sa v prípade systému ABO určujú prítomnosťou špecifických antigénov (A alebo B) na membráne červených krviniek a naopak protilátkami proti neprítomnému antigénu na membráne erytrocytov.

Osoba s krvnou skupinou A teda exprimuje antigén A na povrchu svojich červených krviniek, zatiaľ čo v sére sú protilátky anti-B.

Naopak, u pacientov skupiny B sa nájde antigén B, zatiaľ čo protilátky sú anti-A.

Pacienti s krvou AB však majú antigény A aj B. Preto neexistujú žiadne protilátky, pretože by sa tým zničili červené krvinky tejto osoby.

Práve naopak sa vyskytuje v skupine O, kde membrána erytrocytov neobsahuje žiaden z dvoch antigénov (ani A ani B), zatiaľ čo v sére sú protilátky anti-A a anti-B.

Nezlučiteľnosť so skupinou ABO

Z vyššie uvedeného je možné ľahko odvodiť kompatibilitu krvných skupín ABO, pretože poznaním antigénu membrány erytrocytov sú protilátky v sére automaticky známe. Takže:

- Krv A je kompatibilná so skupinou A a skupinou O.

- Krvná skupina B je kompatibilná s krvou B a O.

- Ľudia zo skupiny O môžu prijímať iba krv O (pretože majú protilátky anti-A a anti-B), hoci ich krv je bez problémov prijímaná všetkými ostatnými skupinami, pretože nemá antigény.

- Nakoniec. tí, ktorí majú krvnú skupinu AB, môžu dostávať krv zo všetkých ostatných skupín (A, B, O a samozrejme AB), pretože nemajú protilátky proti žiadnemu z antigénov. Krv AB však môžu prijímať iba ľudia v skupine AB, pretože všetky ostatné skupiny majú protilátky, ktoré tieto červené krvinky ničia.

Menšie antigény

Rovnako ako v prípade skupín ABO sa na povrchu erytrocytov, ktoré fungujú ako antigény rovnakým spôsobom ako antigény skupiny ABO, dá nájsť celý rad proteínov.

Tieto antigény však nie sú prítomné u všetkých jednotlivcov. Ich kombinácia je heterogénna a penetrácia (úroveň proteínovej expresie) je variabilná, preto nie je možné klasifikovať do skupín, ako je tá, ktorá existuje pre ABO a Rh. Odtiaľ odvodzuje svoj názov od „menších antigénov“, známych tiež ako „antigény s nízkym výskytom“.

Aj keď nie sú časté, môžu existovať prírodné protilátky proti malým antigénom. Medzi nimi najbežnejšie patria Lewis, MNS, anti N, Kell, Duffy, anti Fyb a Kidd. Všetky sú zodpovedné za veľmi vážne hemolytické a post-transfúzne reakcie.

Okrem toho môže dôjsť k senzibilizácii na menšie antigény predchádzajúcim kontaktom, buď s uvedenými antigénnymi proteínmi v dôsledku predchádzajúcich transfúzií alebo v dôsledku skríženej imunity.

Krížová imunita

Hovorí sa, že existuje krížová imunita, keď sú dva antigény z dvoch rôznych zdrojov (napríklad z červených krviniek a baktérií) veľmi podobné, takže protilátky proti jednému z týchto antigénnych proteínov tiež reagujú s ostatnými, pretože sú takmer totožné ,

Aby ste to lepšie pochopili, vezmite predchádzajúci hypotetický príklad (antigény z červených krviniek a baktérií). V žiadnom prípade neexistujú prírodné protilátky, ale ak je osoba vystavená baktériám, vytvorí proti nej protilátky.

Takéto protilátky budú neskôr reagovať proti červeným krvinkám, ak sú jej antigény veľmi podobné antigénom baktérií, ktoré spôsobili tvorbu protilátok.

Ak sa to stane, červené krvinky s týmto konkrétnym antigénnym proteínom nemôžu byť podané osobe, ktorá má protilátky, pretože by to bolo odmietnutie. V tomto spočíva význam krížových reakcií.

Čo je krížové párovanie?

Pretože nie je možné zoskupiť krv rôznych jedincov na základe menších antigénov, jediný spôsob, ako zistiť, či existujú protilátky proti menším antigénom červených krviniek inej osoby v krvi jednej osoby, je skrížené kríženie. ,

V prípadoch, keď sú prítomné protilátky, sa vyvolá hemolytická alebo aglutinačná reakcia, a preto sa dospelo k záveru, že reakcia bola pozitívna; to znamená, že existujú protilátky proti minoritným antigénom (hoci nie je presne známe, ktorý z nich). Inak je test negatívny.

základ

Krížové zhody sú založené na reakcii antigén-protilátka. Preto s nimi je možné zistiť, či v sére príjemcu existujú protilátky proti antigénom červených krviniek darcu (alebo naopak), čo vyvoláva reakciu antigén-protilátka.

Ak nie sú prítomné žiadne protilátky, nevyskytne sa žiadna reakcia a test sa zaznamená ako negatívny. Naopak, ak je reakcia pozitívna (počas testu dôjde k hemolýze alebo aglutinácii), možno dospieť k záveru, že sú prítomné protilátky.

V tejto súvislosti je dôležité poznamenať, že môžu existovať protilátky proti erytrocytom v darcovom aj recipientnom sére. Preto existujú dva typy krížových reakcií.

Druhy krížových reakcií

V sére pacienta môžu existovať protilátky proti darcovským erytrocytom; môže sa však vyskytnúť opak, to znamená, že protilátky v darcovom sére proti erytrocytom pacienta.

Z tohto dôvodu existujú dva typy krížovej zhody:

- Veľký krížový kríž.

- Menší krížový kríž.

Oba typy sa rutinne vykonávajú v krvnej banke pred transfúziou krvných produktov, pretože ak sú niektoré z testov pozitívne, existuje vysoké riziko transfúznych reakcií, ktoré môžu ohroziť život pacienta.

Veľký krížový kríž

Tento test hodnotí, či sérum príjemcu obsahuje protilátky proti erytrocytom darcu.

Ak k tomu dôjde, krvné produkty sa nemôžu podať, pretože veľké množstvo protilátok prítomných v plazme pacienta veľmi rýchlo ničí červené krvinky darcu a v tomto procese spôsobuje katastrofické reakcie v tele príjemcu. Tieto reakcie sú také závažné, že môžu ohrozovať život.

Menší krížový kríž

V tomto prípade sa stanoví, či v darcovom sére existujú protilátky proti erytrocytom príjemcu.

Ak áno, protilátky začnú ničiť erytrocyty príjemcu. Avšak vzhľadom na to, že množstvo protilátok je obmedzené, je reakcia menej intenzívna; hoci je to stále nebezpečné.

fázy

Hlavný aj malý krížový kríž sú rozdelené do troch fáz:

- Saline.

- Tepelné alebo inkubačné.

- Coombs.

V prvej fáze sa červené krvinky a sérum zmiešajú v soľnom roztoku. Následne sa pridá albumín a vzorka sa inkubuje pri 37 ° C počas 30 minút, aby sa nakoniec pokračovalo vo fáze coombs.

technika

Technika krížového kríženia je pomerne jednoduchá, pretože zahŕňa pridanie červených krviniek darcu do séra pacienta (hlavný krížový kríž), ako aj prijímajúce erytrocyty do séra darcu (malý krížový kríž).

Aby sa vyvolala reakcia antigén-protilátka v relatívne krátkom čase, musí sa vykonať rad štandardizovaných krokov. Tieto kroky sú zhrnuté zjednodušeným spôsobom nižšie.

Je dôležité si uvedomiť, že v nasledujúcej časti je opísaný hlavný test kompatibility, hoci kroky sú rovnaké pre test menšej kompatibility, ale výmena pôvodu červených krviniek a séra.

Soľná fáza

- Pridajte do skúmavky 2 kvapky séra od príjemcu (od darcu, ak ide o vedľajší krížový test).

- Odoberte vzorku červených krviniek od darcu (od príjemcu, ak ide o vedľajší krížový kríž).

- Červené krvinky umyte a odstreďte.

- Resuspendujte v roztoku medzi 3% a 5%.

- Vložte kvapku tohto roztoku do skúmavky obsahujúcej sérum príjemcu.

- Opatrne premiešajte.

- Odstredivka.

- Prečítajte si výsledok na displeji.

Tepelná fáza

- Pridajte 2 kvapky 22% albumínu do skúmavky, kde bola ukončená soľná fáza.

- Inkubujte 30 minút pri 37 ° C.

- Odstreďujte 15 sekúnd.

- Prečítajte si výsledok na displeji.

Coombsova fáza

- Vyberte bunky z skúmavky a umyte ich soľným roztokom.

- Odstráňte supernatant.

- Pridajte dve kvapky Coombsovho činidla.