ORCEIN: ZALOŽENIE A PRÍPRAVA - CHÉMIA - 2025

Orceínu je v prírodnej farbe fialovej, extrahuje z rôznych lišajníkov ako orchilla alebo archill, fruticosi lišajník Rocella tinctoria a Lecanora Parelli hlavne. Tinctoria Rocella sa nachádza na africkom a americkom kontinente, hoci ju možno nahradiť inými druhmi nachádzajúcimi sa v Európe.

Toto zafarbenie sa od staroveku často používa v cytogenetických štúdiách. V tomto zmysle bol prípravok orceínu, ktorý obsahuje kyselinu octovú, zavedený LaCourtom v roku 1941, a preto sa pôvodne nazýval LaCourtovou technikou.

Chemická štruktúra roztoku orceínu a roztoku orceínu. Zdroj: Wikipedia.org/ Oguenther na de.wikipedia (Dr. Guenther)

Podobne sa vďaka svojej jednoduchosti a nízkym nákladom používa na výrobu lakmusu (škvrna extrahovaná z lišajníkov) a v histologických štúdiách (farbenie buniek a tkanív).

Niekoľko štúdií použilo toto zafarbenie kombinované s inými chemikáliami, ako je mikrokarbonát amoniaku a kyselina octová, na zafarbenie elastických vlákien a chromozómov. V súčasnosti sa orceín naďalej používa v cytogenetických štúdiách na zvieratách a rastlinách.

Silva a kol. 2017 úspešne využil túto škvrnu na pozorovanie rôznych zmien, ktoré sa vyskytujú v elastických vláknach palca na palci starších čílskych dospelých. Táto štúdia odhalila, ako sa vlákna palca menia so starnutím.

V tomto zmysle sa zistilo, že elastické vlákna majú hnedasto-čiernu farbu u osôb starších ako 80 rokov; zatiaľ čo v najmladšom veku (od 60 rokov) sa javia ako červenkastohnedé. Cytoplazma a ďalšie bunkové štruktúry sú žltkasto-zelené.

To umožnilo potvrdiť prítomnosť a stav elastických vlákien z hľadiska ich dispozície, množstva a integrity. Na druhej strane sa tiež zistilo, že orceín je okrem iných podmienok veľkou pomocou pri identifikácii aneuryzmy a diagnostike arteritídy.

základ

Orceín je súčasťou oxazínovej skupiny farbív a zafarbenie je založené na jeho afinite k DNA. Farbivo sa viaže na záporný náboj tejto molekuly predstavovaný fosfátovou skupinou. Preto sú chromozómy zafarbené fialovo.

Ostatné štruktúry buniek však nadobúdajú inú farbu. Konkrétne v prípade elastických vlákien sú sfarbené červenkasto hnedé bunkové jadrá od modrej po tmavofialovú, zatiaľ čo kolagén sa nezafarbí.

Z tohto dôvodu sa orceín používa na farbenie chromatínu a diferenciáciu pohlavia niektorých druhov múch. Podobne sa môžu zafarbiť jadrá a niektoré inklúzie pečene produkované antigénmi hepatitídy B.

Roztoky orceínu majú pri farbení špecifické funkcie. Orceín A má funkciu zmäkčovania bunkových membrán, spôsobuje ich smrť a ochromuje proces ich delenia. Medzitým je orceín B zodpovedný za dokončenie zafarbenia adhéziou na chromozómy.

príprava

Aceto-orceínový roztok 1%

Na prípravu 1% roztoku aceto-orceínu sa 2 g orceínu rozpustia v 45 ml ľadovej kyseliny octovej, výhodne horúcej, a pri teplote miestnosti sa pridá 55 ml destilovanej vody.

Potom sa neustále mieša, aby sa roztok homogenizoval, aby sa neskôr nechal odpočívať, až kým nevychladne. Nakoniec sa uchováva pri 4 ° C v tmavých nádobách. Tento prípravok použil program Flores 2012 na pozorovanie fáz dozrievania kravských oocytov.

V tomto prípade sa napríklad roztok aceto-orceínu umiestni na tkanivo vopred fixované v kyseline octovej v etanole na 24 hodín. Tento proces farbenia sa uskutočňuje počas 30 minút a tkanivo sa následne sfarbí.

Rovnako sa môže použiť na identifikáciu organel vo viacbunkových tkanivách. V tomto prípade sa náter bukálnej sliznice zafarbí kvapkou roztoku aceto-orceínu, krycí sklíčko sa umiestni na podložné sklíčko a okamžite sa pozoruje jadro bunky so subštruktúrami.

Lacto-proponický roztok orceín 1%

Ďalej sa orceín môže pripraviť s inými chemikáliami, ako je kyselina mliečna a kyselina propiónová. Za týmto účelom sa jeden gram orceínu rozpustí v premixovanom roztoku pri teplote miestnosti 23 ml kyseliny mliečnej a 23 ml kyseliny propiónovej; doplňte objem destilovanou vodou na 100 ml.

S týmto lakto-propiónovým roztokom orceínu je možné pozorovať rôzne fázy meiotického delenia rastlinných buniek. V tomto prípade je vopred fixovaná a hydrolyzovaná vzorka umiestnená na 15 minút do lakto-propionického roztoku orceínu a potom je tkanivo nanesené na mikroskopické sklíčka.

V Duqueovej štúdii o polygénnych chromozómoch z roku 2016 použil prípravok 2 gramov orceínu zriedeného v kyseline octovej a 85% kyseliny mliečnej, zriedený 65% roztokom kyseliny octovej. Nakoniec sa pozrel na chromozómy v slinných žľazách Drosophila melanogaster.

Orcein A a Orcein B

Je dôležité si uvedomiť, že v závislosti od vzorky a toho, čo sa má vyhodnotiť, sa pripraví vhodný roztok orceínu. Napríklad sa k roztoku orceínu A pridáva napríklad 1N kyselina chlorovodíková, aby sa sledovali deliace sa bunky.

Zatiaľ čo sa roztok orceínu B rozpustí v 45% kyseline octovej. Táto technika je skrátenou metódou farbenia a všeobecne sa používa ako doplnok k farbeniu chromozomálnych štruktúr.

Záverečné myšlienky

Od minulých storočí sa lišajníky ako Lecanora, Parmelia a Umbilicaria nachádzajú v krajinách amerického kontinentu, ako je Argentína, ktoré sú veľkými zdrojmi orceínu. V tom čase boli veľkými producentmi orchideí aj európske oblasti, ako sú Kanárske ostrovy.

To sa vyviezlo do ďalších miest toho istého kontinentu, ako je Janov a do krajín, ako je Anglicko, zatiaľ čo Holandsko monopolizovalo výrobu lakmusového orchestra. Preto bol tento lišajník neskôr redukovaný až do vyhynutia.

To viedlo k tomu, že orchilka bola nahradená inými rastlinami s vlastnosťami farbiva. Výskyt syntetických farbív však prispel k ukončeniu obchodu s týmto lišajníkom s obsahom orceínu.

To bolo možné vďaka Cocqovi, ktorý v roku 1812 opísal syntézu orceínu, vediac, že ​​je syntetizovaný fenolickou zlúčeninou nazývanou orcinol. Napriek tomu je dnes prírodný orceín stále uprednostňovaný.

Dôvodom môže byť skutočnosť, že orcinol je veľmi silne zapáchajúca zlúčenina a jeho dlhodobá expozícia by mohla znamenať zdravotné riziká, ako je strata schopnosti detekovať zápach. Tieto poškodenia hypofýzy by mohli ísť z dočasného na trvalé, čím je vystavenie väčšie.

Referencie

1. Ortega L, García R, Morales C. «Aplikácia laku produkovaného hubami na degradáciu mikrobiologických farbív (orceín a kryštalická fialová).» Mladí ľudia vo vede 2. 2015; 633-637. K dispozícii na: jovenesenlaciencia.ugto.mx.
2. Barcat J. Orceína a Elastic Fibers. Medicine (Buenos Aires) 2003; 63: 453 - 456. K dispozícii na: Medicinabuenosaires.com.
3. Silva J, Rojas M, Araya C, Villagra F. Histologické charakteristiky palca lietajúcej tváre palca u čílskych jedincov s daktylogramovým vyblednutím. J. Morphol. 2017; 35 (3): 1107 - 1113. K dispozícii na: scielo.conicyt.
4. Orrillo M, Merideth B. „Reprodukčná biológia a cytogenetika zemiakov.“ Medzinárodné centrum pre zemiaky (CIP). Technická príručka. Dostupné na: research.cip.cgiar.org/
5. Flores F. «Zber, kultivácia a dozrievanie oocytov krav (bos taurus) v bolívijskej vysočine in vitro." , Národná univerzita v Altiplane, Puno-Peru; 2012.K dispozícii na: repositorio.unap.edu.pe.
6. Duque C. Polytenické chromozómy: pohľad na jav endoreduplikácie. Kolumbijská národná univerzita, Medellín; 2016. K dispozícii na: edu.
7. Camarena F. Bunková a molekulárna biológia. Praktická príručka. Autonómna univerzita v Baja California. 2017. K dispozícii na: pez.ens.uabc.mx.
8. FAO / IAEA. 2018. Manuál na rozlíšenie divých a chovaných muchy Anastrepha ludens (Loew) od normálneho kmeňa („bi-sexual“) a geneticky založeného kmeňa (Tapachula-7), ožiarený a neožiarený. Guillen Aguilar JC, López Muñoz L, López Villalobos EF a Organizácia Spojených národov pre výživu a poľnohospodárstvo Soto García DN. Rím, Taliansko, 95 strán.
9. Orceínu. (2018, 30. novembra). Wikipedia, slobodná encyklopédia. Dátum konzultácie: 03:38, 31. júla 2019 es.wikipedia.org.
10. Merck Millipore. (2018, 16. júla). Orceínová mikroskopia pre Certistain mikroskopiu. K dispozícii na adrese: merckmillipore.com