LAKTOFENOLOVÁ MODRÁ: VLASTNOSTI, ZLOŽENIE, PRÍPRAVA, POUŽITIA - CHÉMIA - 2025

Laktofenolu modré alebo modré bavlny sa pripraví jednotlivé vlastnosti farbiva. V klinických laboratóriách sa používa najmä na farbenie plesňových štruktúr, ako sú hýfy, zárodočné skúmavky a spóry.

Pomáha pri predpokladanej alebo predbežnej diagnostike určitých húb, vždy sa však odporúča posilniť diagnostiku konkrétnejšími testami, ako sú napríklad biochemické alebo sérologické testy.

Grafické znázornenie zafarbenia laktofenolovej modrej, náteru zafarbeného laktofenolovou modrou, mikroskopicky namontovaného prípravku. Zdroj: public Domain Pictures.net/https://www.youtube.com/watch?v=P-kiFFZ7NvU /https://www.youtube.com/watch?v=wSZ77T5L6e8

Laktofenolová modrá sa skladá z kyseliny mliečnej, anilínovej modrej, glycerínu, fenolu a deionizovanej vody. Môže sa pripraviť v laboratóriu alebo sa dá kúpiť na priame použitie. Akonáhle je pripravený, je pripravený na použitie, v žiadnom prípade by sa nemal riediť, pretože táto akcia prinesie hrozné výsledky.

Koncentrácia jeho zložiek ho robí ideálnym na farbenie fungálnych štruktúr, pretože fenol vylučuje sprievodnú bakteriálnu mikrobiotiku, zatiaľ čo kyselina mliečna vytvára ochranný film okolo fungálnej štruktúry. Nakoniec má anilínová modrá afinitu priľnúť k štruktúram huby.

základ

S laktofenolickou modrou sa uskutoční jednoduché vyfarbenie fungálnych štruktúr určitej mykologickej kultúry. Nazýva sa to jednoduché, pretože používa iba jedno farbivo.

Laktofenolová modrá, okrem zafarbenia, pôsobí tiež ako čírenie vzorky, vďaka spoločnému pôsobeniu kyseliny mliečnej a fenolu, fenol sa okrem toho správa ako mordant a súčasne bráni lýze mikroorganizmov inhibíciou hydrolytických enzýmov, ktoré môžu byť prítomné.

Kyselina mliečna si zachováva morfológiu štruktúr huby.

Na druhej strane má anilínová modrá vlastnosť priľnúť alebo sa viazať na štruktúry obsahujúce chitín. Štruktúry sú zafarbené svetlo modrej.

Je potrebné poznamenať, že bunková stena hubových mikroorganizmov, najmä plesní, obsahuje chitín, a preto je toto farbivo ideálne na farbenie týchto mikroorganizmov.

vlastnosti

Roztok laktofenolovej modrej je silne kyslé, mierne zakalené vodné farbivo so svetlo modrou farbou. Ak je uchovávaný pri teplote 15 ° C až 25 ° C, zostáva stabilný. Fľaša musí byť riadne uzavretá. Dráždi a leptá pokožku a sliznice.

zloženie

Vzorec na prípravu jedného litra laktofenolickej modrej je nasledujúci:

- 250 g / l kyseliny mliečnej

-1,0 g / l anilínovej modrej alebo metylovej modrej

-500 g / l glycerínu

- 250 g / l fenolu

- 250 ml deionizovanej alebo destilovanej vody.

Fenol sa rozpustí v predtým zahriatej vode. Pridá sa kyselina mliečna a glycerín a veľmi dobre sa premiešajú. Nakoniec sa anilínová modrá rozpustí. Znovu sa mieša a je pripravený na použitie.

Dávky na prípravu 80 ml roztoku laktofenolovej modrej sú:

-20 g fenolových kryštálov

-20 ml kyseliny mliečnej

-40 ml glycerínu alebo glycerolu

-20 ml destilovanej vody.

použitie

Používa sa na farbenie plesňových štruktúr a prostredníctvom morfologických charakteristík pozorovaných na mikroskopickej úrovni je schopný určiť predpokladanú diagnózu huby.

proces

Farbenie plesňových štruktúr kultúr

- Vezmite čistú kultúru huby, ktorej štruktúra sa má dodržať.

- Pracujte prednostne v laminárnom odsávači pár alebo pod zapaľovačom pomocou masky a rukavíc, pretože je potrebné dodržiavať normy biologickej bezpečnosti, pretože väčšina foriem sa ľahko šíri do životného prostredia, a preto predstavuje nebezpečenstvo pre prevádzkovateľa.

- Na podložné sklíčko sa položí kvapka laktofenolovej modrej.

- Vyrežte malý štvorec kvalitnej lepiacej pásky a opatrne ho prilepte na koniec studenej sterilizovanej platinovej rukoväte.

- Rukoväť platiny sa priblíži k naj povrchnejšej časti plesňovej kolónie a kultúra sa dotýka veľmi opatrne, presne tam, kde je umiestnená lepiaca páska.

- Potom sa prenesie na sklíčko a umiestni sa priamo na kvapku laktofenolovej modrej, pričom je potrebné dbať na to, aby bola páska dokonale roztiahnutá a namazaná farbivom. Rukoväť platiny je veľmi jemne odstránená.

- Ďalšia kvapka laktofenolovej modrej sa umiestni na pásku a na vrchnej časti krycieho sklíčka. Nepoužívajte príliš veľký tlak, aby nedošlo k zničeniu štruktúr huby, pretože sú mimoriadne krehké. Farbivo by malo pôsobiť približne 3 až 4 minúty.

- Po uplynutí tejto doby je prípravok pripravený na pozorovanie pod mikroskopom pri 10-násobnom alebo 40-násobnom zväčšení. Ak sa vyžaduje pozorovanie 100X, mal by sa použiť ponorný olej.

- Štruktúry huby sú vo všeobecnosti sfarbené na modro, s výnimkou dematiaceóznych húb, ktoré si zachovajú svoju charakteristickú hnedú farbu tohto typu huby.

Priame farbenie biologických vzoriek

Ak sa vyžaduje okrem iného študovať priamu biologickú vzorku, ako je napríklad sputum, hnis, exsudáty, sekréty, musia mať predchádzajúci postup na dekontamináciu vzorky. Na tento účel sa používa roztok NaOH.

V prípade vzoriek vlasov sa tieto môžu farbiť priamo.

Niekoľko postihnutých chĺpkov (celkom 10) sa odobralo z predpokladaných lézií tinea capitis (alopecické oblasti) a umiestnilo sa na sklíčko (3 až 4 chĺpky na sklíčko). Niekoľko kvapiek laktofenolickej modrej sa umiestni na vrch a okamžite sa zakryjú krycím sklíčkom.

Uchopte sklíčko za kliešte a jemne zahrievajte nad horákom. Za týmto účelom urobte 3 až 4 rýchle prechody plameňom. Pozorujte mikroskop pri 40-násobku a vyhľadajte spory mimo alebo vo vlasoch (ectothrix alebo endothrix). Ak je to potrebné, pridajte imerzný olej a sledujte pri 100X.

Farbenie zárodočných skúmaviek pri identifikácii

Po inkubácii predpokladanej kultúry Candida albicans v ľudskom sére počas 2 až 4 hodín pri 37 ° C sa odoberie časť roztoku a zafarbí sa laktofenolickou modrou. Prípravok sa pozoroval pod mikroskopom pri 40X. Je prítomná zárodočná skúmavka a blastospory sa zafarbia jasne modro.

Karta bezpečnostných údajov laktofenolu

Národná asociácia pre požiarnu ochranu (NFPA), vytvára kartu bezpečnostných údajov pre chemické látky z hľadiska rizika, ktoré predstavuje podľa rôznych hľadísk, ktoré sú symbolizované farebným kosoštvorcom a číslom v rozmedzí od 0 do 0 Four.

Zdravotné riziká sú označené modrou farbou, horľavosťou červenou, nestabilitou alebo reaktivitou žltou farbou a akékoľvek osobitné nebezpečenstvo bielou farbou.

zdravie

Zdravotné riziko, ktoré predstavuje laktofenolová modrá podľa NFPA, je úroveň 3. To znamená, že látka je pri požití alebo pri priamom kontakte s pokožkou alebo sliznicou mimoriadne nebezpečná.

Je to vysoko leptavá a dráždivá látka.

Pri kontakte s pokožkou a sliznicami spôsobuje vážne popáleniny.

Pri požití môže spôsobiť bolesti hlavy, zmätenosť, letargiu, bezvedomie, zastavenie dýchania a dokonca smrť.

zápalnosť

Podľa NFPA je laktofenolová modrá hodnotená ako horľavosť na úrovni 1. To znamená, že horí iba vtedy, ak je zahrievaný nad 94 ° C.

nestálosť

Uvedené podľa NFPA na úrovni 0 (nula) z hľadiska reaktivity. To znamená, že nehrozí žiadne riziko reaktivity, to znamená, že ide o chemicky stabilnú látku.

Osobitné nebezpečenstvá

Nepredstavuje žiadne ďalšie osobitné riziká.

Referencie

1. Laboratórium SAR. Laktofenolová modrá. 2010. K dispozícii na: labsar.com.
2. Aplikované laboratórium klinickej chémie. Laktofenolová modrá. 2015.K dispozícii na: cromakit.es
3. Merck Laboratories. Mikroskopia laktofenolovej modrej v roztoku. 2017. Dostupné na: Users / Equipo / Downloads
4. Núdzová karta. Roztok laktofenolovej modrej na farbenie hubami. Universidad Pontificia Javeriana, Bogota Kolumbia. 2014.K dispozícii na: javeriana.edu.co
5. González M, Diamont D, Gutiérrez B. Technika na farbenie štruktúr húb rastlinnými farbivami ako neznečisťujúcou alternatívou. Bioagro, 2011; 23 (1): 65 - 68. K dispozícii na adrese: Redalyc.
6. Laboratórne Himedia. Lactophenol Cotton Blue. 2017. K dispozícii od: himedialabs.com
7. Wanger A, Chavez V, Huang R, Wahed A, herec J, Dasgupta A. Biochemické testy a farbiace techniky na mikrobiálnu identifikáciu. Science Direct, 2017; 61-73. K dispozícii od: Elsevier